碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌外排泵耐药机制研究

目的 研究碳青霉烯类药物亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性与主动外排泵表型和基因型之间的关系.方法 采用纸片扩散法对菌株进行药物敏感实验,加入外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)观察其对亚胺培南(IPM)最小抑菌浓度(MIC)的影响;通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增外排泵adeB、adeJ基因.结果128株鲍曼不动杆菌对常用抗生素耐药严重,除阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、米诺环素外,其他抗生素的耐药率都达到60%~80%.加入CCCP抑制剂后有37株(28.9%)对亚胺培南的MIC比不加入CCCP的MIC值下降4倍及以上,其对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(32.9%)与对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌株(10.7%)的外排泵抑制试验阳性率差异有统计学意义(P<0.05).PCR扩增有98株(76.6%)携带adeB基因,有75株(58.6%)携带adeJ基因.结论 鲍曼不动杆菌临床分离株耐药严重,外排泵基因adeB 和adeJ广泛存在于临床分离鲍曼不动杆菌中,外排泵基因过度表达和外排泵抑制试验阳性与碳青霉烯类抗生素的耐药机制关系密切.     

泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素机制研究

目的研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药的表型和分子机制。方法采用KB法及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,EDTA协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析。提取外膜蛋白行SDS-PAGE。结果 PAβN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤4倍,而美罗培南MIC值下降≥4倍者占50%(4/8)。EDTA协同试验结果显示阴性。改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性。耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM-1基因,8株耐药菌均含有KPC-2酶基因;耐药菌株的外膜蛋白电泳条带在25 ku处出现明显缺失。结论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药机制主要是产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,外膜蛋白25 ku表达的缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药。     

A study on mechanism of carbapenem resistance on pan-drugresistant Acinetobacter baumannii

目的 研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药的表型和分子机制.方法 采用KB法及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,EDTA协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析.提取外膜蛋白行SDS-PAGE.结果 PAβN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤4倍,而美罗培南MIC值下降≥4倍者占50%(4/8).EDTA协同试验结果显示阴性.改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性.耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM-1基因,8株耐药菌均含有KPC-2酶基因;耐药菌株的外膜蛋白电泳条带在25 ku处出现明显缺失.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药机制主要是产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,外膜蛋白25 ku表达的缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药.     

39株鲍曼不动杆菌耐药性分析与aac(6’)-Ib基因检测

目的调查鲍曼不动杆菌耐药特征及aac(6’)-Ib基因分布情况。方法收集39株不重复鲍曼不动杆菌,采用琼脂倍比稀释法测定对13种常用抗菌素的最小抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)法检测质粒介导aac(6’)-Ib基因。结果 39株鲍曼不动杆菌对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟钠、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、加替沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星和庆大霉素耐药率依次为74.36%、76.92%、82.05%、76.92%、82.05%、71.79%、79.49%、71.79%、79.49%、76.92%、89.74%、82.05%、94.88%。22株(56.41%)携带aac(6’)-Ib基因。结论鲍曼不动杆菌呈现多药耐药表型,aac(6’)-Ib基因与鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类和喹诺酮类耐药有关。     

78株鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度及耐药性分析

目的了解川北地区鲍曼不动杆菌的耐药性。方法细菌耐药性的检测采用琼脂稀释法。收集我院附属医院2005年1月-2007年3月临床分离的鲍曼不动杆菌78株,用琼脂稀释法检测鲍曼不动杆菌对16种抗菌药的最低抑菌浓度(MIC),敏感、中介、耐药的判定采用美国临床实验室标准化协会(CSLI)2006年公布的标准。结果与结论78株鲍曼不动杆菌对亚胺培南全部敏感,对头孢哌酮/舒巴坦和美罗培南耐药率低,分别为37.2%和1.3%,对环丙沙星、庆大霉素、头孢孟多、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢吡肟、阿米卡星、头孢西丁、氯霉素、四环素、哌拉西林/他唑巴坦等13种抗菌药的耐药率达62.8%-96.2%。     

比阿培南对鲍曼不动杆菌的抗菌活性评价

目的：评价比阿培南对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。方法：应用琼脂稀释法测定比阿培南、美罗培南、亚胺培南、头孢他啶对临床分离出的30株鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）,并计算MIC50和MIC90。结果：比阿培南、美罗培南、亚胺培南、头孢他啶的MIC50分别为2、4、2、128μg/ml,MIC90分别为16、32、32μg/ml、512μg/ml,耐药率分别为20.0%、30.0%、33.3%、70.0%。结论：比阿培南与其他3种药物比较对鲍曼不动杆菌有更强的体外抗菌活性。     

