PTEN/mTOR信号通路对大鼠神经干细胞分化成熟作用的研究

目的 探讨PTEN/mTOR信号通路对体外分离培养的大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化成熟的作用.方法 体外分离培养大鼠海马神经干细胞,收集第三代神经干细胞分别诱导分化0d、1d、3d和7d,倒置显微镜下观察细胞形态变化,应用Western blot和细胞免疫荧光检测第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)和反映雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性的磷酸化核糖体(P-S6R)蛋白的表达.结果 与0d组和1d组相比,3d组PTEN表达明显增加(均P＜0.01);7d组PTEN表达亦明显增加(P＜0.01和P＜0.05),而3d组和7d组P-S6R表达均明显下降(均P＜0.01).神经干细胞诱导分化后PTEN和P-S6R细胞免疫荧光染色均为阳性.结论 PTEN/mTOR信号通路参与调控神经干细胞的增殖分化和轴突生长,可能是导致神经干细胞分化成熟至一定阶段后增殖分化和轴突生长能力下降、不能建立有效的突触联系的重要原因之一.     

抑癌基因PTEN与髓母细胞瘤

PTEN/MMACI/TEPI是1997年3月以来发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,具有调节细胞生长、增殖、迁移、信号传导等多种效应。大量研究表明该基因的突变和失活与肿瘤发生及进展关系密切。髓母细胞瘤是发生于儿童最常见的恶性脑肿瘤,迄今对其发生、发展的分子及病理机制所知相当有限,现已知髓母细胞瘤的发生与10号染色体上的基因突变有关。定位于10号染色体上的抑癌基因PTEN在髓母细胞瘤中可发生突变和失活,但发生率不高。     

PTEN 在胶质瘤干/祖细胞中变异状态的研究

目的 为胶质瘤干/祖细胞来自神经干/祖细胞基因突变的推测寻找实验证据,以阐明二者之间的关联性.方法 体外培养的胶质瘤干/祖细胞和神经干/祖细胞,经免疫细胞化学法鉴定后分别进行RNA 提取、逆转录生成cDNA,以及针对PTEN 的逆转录聚合酶链反应;扩增产物进行正反双向测序并与野生型PTEN 基因序列比较肽链序列的异同.结果 神经干/祖细胞PTEN mRNA 序列无变异,胶质瘤干/祖细胞存在大量同义突变和少量异义突变,主要包括第1 号外显子第22 ~ 42 位碱基突变、第7 号外显子第712位碱基突变和第9号外显子第1192位碱基突变.致使PTEN 肽链上第8 ~ 14位氨基酸由原来的IVSRNKR突变为LRLICIF,第238 位的苯丙氨酸(F)突变为亮氨酸(L),第398 位的苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S).其中第8 ~ 14 位和第238 位氨基酸突变,使PTEN 与细胞膜的结合能力下降,细胞外信号难以转导进入细胞内;第398 位氨基酸突变则使PTEN 稳定性破坏,易被降解.结论 PTEN基因在胶质瘤恶性转化的早期即已失活,可能是胶质瘤形成的始动因素之一.     

脑胶质瘤的肿瘤抑制基因研究

脑胶质瘤的肿瘤抑制基因研究林松吴建中近年来，癌变机理的研究热点已从癌基因转移到肿瘤抑制基因（ＴＳＧ）。新的ＴＳＧ不断发现。生理情况下ＴＳＧ调节细胞生长、分化、抑制癌变，是细胞的正常基因。ＴＳＧ受到物理、化学和生物因素的作用失活，可使细胞生长失控。从１...     

NF2肿瘤抑制基因与中枢神经系统良性肿瘤

NF2肿瘤抑制基因定位于22q12。NF2蛋白是一种肌动蛋白相关蛋白,在细胞膜和细胞骨架之间起连接作用。NF2基因的失活通过插入、缺失和点突变(无义突变、错义突变),在神经鞘瘤(双侧和单侧)、脑膜瘤中的突变率为66％～30％,这些肿瘤的发生与NF2基因的失活有关。通过分析NF2基因的分子遗传学可进一步确定NF2的临床表型,有助于判断、处理,尤其是NF2家系的早期诊断。     

