BDNF对诱导分化的SH-SY5Y细胞G1期相关蛋白表达的影响

研究不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时对G1期细胞周期相关蛋白表达的影响。采用全反式维甲酸(RA)和低(1ng/ml)、中(10ng/ml)、高(100ng/ml)三种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞。以实时定量RT-PCR法检测G1期细胞周期相关蛋白(包括cdk4,cdk6,cyclin D1,Cyclin E,p16和p27)的mRNA水平的表达变化。结果显示:不同浓度的BDNF处理后,Cdk4mRNA的表达水平均低于未分化细胞组(P<0.05);Cdk6和Cyclin D1的mRNA表达水平与RA组比较显著降低(P<0.05),Cyclin E和p16的mRNA表达水平仅在高浓度BDNF处理后明显降低,与未分化组比较P<0.05,p27的mRNA表达水平无显著变化。以上结果提示BD-NF在诱导SH-SY5Y细胞分化的同时无意促使其再进入细胞周期。同时,用RA预处理5d后改换BDNF培养SH-SY5Y细胞,可使细胞展现出成熟神经细胞的形态,是体外研究某些脑疾病的理想细胞模型。     

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。     

红景天苷对小鼠MSCs的增殖及其细胞周期的影响

目的本研究探讨了不同浓度红景天苷通过ERK信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期变化的影响及机制。方法实验分为对照组(D-MEM/F-12完全培养液)、不同浓度红景天苷(5~100μg/m L)诱导组和阻断组(5~100μg/m L+30μg/L PD98059),利用CCK8法、流式细胞术及Western blot分别检测ERK信号通路阻断前后细胞抑制率、细胞周期及其相关蛋白的表达。结果 10μg/m L诱导组和阻断组均能抑制细胞增殖,且5μg/m L(P0.01)、25μg/m L(P0.05)和100μg/m L(P0.05)诱导组对细胞抑制显著高于阻断组。25μg/m L诱导组和阻断组G_0/G_1期细胞比例均增加,细胞周期阻滞于G0/G1期。诱导组和阻断组cyclin A和cyclin D1蛋白的表达与对照组比较均下调,P21蛋白的表达上调。阻断组cyclin A蛋白的表达与诱导组比较明显下调(P0.01);50和100μg/m L诱导组与阻断组相比cyclin D1蛋白表达显著下调,P21蛋白的表达显著上调(P0.01)。结论红景天苷能通过调节细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠MSCs细胞的增殖和细胞周期的改变。     

细胞周期蛋白E在哮喘大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系

目的:通过测定哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达,研究cyclin E在哮喘气道重塑中的作用。方法:20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用鸡卵清白蛋白(OVA)溶液致敏及激发复制哮喘模型。HE染色观察气道炎症;图像分析测量气道管壁厚度;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;免疫组化法检测cyclin E的表达情况;实时定量(real-time)RT-PCR测定肺组织中cyclin E mRNA水平表达;Western blotting法检测肺组织中cyclin E蛋白的表达。结果:哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组增加(P0.01);哮喘组外周血单个核细胞S期、S+G2/M期百分率均较对照组增加,而G0/G1期百分率较对照组降低(均P0.01);哮喘组肺组织中cyclin E mRNA和蛋白水平的相对表达量较对照组高(均P0.01);肺组织中cyc-lin E蛋白的相对表达量与支气管管壁厚度呈正相关(P0.01)。结论:Cyclin E在哮喘大鼠肺组织中表达增加,其表达的上调可使细胞周期的G1期缩短,进而可能通过促进细胞的分裂增殖而参与哮喘气道重塑的发生发展。     

miR-221促进神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞N-MYC表达和细胞增殖

目的探讨过表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中N-MYC表达及其细胞增殖能力的影响。方法构建miR-221过表达慢病毒载体并建立稳定转染细胞系,实验设未处理组、空载组和miR-221组,以实时定量荧光PCR(RT-q PCR)检测miR-221表达;以RT-q PCR和Western blot检测N-MYC mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;CCK8法检测细胞增殖。结果经测序证实慢病毒载体构建成功,与未处理的SH-SY5Y细胞相比,稳定表达miR-221的SH-SY5Y细胞(miR-221组)miR-221表达升高约7倍(P0.01);miR-221组N-MYC mRNA和蛋白表达水平较未处理组显著增多(P0.01);miR-221组G0/G1期细胞比例明显减少(P0.05),S期细胞比例显著增多(P0.05);miR-221组细胞增殖能力明显增强(P0.01)。结论过表达miR-221能够上调神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中N-MYC的表达,并可能通过促发细胞从G0/G1期向S期转化促进细胞增殖。     

