重组人生长激素对烟雾吸人性损伤大鼠肺泡Ⅱ型细胞的增殖及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究重组人生长激素（ recombinant human growth hormone, rhGH ）对烟雾吸入性损伤大鼠肺泡Ⅱ型细胞（ATⅡ）增殖及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法清洁级雄性SD大鼠70只，体重160～180g，采用随机数字表法随机分为3组：正常对照组（C组）、单纯吸入性损伤组（I组）和吸入性损伤＋rhGH治疗（R组），后2组各再分为6、10、14日亚组。烟雾造成吸入性肺损伤模型，rhGH经腹部皮下注入（1．33U／kg），连续应用7d。各时相点剖胸取肺，行常规病理切片进行病理形态学观察并用免疫组化方法观察肺泡Ⅱ型细胞（ATⅡ）增殖以及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果rhGH能显著增加新增殖ATⅡ数量；正常大鼠肺组织Bcl-2和Bax mRNA无表达，皮下注射rhGH后6、10、14日R组Bcl-2蛋白表达阳性细胞分别为（31．01±2．70）、（52．34±3．44）、（50．15±4．00）个／HP，明显高于I组的（24．76±2．82）、（37．92±4．28）、（35．58±3．64）个／HP（P〈0．05）；R组Bax蛋白表达阳性细胞为（21．16±2．79）、（31．22±5．62）、（26．27±5．41）个／HP，明显低于I组[（26．51±2．61）、（41．50±4．14）、（34．55±2．94）个／HP，P〈0．05]。结论经皮下注入外源性rhGH能有效刺激ATⅡ的增殖，上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达，改变Bcl-2／Bax的比值从而抑制细胞凋亡。     

胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素对烟雾吸入性损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 将成年清洁级雌性SD大鼠66只随机分为3组,正常对照组6只、吸入性损伤组和胰岛素治疗组各30只.胰岛素治疗组于烟雾吸入性损伤后皮下注射胰岛素5 U/kg,吸入性损伤组同样致伤后于相同部位注射等体积的生理盐水,正常对照组不做任何处理.各组均在伤在2 h、6 h、12 h、24 h、48 h监测血糖值.光镜进行肺组织切片病理形态学观察.采用原位末端标记法TUNEL观察肺组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及Bax的表达变化.结果 光镜观察HE切片,正常对照组大鼠肺泡结构清晰完整.吸入性损伤组大鼠肺组织肺泡间隔增宽、炎细胞浸润,胰岛素治疗组与吸入性损伤组比较病理表现有所减轻.凋亡指数（AI）、Bax 和 Bcl-2在各时间点均明显高于正常对照组（P〈0.01）.胰岛素治疗组伤后2 h AI、Bax和Bcl-2和吸入性损伤组间差异无统计学差异（P〉0.05）,但12 h以后两组AI、Bax和Bcl-2比较时差异均有高度统计学意义（P〈0.01）,24 h各值达高峰,差异也具有高度统计学意义（P〈0.01）.结论 吸入性损伤后早期给予胰岛素可以直接促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax等促凋亡蛋白的表达,对吸入性损伤后肺脏组织细胞的凋亡有抑制作用,在肺损伤早期起到保护肺组织作用.     

重组人肝刺激因子的促增殖和抗损伤作用

目的 探讨重组人肝刺激因子（hHSS)的生物学特性并观察其抗损伤能力。方法 以MTT法、细胞计数、细胞周期分析和MAPK活性观察hHSS促细胞增殖作用。以H2O2损伤细胞，观察hHSS保护细胞的作用。结果 重组hHSS能刺激BEL-7402肝癌细胞增殖，促进增殖信号分子MAPK的磷酸化。hHSS可增强细胞对抗H2O2损伤的能力，促进受损细胞DNA合成。结论 HSS为一种新的生物活性蛋白，参与细胞增殖调节。     

细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞低氧/复氧损伤中的作用

目的 探讨细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)低氧/复氧(H/R)中的作用.方法 将大鼠AECⅡ分为对照组(C)、低氧/复氧组(H/R)、DMSO溶剂组(HD)、自噬激动剂组(Rap)和自噬抑制剂组(3-MA).CCK-8法检测细胞活力;反转录RT-PCR检测自噬相关蛋白mRNA表达水平;Western blot...     