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统adeA的分布

目的 探讨主动外排系统adeA与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeA,应用琼脂稀释法检测主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)联合抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响.结果 收集的60株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南、美罗培南耐药率分别80.0%和81.7%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为90%以上;60株临床分离株检测出adeA主动外排基因52株,检出率为86.7%;CCCP可减少多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的外排作用,增加抗生素对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑制率.结论 鲍曼不动杆菌是医院感染重要的多重耐药病原菌,adeA主动外排作用可能在本地区鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥非常重要的作用.     

鲍曼不动杆菌多重耐药与胞膜主动外排作用关系的研究

目的 观察外排泵抑制剂对多重耐药不动杆菌耐药水平的降低作用,并扩增外排泵蛋白编码基因,以探讨不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系.方法 用琼脂稀释法测定30株鲍曼不动杆菌对环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南的最小抑制浓度(MIC)值,并观察在含10μg/ml利血平或25μg/ml羰基氰氯苯腙(CCCP)条件下MIC值的变化.用PCR法扩增外排泵编码基因adeB.结果 以环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有12、5、6、6株菌在10μg/ml CCCP或含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上.6、11、17号菌都同时对3种药物有明显的外排作用.以利血平和CCCP作为抑制剂所得的结果一致.18株菌经PCR扩增得到与目的片段大小一致的阳性片段,经测序证实与GenBank登录号为AF370885的鲍曼不动杆菌RND族药物外排泵编码基因adeB的同源性达99%.该序列已在GenBank登录,登录号为DQ2945294.结论 主动外排作用是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一.     

重症监护室鲍曼不动杆菌感染分布特征及耐药性分析

目的了解重症监护室鲍曼不动杆菌感染的分布特征及耐药性,为临床合理应用抗生素提供依据。方法采用回顾性方法统计分析重症监护室578株鲍曼不动杆菌的标本来源及耐药状况。结果重症监护室鲍曼不动杆菌痰标本检出率最高(87.02%)。对亚胺培南、美罗培南耐药率分别为16.96%、19.90%;头孢他啶、头孢吡肟耐药率高达80.00%以上;阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素耐药率在60.00%以下。多黏菌素未发现耐药。结论重症监护室多重耐药鲍曼不动杆菌感染严重,应加强药敏监测,指导合理选择抗生素,防止鲍曼不动杆菌的播散。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及B类和D类碳青霉烯酶研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供依据。方法琼脂稀释法测定鲍曼不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦等15种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率最低(6.4%)、其次为美罗培南(20.5%)和头孢哌酮/舒巴坦(29.7%),对四环素的耐药率最高(81.5%);其余抗菌药物耐药率均在50%左右或以上。结论鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦较为敏感,对其他抗菌药物耐药情况严重;对耐碳青霉烯类药物的菌株多重耐药性尤其显著,临床应加强检测和监测。     

海南医学院附属医院鲍曼不动杆菌的感染分布及耐药性分析

分析海南医学院附属医院鲍曼不动杆菌的感染分布与耐药情况,为临床诊治提供依据。方法对10 368例住院患者采集痰液、尿液标本,按照《全国临床检验操作规程》(第3版)要求对痰液、尿液标本进行处理。并采用全自动微生物分析仪及配套试剂进行细菌鉴别和药敏试验。结果 10 368例住院患者共培养分离出鲍曼不动杆菌136株。136株鲍曼不动杆菌病区分布居前5位的是:ICU、神经内科、呼吸内科、神经外科、儿科。136株鲍曼不动杆菌对抗生素敏感的前5位是:多黏菌素B、美满霉素、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、环丙沙星。对抗生素耐药依次为:黏菌素、诺氟沙星>头孢曲松>头孢噻肟>庆大霉素>复方新诺明、四环素>氨苄西林/舒巴坦>哌拉西林>阿米卡星>头孢他啶>环丙沙星>头孢吡肟>哌拉西林/他唑巴坦>左氧氟沙星>美罗培南>多黏菌素B>亚胺培南>美满霉素>头孢哌酮/舒巴坦。结论鲍曼不动杆菌对多种抗生素有多重耐药性,头孢哌酮/舒巴坦等可以作为首选治疗的药物。医院应加强对该菌的检测,降低院内感染率。     