石蒜碱通过下调细胞周期蛋白D1表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨石蒜碱对胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响。方法 CCK-8法检测(0、2、4、8)μmol/L石蒜碱对SGC-7901细胞增殖的影响,确定石蒜碱的半数抑制浓度(IC50)。以IC50的石蒜碱处理SGC-7901细胞48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)mRNA水平,Western blot法检测cyclin D1蛋白水平。结果石蒜碱能够明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈浓度、时间依赖关系。石蒜碱处理24、48 h,对胃癌细胞的IC50分别为(20.85±2.36)μmol/L和(13.29±1.28)μmol/L。采用13μmol/L石蒜碱处理SGC-7901细胞48 h,可将其细胞周期阻滞在G0/G1期并促进细胞凋亡,且细胞cyclin D1 mRNA和蛋白水平明显降低。结论石蒜碱能够抑制SGC-7901胃癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调cyclin D1表达有关。     

人参皂苷Rg1抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞增殖

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的调控作用及其对活化的BV-2小胶质细胞增殖的调控作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞并分为空白对照组、LPS不同时间(1,3,6,8,12 h)处理组及Rg1不同浓度(10、20和50μmol/L)预处理组。采用Western blotting检测细胞增殖相关因子PCNA蛋白和cyclin D1蛋白的表达变化;RT-PCR检测细胞增殖相关因子PCNA和cyclin D1 mRNA的表达变化;免疫荧光染色法观察细胞内cyclin D1蛋白表达变化。采用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 LPS诱导BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1mRNA和蛋白表达上调,并呈时间依赖性;不同浓度Rg1预处理下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的mRNA和蛋白表达。结论Rg1通过下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的表达水平来调控细胞周期进而抑制活化的小胶质细胞的增殖。     

D类细胞周期素在细胞周期中的作用

细胞周期进程由周期性表达的细胞周期素和细胞周期素依赖性激酶推动完成。 Cyclin D在 G1 期中期开始表达 ,是最早合成的细胞周期素 ,它与 Cdk4或 Cdk6形成的活性复合物 ,不仅可促进 p Rb的磷酸化 ,也可隔离P2 7对 cyclin E- Cdk2活性的抑制 ,使细胞顺利越过 G1 期进入 S期。除此之外 ,cyclin D过度表达还可抑制细胞增殖 ,在细胞分化和衰老过程中发挥重要作用     

p57~(Kip2)氨基末端结构域二聚化抑制细胞周期蛋白D1-Cdk4激酶活性

据研究证明 ,在真核生物细胞周期中 ,细胞周期蛋白 D( D1 ,D2 ,D3)和细胞周期蛋白 E与控制细胞 G1期进展和进入 S期。Cdks调控哺乳动物G1期进展。这些复合物通过 CAK( Cdk活性激酶 ,本身是一种 Cdk相关激酶复合物 )激活 Cdk亚基磷酸化 ,细胞周期蛋白 - Cdk复合物可通过磷酸化p RB调节细胞周期 ,并因此抑制细胞周期调节物。进一步调节细胞周期水平取决于与之结合和抑制细胞周期蛋白 - Cdk复合物的催化活性蛋白。这些抑制物 ( Ckis)诱导细胞周期阻止其与抗增值信号反应以及诱导细胞分化。 Cdk分为两家族 ,其中Ink4家族包括 p1 5 Ink…     

灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生

目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.     