聚乙二醇化重组人生长激素对离体豚鼠乳头肌细胞动作电位的影响

目的 探讨聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)对离体豚鼠乳头肌细胞动作电位的影响,并以重组人生长激素(rhGH)为阳性对照物比较二者的体外生物活性.方法 健康雄性DHP豚鼠12只,随机分为2组,PEG-rhGH干预组和rhGH干预组,每组6只.采用累计给药法和给药前后自身对照方法,分别观察不同质量浓度(1、5、...     

重组人表皮细胞生长因子对人皮肤细胞增殖作用的研究

目的：观察重组人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor,rhEGF）对人表皮细胞增殖的变化。方法：运用包皮环切术后收集培养角质细胞,不同浓度的重组人表皮细胞生长因子处理细胞,MTT法测细胞生长率;流式细胞仪检测细胞周期以及蛋白的表达。结果：5～10ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子可促进人表皮细胞细胞生长。流式细胞仪检测10ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子处理后细胞增殖明显,S和G2／M期细胞数明显增加。结论：重组人表皮细胞生长因子可促进细胞生长以及切口愈合。     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究

目的　表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原 2 5 0 2 70多肽 (recombinanthumancollagentypeⅡpeptide 2 5 0 2 70 ,rhCⅡ 2 5 0 2 70 )并研究其对类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)患者外周血单个核细胞 (PBMC)和关节滑液单个核细胞 (SFMC)中特异性T细胞的活化作用。方法　利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ 2 5 0 2 70多聚基因的表达载体pGEX 4T 1,转化E .coliBL2 1,融合表达目的蛋白 ,经GlutathioneSepharose○R4B亲和层析柱分离纯化 ,12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量 (Mr)和纯度。以不同浓度 (0 .1、1.0、10、10 0、10 0 0 μg/ml)的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70和化学合成的CⅡ 2 5 0 2 70刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC ,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照 ,流式细胞仪测定刺激前后 2组培养细胞中T细胞CD6 9的表达率 ,以分析其对特异性T细胞的活化作用。结果　融合表达的目的产物经SDS PAGE分析 ,相对分子质量 (Mr)大小约为 43× 10 3,与预期相符。分离纯化的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70经SDS PAGE凝胶薄层扫描 ,纯度为 89% ,浓度为 2 .1mg/ml。FACS分析 :经 10 0 μg/ml浓度的 6×rhCⅡ2 5 0 2 70刺激 3d     

IL-4下调COPD肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达

目的：探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）中环氧合酶-2（COX-2）及血小板源性生长因子（PDGF）的表达及IL-4对其表达的影响。方法：用雄性Wistar大鼠建立吸烟大鼠COPD模型后取整肺做原代培养，培养出肺泡Ⅱ型上皮细胞。随机分为对照组和模型组，并用IL-4干预模型组的肺泡Ⅱ型上皮细胞。用免疫组化法检测细胞爬片COX-2、PDGF-A及PDGF-B的表达。结果：模型组COX-2和PDGF-A、PDGF-B表达明显增高；IL-4干预组表达显著降低。结论：COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达显著增高，IL-4可降低其表达。     

