解毒化瘀含药血清抗白血病细胞及白血病多药耐药细胞的体外实验研究

目的:以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法:采用MTT比色法,选择白血病细胞K562、HL-60及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A、HL-60/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果:解毒化瘀含药兔血清对K562、HL-60及K562/A、HL-60/A均有明显的抑制作用,且对其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论:解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用的研究

目的研究解毒化瘀方对白血病K562／A02细胞的耐药逆转作用。方法应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀方的兔血清,以MTT法检测经含药血清处理后K562／A02细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化法检测含药血清对K562／A02耐药细胞内柔红霉素（DNR）潴留的影响。结果解毒化瘀方含药血清中、高剂量组可增加化疗药物对K562／A02细胞的细胞毒作用,明显提高K562／A02耐药细胞内DNR的浓度（P〈0．05）。结论解毒化瘀方含药血清能逆转K562／A02细胞的耐药性,并呈剂量依赖性。     

解毒化瘀方含药血清抑制白血病K562细胞增殖作用的研究

目的：研究解毒化瘀方对白血病K562细胞增殖的影响。方法：应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀方的兔血清，用台盼蓝拒染、MTT法、流式细胞仪检测含药血清对K562细胞增殖的影响。结果：台盼蓝拒染试验和MTT法细胞毒作用均显示含药血清可抑制K562细胞的增殖，抑制率随含药血清浓度的增高而增高，流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示，中、高剂量含药血清组G1、G2期DNA含量明显减低，凋亡细胞百分率较高。结论：解毒化瘀对白血病K562细胞增殖具有抑制作用．     

解毒化瘀药逆转白血病K562/A02细胞多药耐药作用的研究

目的:探讨解毒化瘀中药复方含药血清对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用。方法:应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀药的兔血清,以MTT法检测经含药血清、干扰素、川芎嗪处理后K562/A02细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测K562/A02耐药细胞内柔红霉素(DNR)的潴留情况。结果:MTT结果显示,3组药物对K562/A02细胞的耐药逆转倍数分别为9.30倍、5.27倍和3.36倍,其耐药逆转率均在70%以上;流式细胞仪检测结果显示3种药物均可明显增加K562/A02细胞内DNR的浓度,解毒化瘀药含药血清作用最强,与川芎嗪组相比具有显著差异(P<0.01),但与干扰素组相比无明显差异(P>0.05)。结论:3种药物均对K562/A02细胞的耐药具有逆转作用,逆转强度依次为解毒化瘀药含药血清、干扰素、川芎嗪。     

解毒化瘀方对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响

目的:探讨解毒化瘀方中药血清对白血病K562/A02耐药细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响。方法:采用MTT法检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞毒作用,流式细胞仪检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞内化疗药物浓度的影响,用Western blot法检测解毒化瘀方中药血清对NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达的影响。结果:解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,能够增加K562/A02细胞内化疗药物的浓度,下调K562/A02细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,从而降低NF-κB信号。结论:解毒化瘀方中药血清能够逆转K562/A02细胞耐药,其耐药逆转机制可能与下调K562/A02细胞NF-κB信号表达有关。     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

解毒化淤药血清对K562/A02细胞P-gp、Bcl-2影响的研究

目的探讨解毒化淤中药血清对白血病K562/A02耐药细胞P-gp、Bcl-2基因表达的影响。方法应用血清药理学方法制备解毒化淤药的兔血清,以MTT法检测含药血清处理后K562/A02耐药细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化方法检测P-gp、Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示不同浓度中药血清对K562/A02细胞均有耐药逆转作用,其逆转倍数随剂量增加而增大;免疫组化结果显示解毒化淤药中药血清能够下调K562/A02细胞P-gp和Bcl-2的表达。结论解毒化淤药逆转K562/A02细胞耐药的机制可能是通过下调P-gp、Bcl-2的表达而逆转耐药的。     