中药单体白花丹醌对替加环素耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用研究

目的 比较5种中药单体对替加环素耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌作用,探讨替加环素与中药单体联合用药的增敏作用及相关作用机制.方法 采用琼脂二倍稀释法和微量肉汤法,检测鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).检测中药单体白花丹醌、二氢丹参酮、葫芦素、盐酸小檗碱和紫胡皂苷d对替加环素耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用;用棋盘法测定白花丹醌联合替加环素MIC值,计算部分抑菌浓度指数值(FICI).选取CCCP、PAβN及白花丹醌作为外排泵抑制剂,观察外排抑制试验结果.结果 临床分离的120株鲍曼不动杆菌对12种抗菌药物均有不同程度耐药,对米诺环素的耐药率相对较低,对多粘菌素B全部敏感,其中,有8株替加环素耐药菌.5种中药单体中白花丹醌对替加环素耐药菌株抑菌活性最佳,MIC值范围是16~32 μg/mL.白花丹醌和替加环素联合试验中,白花丹醌可逆转部分替加环素耐药鲍曼不动杆菌耐药性,75%(6/8)表现为相加作用,25%(2/8)表现为无关作用.外排抑制试验中,CCCP、PAβN及白花丹醌均显示对替加环素有一定的增敏作用.结论 在体外环境下,白花丹醌对替加环素耐药鲍曼不动杆菌具有一定抑菌活性,联合替加环素可降低替加环素耐药鲍曼不动杆菌耐药性,其增加抗菌药物敏感性的作用可能与外排泵抑制有关.     

鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵机制及群体信号系统基因检测分析

目的 分析不同耐药鲍曼不动杆菌外排泵基因及群体信号系统基因的分布,探讨不同耐药基因型鲍曼不动杆菌与抗菌药物耐药的特点.方法 收集2018年1月至2021年7月皖南医学院第二附属医院130株鲍曼不动杆菌,按耐药性不同分为多重耐药菌31株、碳青霉烯类耐药菌43株和非多重耐药菌56株,分析各组鲍曼不动杆菌对抗生素的耐药性,采...     

鲍曼不动杆菌临床感染的分布及耐药性分析

目的分析北京儿童医院2006年1月至2008年12月鲍曼不动杆菌的分布及耐药性变迁,以指导临床合理用药。方法对临床送检的12 204份标本中分离的345株鲍曼不动杆菌的分布及耐药性进行回顾性分析。结果3 a鲍曼不动杆菌的分离率分别为2.5%(92/3 636)、2.8%(117/4 056)和3.0%(136/4 512)。345株鲍曼不动杆菌检出科室分布以重症监护病房最高(5.6%),其次为外科(3.6%),呼吸内科(3.4%);阳性标本主要来源于下呼吸道占78.0%(269/345)。3 a间鲍曼不动杆菌对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、替卡西林/克拉维酸耐药率呈上升趋势,差别有统计学意义(P<0.05)。对亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、复方新诺明的耐药率呈上升趋势,但差别无统计学意义(P>0.05)。结论鲍曼不动杆菌是目前医院感染重要的条件致病菌,其耐药率呈逐步升高的趋势,应引起临床重视。     

Relationship between antimicrobial resistance and aminoglycoside- modifying enzyme gene expressions in Acinetobacter baumannii