大鼠额叶损伤后细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白的表达变化

本研究目的为探讨大鼠额叶锐器损伤后细胞凋亡的变化规律及调控机制。通过电镜、TUNEL法及免疫组织化学染色方法检测细胞凋亡和Bax、Bcl2蛋白的表达变化,结果发现凋亡细胞在损伤后3h即可发现,24h达到高峰;伤后3hBax和Bcl2表达明显升高,Bax表达12h达到高峰,而Bcl2表达6h即达到高峰;伤后Bax/Bcl2比值上调,24h达到高峰,随后逐渐下降。结果表明大鼠额叶锐器伤后存在细胞凋亡,凋亡细胞数量的变化与伤后时程有关,Bax/Bcl2比值是决定细胞凋亡的重要因素。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549的B细胞淋巴瘤-2相关基因(Bax),探讨Bax在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的Bax小干扰RNA(siRNA)转染入A549细胞,给予10μg/LTNF-α刺激24h,RT-PCR检测bax mRNA的表达,Western blotting和免疫组化检测Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:化学合成的Bax siRNA抑制了A549细胞Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),流式细胞术显示BaxsiRNA组的细胞凋亡率明显低于TNF-α组和阴性对照siRNA组(P0.05)。结论:体外实验证明Bax的高表达在TNF-α诱导A549细胞凋亡中发挥了重要的促凋亡作用,利用RNAi技术沉默Bax基因可以有效抑制由TNF-α介导的A549细胞凋亡。     

重组人生长激素对烧伤病人代谢的影响及临床应用

生长激素（growth hormone，GH）是由垂体前叶嗜酸粒细胞分泌的含191个氨基酸非糖基化蛋白，它的主要生理功能是促进生长，促进蛋白合成，减少蛋白质的消耗，同时使脂肪组织氧化率提高，替代蛋白质氧化。临床用于治疗生长激素缺乏性侏儒症，近年来生长激素应用范围逐渐增加，逐渐应用于Turner综合征，慢性肾功能衰竭、大手术后、不育症，烧伤治疗等。重组人生长激素（rhGH）应用于烧伤病人之后，可以加快创面愈合的速度，有助于逆转烧伤后超高代谢，改善氮平衡。国内外的很多学者都对重组人生长激素应用于烧伤病人治疗的作用机制、给药时机、剂量和不良反应等作了广泛的研究，现综述如下。[第一段]     

罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的： 探讨罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax 和Bcl-2 蛋白表达的影响。方法：性成熟SD雌鼠随机分 为对照组、造模组,腹腔注射（ 顺铂1.5 mg/kg）制备卵巢早衰模型,随机分为卵巢早衰模型组和罗布麻颗粒高、 中、低剂量治疗组。H-E 染色观察卵巢形态;ELISA 检测各组大鼠血清Bax、Bcl-2 和雌二醇、促黄体生成素（LH）、 促卵泡激素（FSH））的含量,免疫组织化学法检测卵巢Bax 与Bcl-2 蛋白表达。结果：卵巢早衰模型组大鼠中初 级卵泡减少,闭锁卵泡增多,罗布麻颗粒高剂量治疗组大鼠可见初级卵泡,闭锁卵泡较卵巢早衰模型组减少;卵 巢早衰模型组大鼠血清中雌二醇及Bcl-2 含量降低,FSH、LH、Bax 的含量升高; 各药物治疗组雌二醇、Bcl-2 含 量升高,FSH、LH、Bax 的含量降低;Bax 蛋白主要表达在颗粒层细胞及卵泡液中,卵巢早衰模型组大鼠较对照 组表达显著升高, 各药物治疗组在不同程度上能够降低其表达;Bcl-2 蛋白在各组主要表达在颗粒层细胞中,卵 巢早衰模型组大鼠较对照组表达显著下降, 各药物治疗组在不同程度上能够升高其表达。结论：顺铂能够导致雌 性大鼠血清中性激素水平的紊乱及卵巢组织形态的改变,可能与细胞凋亡因子Bax 与Bcl-2 在血清及卵巢组织中 表达水平的高低有关;罗布麻颗粒可能通过下调Bax 蛋白、上调Bcl-2 蛋白从而改善顺铂致卵巢早衰大鼠的卵巢 功能。     