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS—7细胞，收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS—7细胞的条件培养液(COS—CM和NOV—CM)，作用于培养的HNSCs，^3H—TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖，免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果 (1)NOV—CM能明显促进HNSCs对^3H—TdR的摄入，说明NOV—CM能明显促进HNSCs的增殖，另外NOV—CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系；(2)免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示，NOV—CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。     

神经干细胞分化调节机制

哺乳类中枢神经系统 (CNS)干细胞是具有自我更新能力及多分化潜能的祖细胞。它可以产生CNS内不同种类细胞 (包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞 )。它在体内或体外 ,自行增殖 ,此即为“自我更新”。近年来 ,由于选择性培养方法的改进和选择性标记物检查CNS干细胞等技术的应用 ,使干细胞生物学取得了长足进步。现就CNS干细胞的细胞生物方法学及可分辨细胞系的发育机制进行综述     

人脑脊液对鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的:研究脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液对神经干细胞增殖分化的影响.方法:从大鼠脑组织中分离堵养神经干细胞,分别用人的两种脑脊液培养,分为试验组(血性脑脊液组)和对照组(脑积水清亮脑脊液组),于不同时问观察神经干细胞在两组脑脊液中的生长及增殖分化情况;并应用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经干细胞的分化进行鉴定和比较.结果:神经干细胞在两种脑脊液中均能存活并分化,部分细胞悬浮生长达十余天之久.加脑脊液培养第二天试验组NSE阳性细胞(神经元)的比例比对照组高,有统计学意义(P<0.05);培养第十天试验组GFAP阳性细胞(星形胶质细胞)的比例比对照组高,NSE阳性细胞的比例比对照组低,有统计学意义(P<0.05).结论:神经干细胞在脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液中均能存活、增殖和分化.两组脑脊液对神经干细胞分化的种类上有差异.     

PTEN基因变异与人脑胶质瘤预后的关系研究

目的探讨PTEN基因变异与人脑胶质瘤病理级别、生存期及病人年龄、性别、肿瘤生长部位的关系。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析（PCR-SSCP）结合银染技术和双重PCR技术．检测80例胶质瘤PTEN基因9个外显子点突变与基因缺失情况。结果15例（18．8％）发生基因点突变。27例（33．8％）存在基因缺失。PTEN基因失活与星形细胞瘤病理分级显著性相关（P〈0．05）。其中高度恶性胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）的突变率（31．3％）和缺失率（52．1％）明显高于低度恶性者（Ⅰ～Ⅱ级）（P〈0．05）；与病人性别、年龄及肿瘤生长部位无关。PTEN基因第5、6和8外显子是胶质瘤病人的热点基因突变区。PTEN基因失活的胶质瘤病人生存期明显低于基因正常者。结论人脑胶质瘤PTEN基因与病理分级和生存期关系密切。可作为一项独立的预后指标。     

腺病毒介导野生型PTEN促胶质瘤干/祖细胞自噬活性的实验研究

研究背景PTEN基因为影响中枢神经系统肿瘤细胞失活的抑癌基因,既往研究发现PTEN基因与细胞自噬活性密切相关。本研究旨在探讨胶质瘤干/祖细胞PTEN基因失活是否与其自噬活性降低有关。方法通过腺病毒介导的野生型PTEN基因转染胶质瘤干/祖细胞,免疫细胞化学染色和Western blotting法检测并比较转染前后胶质瘤干/祖细胞自噬活性。结果转染野生型PTEN基因后,胶质瘤干/祖细胞胞质内可见大量微管相关蛋白1轻链蛋白3阳性颗粒,经电子显微镜鉴定为自噬小体,而且转染PTEN基因的胶质瘤干/祖细胞自噬相关基因Beclin-1表达水平显著升高。结论胶质瘤干/祖细胞PTEN基因失活可能是其自噬活性降低的原因之一。     

细胞因子对神经干细胞增殖和分化的影响

神经干细胞是指具有分化为神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并能够提供大量脑组织细胞的细胞.以前的神经干细胞多来自于胎儿胚胎组织,不仅来源少,而且受到伦理道德的影响,所以其应用也受到了一定的限制.自Reynolds BA 1992从成年哺乳动物中培养出干细胞,提出成年人体内也存在干细胞以来,有关干细胞的研究已成为国内外学者研究的热点.由于成年神经干细胞来源广,不存在伦理道德问题,具有多分化潜能,能够携带外源性治疗基因,且可通过导入原癌基因获得永生细胞系等诸多优点,所以神经干细胞移植为神经退行性疾病的治疗提供了一个新的方向,其应用前景十分广阔.神经干细胞具有多分化潜能,尽管其分化方向主要取决于在神经管中的最初定位以及从神经管迁移后在大脑中的最终定位,但同时也受细胞外的环境因素影响.本文就近年来细胞外的环境因素对神经干细胞的增生和分化作一综述.     