Background Acinetobacter baumannii is one of the main gram-negative bacilli in clinical practice. Nosocomial infections caused by multi-drug resistance Acinetobacter baumannii is very difficult to treat. This study was designed to investigate the antimicrobial resistance characteristics and four resistant gene expressions of aminoglycoside-modifying enzymes including N-acetyltransferases and O-phosphotransferases in Acinetobacter baumannii. Methods Bacterial identification and antimicrobial susceptibility test were performed by Phoenix^TM system in 247 strains of Acinetobacter baumannii. Minimal inhibitory concentrations (MICs) of seven aminoglycosides including gentamicin, amikacin, kanamycin, tobramycin, netilmicin, neomycin and streptomycin in 15 strains of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii were detected by agar dilution. Four aminoglycoside-modifying enzyme genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and verified by DNA sequencer. Results The resistance rates of 247 strains of Acinetobacter baumannii against cefotaxime, levofloxacin, piperacillin, aztreonam, tetracycline, ciprofloxacin and chloramphenicol were more than 50%. Imipenem and meropenem showed high antibacterial activities with resistance rates of 3.2% and 4. 1%. MIC50 and MIC90 of gentamicin, amikacin, streptomycin and kanamycin in 15 strains of multi-drug resistant Acinetobacter baumanii were all more than 1024 mg/L, and the resistance rates were 100%, 100%, 100% and 93.3%, respectively. But their resistance rates to tobramycin, netilmicin and neomycin were 86.7%, 93.3% and 46.7%, respectively. Three modifying enzyme genes, including aacC1, aacC2 and aacA4 genes, were found in 15 strains, but aphA6 had not been detected. Their positive rates were 93.3%, 20. 0% and 20. 0%, respectively. These three genes existed simultaneously in No. 19 strain. Nucleotide sequences of aacC1, aacC2 and aacA4 genes shared 100%, 97.9% and 99.7% identities with GenBank genes (AY307113, S68058 and AY307114). Conclusion Multi-drug resistant Acinetobacter baumannii strains are rapidly spreading in our hospital, and their resistance to aminoglycosides may be associated with aminoglycoside-modifying enzyme gene expressions.     

多重耐药鲍曼不动杆菌药敏情况分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌的临床分离和药敏情况,并与普通鲍曼不动杆菌的情况进行比较。方法回顾性分析49株多重耐药鲍曼不动杆菌和498株普通鲍曼不动杆菌的耐药情况,采用χ2检验分析两类细菌对常用抗菌药物的敏感性差异。结果药敏实验证实产鲍曼不动杆菌多重耐药株和普通株除对阿米卡星、多粘菌素B、氯霉素、氨曲南和头孢唑啉的敏感性差异无统计学意义外(P0.05),对其他抗菌药物如亚南培南、环丙沙星等的敏感性都存在显著性差异(P0.05),多重耐药鲍曼不动杆菌对很多抗菌药物的耐药率相比普通株都有很大程度的提高。结论多重耐药鲍曼不动杆菌存在耐药机制的多样性情况,在临床确诊鲍曼不动杆菌多重耐药株感染时应根据药敏结果合理用药,同时应珍惜使用对多重耐药鲍曼不动杆菌和普通鲍曼不动杆菌治疗同样有效的多粘菌素B及阿米卡星等抗菌药物。     

痰液标本中186株鲍曼不动杆菌耐药性分析

目的:了解我院鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药现状及标本分布,为临床治疗提供依据。方法:采用回顾性方法统计分析186株鲍曼不动杆菌的标本来源、感染科室分布及耐药情况。结果:痰液标本中鲍曼不动杆菌对各类常用抗菌药物均表现严重的耐药现象,对亚胺培南的耐药率最低,为35.6%;其次为哌拉西林/他唑巴坦,耐药率为45.2%;再次为氟喹诺酮类如环丙沙星、左氧氟沙星,耐药率超过50.0%;对不含酶抑制剂的三代头孢如头孢曲松、头孢他啶的耐药率均达到了77.0%以上;而对阿米卡星、庆大霉素等普通氨基苷类的耐药率则超过了80.0%。结论:该临床分离的鲍曼不动杆菌耐药严重,且呈多重耐药,因此临床必须重视合理使用抗菌药物,以减少或延缓多重耐药菌株的产生。     

87株多重耐药鲍曼不动杆菌多位点序列分型

目的 了解安徽地区近年来临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、菌群结构和流行菌株,分析其基因同源性及亲缘进化关系,为临床抗菌药物应用提供一定的实验室依据.方法 收集安徽地区临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌87株,采用琼脂稀释法测定其对11种临床常见抗菌药物的最小抑菌浓度.通过多位点序列分型方法,反映菌株间进化关系,利用BioNumerics软件构建聚类图,从而进行基因分型.结果 87株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为74.7％、66.7％,对其他常用抗菌药物耐药率都很高.其分为42个ST型,其中6个型别是数据库里原来有的,36个型别为新的型别(暂时命名为STnew01～ST-new36).ST2包含37株菌,是优势型别,其属于克隆复合体CC1.结论 多重耐药鲍曼不动杆菌对11种常见临床抗菌药物均呈现出较高的耐药率,ST2为安徽地区多重耐药鲍曼不动杆菌主要的流行克隆,安徽地区主要的流行株ST2与世界上主要的流行克隆具有高度的同源性.