碱性成纤维细胞生长因子及胰岛素样生长因子1对精原干细胞增殖凋亡影响的机制

文题释义：碱性成纤维细胞生长因子：是细胞生长和分化的重要调节因子,具有促血管生成、细胞增殖、细胞趋化、细胞迁移等活性,在细胞分化和机体发育过程中发挥重要作用。碱性成纤维细胞生长因子通过与细胞膜表面的特异性配体结合,进而引发细胞内的一系列级联反应,从而产生各种生物学效应。 胰岛素样生长因子1：是多功能细胞增殖调控因子,主要分布在肝脏中,其与胰岛素样生长因子2、胰岛素及其受体一起构成了胰岛素样生长因子家族,其对细胞生长和代谢具有多效作用。 背景：生长因子作为体外细胞培养和体内细胞生长及增殖必需的调节因子,一直被广泛的关注。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与胰岛素样生长因子1(insulin-like growth facter,IGF-1)联合作用对小鼠精原干细胞增殖、凋亡的影响。 方法：从6-8 d龄昆明雄性小鼠睾丸内分离培养精原干细胞并进行鉴定。将精原干细胞接种于经丝裂霉素C处理过的胚胎成纤维细胞饲养层上,分组干预：对照组加入正常DMEM培养基进行培养;bFGF、IGF-1组分别加入含20 μg/L bFGF、20 μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养;bFGF+IGF-1组同时加入含20 μg/L bFGF及20 μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养。采用CCK-8、EDU染色法分别检测精原干细胞增殖活性,流式细胞仪检测精原干细胞生长周期和细胞凋亡情况,Western blot检测增殖和凋亡相关蛋白PCNA、Bax、Bcl-2的表达。 结果与结论：①与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组吸光度值显著升高,与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组吸光度值进一步升高(P < 0.05),EDU染色得到与CCK-8实验一致的结论;②bFGF+IGF-1组S+G₂/M期细胞比例明显高于其他3组(P < 0.05),IGF-1组、bFGF组S+G₂/M期细胞比例高于对照组(P < 0.05);③与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组凋亡细胞降低;与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组凋亡细胞进一步降低;④与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平显著下降(P < 0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平均显著升高(P < 0.05)。与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平进一步下降(P < 0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平进一步升高(P < 0.05);⑤结果表明,bFGF、IGF-1通过上调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,二者联合作用效果最佳。 ORCID: 0000-0001-5693-3713(李宏) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人参环氧炔醇对体外培养施万细胞表达神经营养因子的影响及可能机制的研究

目的 研究人参环氧炔醇(PND)对体外培养施万细胞(SCs)神经营养因子(NTFs)表达的影响;并探讨其机制.方法 用含有不同浓度的PND培养液分别处理SCs,以免疫组织化学法检测PND对SCs NTFs表达的影响;放射免疫方法测定SOs内环磷酸腺苷(cAMP)水平的变化,并进行图像处理及统计学分析.结果 PND分别在2.5～20.0μmol/L及5.0～20.0μmol/L剂量范围内可分别促进体外培养SCs NGF及大脑衍生神经营养因子(BDNF) 的表达(P<0.05),在10μmol/L剂量对两者促进作用均最明显(P<0.01);在2.5～20.0μmol/L剂量范围内PND可提高体外培养SCs胞内cAMP含量(P<0.05),而在10μmol/L剂量作用最显著(P<0.01).结论 PND能明显促进体外培养SCs NGF、BDNF的表达和分泌;PND可提高SCs的胞内cAMP水平,并与PND促进体外培养SCs NGF、BDNF 表达之间存在相关性,提示其可能是PND提高体外培养SCs NGF、BDNF表达的调控机制及信号传导通路.     

5-脂氧合酶激活蛋白抑制剂MK886对人食管癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的 5-脂氧合酶活化蛋白（FLAP）抑制剂MK886对人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用2.5、5、10、20、40和80μmol/L的MK886干预体外培养的KYSE-150和TE-3细胞;xCELLigence RTCA系统实时测定细胞增殖抑制率,同时确定半数抑制浓度(IC₅₀)。流式细胞测量术检测食管癌细胞的细胞周期。Western blot检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）的增殖抑制率随着MK886浓度增加而增强（P<0.05）,KYSE-150组的IC₅₀浓度为29.11μmol/L,TE-3组的IC₅₀浓度为27.47μmol/L。当MK886浓度增加至25μmol/L时,食管癌细胞G₀/G₁期滞后增加明显（P<0.001）,MK886处理浓度增加到50μmol/L时,食管癌细胞G₂/M期增加明显（P<0.001和P<0.05）...     

盐酸石蒜碱对TPC-1细胞增殖和周期的影响

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制.方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC50.参照IC50,将对数生长期TPC-1细...     