FGF和EGF对神经干细胞增殖及分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内均存在的神经干细胞,成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对神经干细胞的增殖及分化有一定的影响,ＦＧＦ和ＥＧＦ及其受体在胚胎期和成年期表达各异。ＦＧＦ和ＥＧＦ能促进神经干细胞增殖,在不同的条件下对分化和作用不同。     

法舒地尔和RhoA沉默对神经干细胞增殖的影响

背景：Rho及其相关分子在神经轴突生长、分化、延伸及突触形成中起重要作用,阻断和抑制RhoA/ROCK通路可促进神经干细胞的增殖与生长。 目的：观察Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠神经干细胞增殖的影响。 方法：体外培养Wistar胎鼠神经干细胞,分6组干预：空白对照组,5,10,15,20 μmol/L 法舒地尔组,siRNA 沉默RhoA基因组。干预后第3天,采用RT-PCR,Western blot检测各组神经干细胞RhoA基因及蛋白的表达。应用MTT比色法观察神经干细胞增殖情况;采用流式细胞术测定神经干细胞周期分布的变化。 结果与结论：15,20 μmol/L 法舒地尔组、siRNA 沉默RhoA基因组神经干细胞RhoA基因及蛋白表达量较5,10 μmol/L 法舒地尔组、空白对照组明显降低(P < 0.05),细胞的生长速度较5,10 μmol/L 法舒地尔组、空白对照组明显增快(P < 0.05),细胞周期G0/G1期减少(P < 0.05),S期细胞数增多(P < 0.05)。当法舒地尔浓度增加到20 μmol/L时对细胞的作用并非随浓度的增加而增强,与15 μmol/L组的差异无显著性意义(P > 0.05)。15,20 μmol/L 法舒地尔组与siRNA 沉默RhoA基因组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。说明Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默在体外均能促进神经干细胞增殖,法舒地尔最佳作用浓度为15 μmol/L。     

神经干细胞分化调控的研究

近年来 ,对神经干细胞的研究已经成为生命科学界的热点。已知在胚胎乃至成体的中枢神经系统都存在神经干细胞[1 ,2 ] 。在发育期 ,干细胞可进行自我复制、增殖 ,同时部分子代细胞向神经元及胶质细胞分化 ,以满足神经系统结构及功能的需要 ;在成年时期 ,干细胞常处于静息状态 ,只有在损伤后受刺激才活跃增生 ,且多数情况下 ,这些细胞都是向星形细胞方向分化 ,参与局部的瘢痕形成。而损伤神经系统真正意义上的结构修复及功能重建尚与神经元的修复及突触形成关系密切。因此 ,研究神经干细胞分化调控的机制 ,使其向神经细胞分化 ,是将神经干细胞…     

硝普钠对小鼠神经干细胞增殖的抑制作用

目的：探讨外源性一氧化氮对小鼠神经干细胞增殖的抑制作用。方法：用含生长因子的培养基，原代培养神经干细胞。第5d时，取部分原代培养细胞于培养基中加入不同浓度的硝普钠进行培养。24h后用Griess还原法检测细胞上清液中一氧化氮的释放量。将这些细胞中的一半进行四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）试验，另一半细胞换成无硝普钠的条件培养基继续培养24h，再行MTT试验。另取原代培养细胞经硝普钠作用24h后，行血清诱导分化试验。结果：24h后细胞上清液中一氧化氮释放量随硝普钠浓度的增加而增加；MTT试验反映经硝普钠作用后的神经干细胞活细胞数较对照组明显减少，其减少的程度与硝普钠浓度呈正相关；经硝普钠作用后的神经干细胞，在去除硝普钠后仍可保持旺盛的增殖能力并能被血清诱导分化为神经细胞样细胞。结论：外源性一氧化氮对培养状态下的小鼠神经干细胞增殖有抑制作用。     