CGRP减轻高氧诱导的早产鼠肺泡Ⅱ型细胞损伤及对Gli1表达的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高氧致早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)损伤的保护作用及对Sonichedgehog(Shh)通路Gli1蛋白表达的影响和意义.方法 分离纯化早产鼠AECⅡ,分为空气、空气+CGRP、空气+CGRP+ CGRP拮抗剂(CGRP8-37)、高氧(95％O2)、高氧+CGRP及高氧+CGRP+ CGRP8-37组.培养24h后观察AECⅡ形态,流式细胞术检测凋亡率,荧光分子探针法检测细胞内活性氧(ROS),分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD);RT-qPCR检测表面活性蛋白C(SPC) mRNA,Western blot检测Gli1蛋白表达.结果 95％ O2诱导24 h后,AECⅡ凋亡率比空气对照增加3.6倍,ROS水平增加1.5倍,MDA增加65％,SOD降低近一半,SPC mRNA和Gli1蛋白表达显著降低(均P＜0.05);CGRP干预后可显著减轻上述变化(P＜0.05).结论 CGRP可减轻高氧诱导的AECⅡ损伤,其机制可能与Shh信号通路的激活有关.     

吸烟对大鼠肺和肺泡Ⅱ型上皮细胞间粘附分子1表达的检测

为了解吸烟肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞间粘附分子 1(ＩＣＡＭ 1)ｍＲＮＡ的表达 ,我们通过对不同时间吸烟大鼠肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞ＩＣＡＭ 1蛋白质水平和ｍＲＮＡ水平测定来探讨吸烟致慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)发病的可能途径。2 40只大鼠放入按许三林设计的大鼠被动吸烟装置内 (中华结核和呼吸杂志 1999,7:417 419)每天燃香烟 10支使大鼠形成被动吸烟模型。在吸烟 1、2、3、4、5、6月后及正常喂养的对照组大鼠杀死解剖 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化和培养并留取肺组织 ,应用免疫组织化学染色、原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (…     

缺血后适应对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:研究缺血后适应预适应对Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响,以此探讨缺血后适应预适应可能的内源性保护机制。方法:40只雄性SD大鼠,随机分成假手术组,缺血再灌注预适应组,缺血再灌注后适应组和缺血再灌注组共4组。每个亚组10只。按Longa法制作局灶性脑缺血模型。免疫组化染色检测Bcl-2和Bax蛋白,计算细胞阳性率。结果:缺血后适应预适应组Bcl-2阳性率较缺血再灌注组显著增加;缺血后适应预适应组Bax阳性率较缺血再灌注组显著下降。结论:缺血后适应预适应能促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,可能是缺血后适应预适应在脑缺血再灌注损伤中发挥内源性脑保护作用的机制之一。     

尾加压素Ⅱ对大鼠及人嗜铬细胞瘤细胞体外增殖的影响

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞及体外培养的人原代嗜铬细胞瘤细胞增殖的影响.方法 以噻唑兰法(MTT法)观察UⅡ对PC12细胞及体外培养的人原代嗜铬细胞瘤细胞增殖的影响.结果 UⅡ对PC12细胞的增殖无明显影响.10-7、10-6mol/L浓度的UⅡ可促进体外培养的原代人嗜铬细胞瘤细胞增殖.结论 UⅡ可促进嗜铬细胞瘤细胞的生长,在嗜铬细胞瘤的发病机制中可能起一定作用.     

Nodosin对HepG2细胞株的增殖抑制作用及对Bcl-2和Bax表达的影响

 目的:研究传统中药提取物nodosin对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并探讨其对Bcl-2和Bax表达的影响。方法:将不同浓度组（1.25、2.5、5、10和20 μmol/L）nodosin预作用于HepG2细胞24 h,用倒置显微镜观察nodosin对细胞形态学的影响,采用MTT法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和Bcl-2、Bax的表达。结果:形态学结果显示,随着nodosin剂量的增加,细胞皱缩和漂浮细胞数量增加,流式细胞术检测结果显示随着nodosin药物浓度的增加,HepG2细胞凋亡率增加。Bax的表达随着nodosin剂量的增加逐渐增加, Bcl-2的表达逐渐减少。结论: Nodosin能抑制HepG2细胞株的增殖,呈明显的剂量依赖性,对HepG2细胞的抑制作用是通过增加Bax的表达以及降低Bcl-2的表达诱导细胞凋亡实现的。     