Activation-induced T cell death occurs at G1A phase of the cell cycle

Peripheral negative selection of cycling T cells after TCR engagement and deletion of activated T cells after an immune response occur by an apoptotic process termed activation-induced cell death (AICD). The cross-linking of TCR-CD3 complex with anti-CD3 monoclonal antibody led to significant apoptotic cell death in peripheral blood T cells. To further define cell cycle restriction points for triggering AICD in T cells, we evaluated the association between cell cycle progression and death signal transduction. Simultaneous DNA / RNA quantification analysis revealed that T cells entering G1A phase of the cell cycle may acquire sensitivity to AICD. The activation of caspase-3 was induced when T cells entered G1A phase. Up-regulation of cyclin-dependent kinases (Cdk4 and Cdk6) and cyclin D3 was initiated in TCR-stimulated T cells entering G1A phase and expression of these markers steadily increased as T cells progressed from G1A into G1B phase. Interestingly, caspase-3 inhibitors could inhibit the up-regulation of these G1 cell cycle regulators and induce G0 / G1A arrest as well as the inhibition of AICD. On the basis of these results, AICD signals are most likely transduced into TCR-stimulated T cells entering G1A phase. T cells that fail to progress from G1A into G1B phase undergo AICD.     

部分背根切断后备用DRG卫星细胞NGF、BDNF和NT-3的表达变化

为探讨部分去背根猫备用背根节 ( L6 )卫星细胞 NGF、BDNF和 NT-3的表达变化 ,将成年雄猫 2 0只分为正常对照组和术后 3 d、术后 7d及术后 10 d三个实验组。实验组行单侧部分背根切断术 (切除一侧 L1 ～ L5,L7～S2 DRG,保留 L6 背根为备用根 )。取正常组一侧和术后 3 d、7d及 10 d实验组手术侧的 L6 DRG制作 2 0μm厚冰冻切片 ,行免疫组化反应 ;观察 NGF、BDNF和 NT-3在 DRG卫星细胞的分布 ,计数各组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量。结果发现 ,部分去背根术后7d和 10 d组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量较术后 3 d组和正常组者明显增高 ( P<0 .0 1)。表明 ,单侧部分背根切断导致备用 DRG卫星细胞的 NGF、BDNF和 NT-3的表达上调 ,这一变化可能与脊髓可塑性有关。     

碘酸钾对人甲状腺癌细胞系周期的影响

目的探讨碘酸钾(KIO3)对人甲状腺鳞癌细胞系SW579细胞周期/增殖、细胞周期素D1(cyclin D1)及增殖细胞核抗原Ki67 mRNA/蛋白水平的影响。方法 CCK8法检测不同浓度(0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2和10-1mol/L)KIO3对细胞增殖的影响;0、10-6或10-2mol/L KIO3处理细胞48 h后,用碘化丙啶单染流式细胞术检测细胞周期;用实时定量PCR和Western blot分别检测cyclin D1和Ki67的mRNA及蛋白水平。结果 10-6mol/L或10-2mol/L KIO3分别促进或抑制SW579细胞增殖(P0.05);10-6mol/L组细胞G1期比例下降(P0.05),S期比例增加(P0.05),而10-2mol/L组各期细胞比例发生相应变化(P0.05);同时,10-6mol/L KIO3显著上调细胞内的cyclin D1(P0.05)和Ki67(P0.05)mRNA水平;而10-2mol/L KIO3显著下调细胞内的cyclin D1和Ki67 mRNA及蛋白水平(P0.05)。结论 KIO3影响SW579细胞增殖及周期可能与其对cyclin D1和Ki67的调节作用及剂量有关。     

核心蛋白聚糖对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察核心蛋白聚糖(DCN)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,并对照观察丝裂霉素C(MMC)对HPF的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法: (1)取患者的翼状胬肉体部组织,采用组织块贴壁培养法原代培养HPF。(2)用0.01、0.1、1、5、10 mg/L DCN及 MMC分别作用于体外培养的HPF, 24 h、48 h、72 h后观察2种药物对HPF形态的改变,2种药物不同浓度分别作用12 h、24 h、48 h后 MTT法比较2种药物的作用效果,不同浓度的DCN作用48 h后免疫组织化学染色增殖细胞核抗原(PCNA)法检测细胞生长活性,流式细胞术测定细胞周期时相变化。结果: 10 mg/L DCN或1 mg/LMMC在12 h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。1~10 mg/L DCN 作用48 h使G₀/G₁期细胞百分比上升(P<0.05),5~10 mg/LDCN 作用48 h使G₂/M期和S期百分比(G₂/M%+S%)显著下降(P<0.05),实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。1~10 mg/L DCN能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论: 核心蛋白聚糖能抑制HPF的增殖,阻滞细胞在DNA合成前期。