解毒化淤药对白血病K562/A02、HL60/Adr细胞P-gp、Bcl-2、P53基因表达影响的研究

目的探讨解毒化淤中药复方含药血清对白血病K562/A02、HL60/Adr细胞P-gp、Bcl-2、P53基因表达的影响。方法应用中药血清药理学方法制备解毒化淤药的兔血清,以MTT法检测经含药血清处理后K562/A02、HL60/Adr细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化方法检测P-gp、Bcl-2、P53耐药基因表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度解毒化淤含药血清对K562/A02、HL60/Adr细胞均有耐药逆转作用,其逆转倍数随剂量增加而增大;免疫组化结果显示解毒化淤药含药血清能够降低K562/A02、HL60/Adr细胞耐药基因P-gp和抗凋亡基因Bcl-2的表达,但对P53基因无影响。结论解毒化淤方含药血清逆转白血病K562/A02、HL60/Adr细胞耐药的机制是降低P-gp和bcl-2的表达而逆转耐药的,对P53基因表达无影响。     

解毒化瘀方含药血清对K562/A02细胞凋亡抑制蛋白及核周因子κB表达的影响

目的 探讨解毒化瘀方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡抑制蛋白survivin基因和核周因子κB（NF κB）信号基因表达的影响。方法 将K562/A02细胞分为6个组,分别加入等体积牛血清,兔血清,高、中、低剂量中药血清和干扰素,并设K562敏感细胞株为对照。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT PCR）法检测解毒化瘀方含药血清处理后K562/A02细胞survivin的表达;Western blot法检测NF κB/P65、NF κB/P50、IκBα的表达。结果 survivin耐药基因在K562/A02细胞中高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,高、中剂量中药血清组和干扰素对照组能够survivin的表达明显降低。NF κB在K562/A02耐药细胞亦呈高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,P65、P50和IκBα的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组最明显,且高剂量组P65、P50表达下降优于干扰素对照组（P<005）,IκBα下降与干扰素对照组相当（P>005）。结论 解毒化瘀方能够降低K562/A02细胞NF κB信号基因的表达,影响NF κB survivin途径逆转耐药。     

白血病K562/A02细胞Mdrl基因的表达及解毒化淤药干预作用研究

目的 探讨解毒化淤药含药血清对白血病K562/A02细胞Mdrl耐药基因表达的影响.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化淤药含药血清处理后K562/A02细胞Mdrl基因的表达,并与干扰素作对照.结果 解毒化淤药含药血清能够降低K562/A02细胞Mdrl基因的表达.结论 解毒化淤药含药血清通过降低K562/A02细胞Mdrl耐药基因的表达,逆转白血病细胞耐药.     

雄黄诱导K562细胞凋亡的研究

目的检测雄黄诱导Ｋ５６２细胞的能力。方法应用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。利用ＦＣＭ分析细胞周期并测定Ｋ５６２细胞线粒体膜ＡＰＯ２．７蛋白表达。结果雄黄可以诱导Ｋ５６２细胞产生凋亡现象,并导致Ｓ期细胞降低。结论雄黄具有诱导Ｋ５６２细胞凋亡的作用     

药根碱诱导白血病K562细胞凋亡的研究

 目的 研究药根碱对白血病K562细胞的生长抑制及凋亡作用,探讨药根碱诱导K562细胞凋亡的可能途径。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药根碱对K562细胞的生长抑制作用;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法、碘化丙啶(PI)染色法观察药根碱对K562细胞凋亡的诱导作用;利用活细胞高内涵成像系统检测细胞内线粒体膜电位以及氧自由基的变化。结果 药根碱可明显抑制K562细胞的生长(IC₅₀ = 90 μmol·L-1 )。AO/EB染色可明显看到凋亡细胞和死亡细胞。PI染色显示,药根碱使K562细胞周期阻滞在G₀/G₁期。活细胞高内涵成像系统检测结果显示,37、75、150 μmol·L-1 药根碱作用后,细胞内活性氧荧光强度由1 305.1±15.3上升为26 243.6±165.3、30 106.7±153.2、34 682.6±174.1,线粒体膜电位由1 025.3±20.1下降为484.6±10.2、202.9±6.3、153.1±5.3。结论 药根碱能明显抑制白血病K562细胞生长,促进K562细胞凋亡,且其可通过增加细胞内活性氧、降低线粒体膜电位这一线粒体信号传导通路来诱导K562细胞凋亡。     