血性脑脊液对胚胎神经干细胞增殖和分化的影响

目的 观察体外血性脑脊液培养对神经干细胞增殖和分化的影响,以期为临床治疗这类患者提供依据.方法 提取终止妊娠的16周人胚胎脑细胞,冻存于液氮中.组织复苏后,在DMEM/F12培养基(含EGF、bFGF、B27和N2)中培养14 d可获得形态完好的神经球(神经干细胞).从颅脑外伤患者和非外伤患者分别留取血性脑脊液和正常脑脊液.将制备的胚胎神经干细胞分为两组,分别用血性脑脊液和正常脑脊液培养.动态观察神经干细胞在两组脑脊液中生长、增殖和分化的情况.用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经干细胞的分化进行标记和鉴定.结果 神经干细胞在两组脑脊液中均能存活、增殖和分化.但神经干细胞在血性脑脊液中分化速度较快,分化比例也较高.在血性脑脊液中,神经干细胞更倾向于向胶质细胞分化;而在正常脑脊液中,神经干细胞更倾向于向神经元分化.结论 血性脑脊液可能会影响神经干细胞的分化速度和分化方向.这一结果对采用神经干细胞治疗颅脑外伤和蛛网膜下腔出血等疾病有一定提示作用.     

低氧对神经干细胞增殖及分化的影响

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是近年来治疗神经系统疾病颇具前景的基因工程细胞,尤其是在神经功能修复方面,具有重要的科学意义及社会应用价值。对于神经功能损伤的治疗,目前仅限于内科药物治疗及外科手术干预,但对于已经丧失的神经功能的恢复和重建,这些治疗措施都无根本性疗效。而神经干细胞的研究和发展为解决这一问题     

Prdx6对神经干细胞增殖和分化的影响研究

目的探讨过氧化物氧化还原酶6(Prdx6)对神经干细胞的增殖和分化的影响。方法 (1)采用悬浮培养法从新生SD大鼠脑分离培养神经干细胞,传至第三代后进行神经干细胞特异性标记蛋白巢蛋白(Nestin)的免疫荧光检测;(2)细胞实验分组:溶媒组、Prdx6 1 ng/m L、10 ng/m L、100 ng/m L、1μg/m L组;(3)采用台盼蓝细胞计数法计数各组细胞培养第1 d、第2 d、第3 d、第4 d和第5 d的细胞数,并绘制细胞生长曲线;(4)细胞增殖实验观测各组细胞形成神经球的直径,用Cell Counting kit-8(CCK-8)试剂盒检测各组细胞在450 nm处的吸光度值;(5)在细胞分化实验中,通过免疫荧光染色检测神经干细胞分化后神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞数。结果 (1)体外培养得到悬浮生长的神经干细胞,免疫荧光染色Nestin呈阳性;(2) Prdx6 100 ng/m L组和1μg/m L组神经干细胞形成神经球的直径、吸光度值,以及分化后的NSE、GFAP阳性细胞数与溶媒组比较,差异有统计学意义(均P 0. 05)。结论 Prdx6具有促进神经干细胞增殖和分化的作用。     

FGF和EGF对神经干细胞增殖及分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内均存在神经干细胞.成纤维细胞生长因子(FGF)和表皮生长因子(EGF)对神经干细胞的增殖及分化有一定影响.FGF和EGF及其受体在胚胎期和成年期表达各异.FGF和EGF能促进神经干细胞增殖,在不同的条件下对分化的作用不同.     

白藜芦醇对缺血再灌注小鼠神经干细胞增殖作用的研究

目的研究白藜芦醇对小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞增殖的影响,探讨其促进缺血再灌注后神经功能恢复的机制。方法 15只雄性BALB/c小鼠随机分为缺血再灌注组、白藜芦醇组及假手术组,采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,Brdu标记增殖的干细胞,免疫组化法测定增殖细胞数。结果白藜芦醇组与缺血再灌注组相比Brdu阳性细胞数存在差异。结论白藜芦醇可以促进小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞的增殖,可能在其促进缺血后神经功能恢复中发挥作用。