BYHWD对脊髓损伤大鼠脊髓组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察补阳还五汤(buyanghuanwu decoction,BYHWD)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其mRNA表达的影响,初步探讨BYHWD抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法:Wistar大鼠40只,随机分为四组:正常对照组、SCI模型组、BYHWD组和甲基强的松龙(MP)注射组,每组10只大鼠;后三组动物先建立SCI损伤模型,然后分别给予BYHWD组和MP组BYHWD和MP治疗。四组动物分别于术后1、7、14、21 d和28 d对大鼠后肢神经功能的恢复情况进行BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)功能评分。第28 d处死各组大鼠,采用Real-time PCR法检测脊髓组织Bcl-2和Bax mRNA的表达情况,Western Blot法检测脊髓组织Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果:大鼠麻醉清醒后,SCI组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。BBB评分结果显示:术后第7 d~28 d,与正常对照组相比,SCI组BBB评分明显降低(P0.05);与SCI组相比,BYHWD处理组和MP处理组大鼠BBB评分明显增高(P0.05),但BYHWD处理组和MP处理组大鼠相比,BBB评分无明显差异(P0.05)。Real-time PCR和Western Blot结果显示:与正常对照组相比,SCI组Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.05),而Bcl-2蛋白及mRNA的表达则明显有所降低(P0.05)。与SCI组相比,BYHWD处理组和MP处理组大鼠脊髓组织Bax蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05),而Bcl-2蛋白及mRNA表达则明显有所升高(P0.05)。但BYHWD处理组和MP处理组大鼠脊髓组织Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达之间无明显差异(P0.05)。结论:BYHWD可以改善SCI大鼠后肢的运动功能,通过下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,从而抑制SCI大鼠脊髓神经细胞的凋亡,发挥其保护作用。     

重组人血管内皮抑素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和相关蛋白表达的影响

 目的： 研究重组人血管内皮抑素（恩度）在体外对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞周期及细胞相关蛋白表达的影响。方法： 用CCK-8检测恩度对RPMI 8226细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡和细胞周期的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达变化;以实时定量PCR和Western blotting检测RPMI 8226细胞血管细胞粘附因子 1（VCAM-1）、白细胞介素 6（IL-6）和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA以及蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中细胞因子IL-6和VEGF水平。结果： 恩度对RPMI 8226细胞有增殖抑制作用,250 mg/L恩度对RPMI 8226细胞 72 h增殖抑制率为（59.5±5.6）%（P<0.05）,细胞G1期比例增加（P<0.05）,但对细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达无显著影响;经恩度作用后RPMI 8226细胞 VCAM-1表达下降（P<0.05）,IL-6和VEGF表达及分泌降低（均P<0.05）。结论： 恩度能通过改变细胞周期变化抑制RPMI 8226细胞增殖,并能减少VCAM-1表达及IL-6、VEGF分泌,对细胞凋亡无明显改变。     

生长因子对成年大鼠肺泡型细胞增生的影响

目的　探讨 EGF、TGFα、TGFβ1、PDGF、b FGF对肺泡 型细胞增生的影响。　方法　在原代培养的成年大鼠肺泡 型细胞中 ,加入不同种类、不同剂量的生长因子 ,作用 48h,测定 3H- Td R掺入、细胞数量和 Ki- 6 7标记指数。　结果　 EGF、TGFα均促进肺泡 型细胞 3H - Td R掺入量、细胞数量及 Ki- 6 7阳性标记率增加 ,TGFα比EGF的作用更强 ;TGFβ1的作用与 EGF、TGFα相反。 EGF、TGFα和 TGFβ1对肺泡 型细胞增生的影响均呈明显量效关系。 PDGF和 b FGF对肺泡 型细胞增生的影响未显示出明确的量效规律。同时或先后加入 TGFα和TGFβ1,肺泡 型细胞的增生反应不同。　结论　 EGF、TGFα和 TGFβ1对培养的成年大鼠肺泡 型细胞增生有明显的调控作用 ;TGFα和 TGFβ1共同作用于细胞时 ,其生物效应与加入不同因子的时序有关。