甲异靛对K562细胞凋亡的影响

目的：研究甲异靛对人慢性粒细胞白血病细胞系Ｋ５６２细胞的影响，探讨甲异靛治疗慢性粒细胞白血病的作用机理。方法：应用剂量反应曲线，台盼蓝拒染实验，细胞形态学，ＤＮＡ电泳，流式细胞仪及ＴＵＮＥＬ标记等多种方法观察甲异靛对Ｋ５６２细胞的作用。结果：甲异靛能明显抑制Ｋ５６２细胞的增殖，并同时诱导Ｋ５２６细胞凋亡。结论：甲异靛治疗ＣＭＬ的机理可能与甲异靛引起白血病细胞受抑和细胞发生凋亡有关。     

吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化。结果MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6h)、(32.87±4.89)%(12h)、(41.30±1.91)%(24h)。结论吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。     

芸香苷诱导K562细胞凋亡机制

目的研究芸香苷诱导白血病K 562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达。方法体外培养白血病K 562细胞,M TT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/P I双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TR IZOL试剂提取K 562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×1-0 5m o l/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,W estern b lotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。结果芸香苷浓度为2×1-0 5、4×10-5、8×10-5m o l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K 562细胞44h后,应用M TT比色法计算IC50为4×1-0 5m o l/L;4×10-5m o l/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/P I双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达;W estern B lotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论芸香苷诱导K 562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一。     

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。     

靛玉红对慢性髓性白血病K562细胞增殖的抑制作用

目的:改善靛玉红的溶解性,探讨其对慢性髓性白血病K562细胞增殖的抑制作用及机制.方法:采用二甲基亚砜为复溶剂增加靛玉红的溶解度,用MTF法和流式细胞法等技术检测靛玉红对K562细胞生长的抑制作用.结果:靛玉红在细胞培养液中的最高药物浓度为10 mg·L-1,与阴性对照组比较,在最高药物浓度作用下K562细胞增殖并未受到抑制.结论:靛玉红并非直接抑制白血病细胞的生长,可能通过靛玉红次级代谢产物起作用.     

番茄红素诱导K562细胞凋亡及机制的探讨

目的:研究番茄红素(lycopene)对人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的影响,探讨其凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(0,20,40,60μmol·L-1)的番茄红素作用K562细胞24,48,72 h,0μmol·L-1番茄红素为空白组。采用MTT法检测不同浓度的番茄红素作用24,48,72 h时K562细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞凋亡率;RT-PCR法及Western blot法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表达。结果:与空白组比较,细胞增殖抑制率随番茄红素浓度升高而明显升高,细胞凋亡率逐渐明显增加,随番茄红素浓度明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Caspase-3mRNA及蛋白的表达明显升高,均具有统计学差异(P0.05)。结论:番茄红素诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡,其凋亡机制与下调Bcl-2及上调Caspase-3表达有关。     

Molecular mechanism of matrine-induced apoptosis in leukemia K562 cells

Matrine, a low toxic alkaloid purified from the Chinese herb Kushen, has been reported to induce apoptosis in leukemia K562 cells. In this study, the mechanism underling this apoptotic event was investigated. Treatment of K562 cells with matrine resulted in inhibition of cell survival more significantly than treatment of non-cancer fibroblast NIH3T3 cells. When K562 cells were incubated with matrine in higher than 0.2 mg/ml doses for 48 hours, the apoptotic cells were increased and both poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and caspase-3 were cleaved in a dose dependent manner. General caspase inhibitor (z-VAD-fmk) or caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) almost completely suppressed matrine-induced apoptosis. In addition, matrine increased proapoptotic protein bax and caused the release of cytochrome C. Taken together, the results suggest that matrine induces a cytochrome C-mediated, caspase-dependent apoptosis.