大叶钩藤生物碱类化学成分研究

目的:研究大叶钩藤生物碱部分的化学成分.方法:用氯仿提取及柱色谱等方法进行分离,渡谱法鉴定结构.结果:从大叶钩藤生物碱部分分离并鉴定了6个生物碱类化合物,其结构分别为柯诺辛碱(1)、柯诺辛碱B(2)、异去氢钩藤碱(3)、异钩藤碱(4)、去氢钩藤碱(5)、钩藤碱(6).结论:柯诺辛碱为大叶钩藤生物碱部分的主要化学成分;异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱为首次从该植物中分离得到.     

HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨

目的:探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法.方法:采用RP-HPLC,对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察,同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况.结果:钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用同流提取时,平均加样回收率87.51％～88.83％,提取回收率12.60％;当样品采用超声提取时,平均加样回收率99.48％ ～ 103.2％,提取回收率47.08％.异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用回流提取时,平均加样回收率107.9％～113.9％,提取回收率40.00％,当样品采用超声提取时,平均加样回收率97.00％～99.59％,提取回收率51.03％.质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱,有一小部分转化为未知成分;异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid4种成分.结论:HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法,并应注意同收率问题.     

HPCE内标法测定中药钩藤中钩藤碱含量

目的:通过建立准确测定钩藤中钩藤碱含量的分析方法,对贵州省不同地区钩藤药材中钩藤碱的含量进行分析研究。方法:采用以二苯胍为内标物的高效毛细管电泳内标法进行含量测定。结果:在所选择的条件下钩藤样品中钩藤碱的电泳峰与杂质成分峰完全分离,钩藤碱含量得到准确测定。结论:根据测定结果,主要产于贵州或主要在贵州药材市场上流通的钩藤药材中的钩藤碱含量普遍较低,有的甚至在该分析条件下未能检出,这一研究结果可为今后对中药钩藤的研究提供参考依据。     

钩藤生物碱类成分研究

目的 研究钩藤Uncaria rhynchophylla的生物碱类成分.方法 用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和ODS柱色谱及薄层色谱等技术进行分离纯化,采用多种光谱分析技术,对所分离得到的化合物进行结构鉴定.结果 得到12个吲哚类生物碱,分别鉴定为去氢毛钩藤碱(I)、毛钩藤碱(Ⅱ)、缝籽嗪甲醚(III)、柯诺辛(Ⅳ)、去氢钩藤碱(V)、异去氢钩藤碱(VI)、钩藤碱(Ⅶ)、异钩藤碱(Ⅷ)、喜果苷(Ⅸ)、直瑞兹亚酰胺(斯垂特萨米碱,stric-fosamide,X)、卡丹宾碱(XI)和二氢卡丹宾碱(XII).结论 化合物Ⅺ和XⅡ为首次从该植物中分得,通过2D-NMR准确归纳了化合物I和Ⅱ的核磁数据,填补了早期文献报道没有该两个化合物核磁数据的空白.     

钩藤最佳煎煮方法的高效液相色谱法优选

目的建立HPLC方法测定采用不同煎煮方法后钩藤中异钩藤碱和钩藤碱含量的变化。方法对钩藤饮片及钩藤最粗粉采用先煎30min,再煎20min和先煎10min,再煎20min的方法来模拟临床汤剂的直接煎煮和后下的方法,采用HPLC方法对煎煮液中异钩藤碱及钩藤碱的含量变化进行测定。结果钩藤最粗粉采用先煎10min,再煎20min的方法异钩藤碱和钩藤碱煎出量最高。结论异钩藤碱和钩藤碱性质不稳定,加热时间过长容易破坏,煎煮时宜后下,而且粉碎有利于其煎出。     

黔产钩藤药材不同采收期及不同加工方法有效成分含量对比研究

目的：测定不同采收期及不同加工方法黔产钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱的含量,并考察钩藤碱和异钩藤碱在不同采收期的含量变化。方法：采用RP-HPLC法,KromosilC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;流动相以甲醇-0.2%氨水溶液（65：35）,流速：1.0mL/min,柱温35℃,进样器温度5℃,检测波长为245nm,结果：不同采收期钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱含量有显著变化。以10月～1月份,采集的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量较高;不同加工方法钩藤碱和异钩藤碱含量也有所不同。结论：1.以10月～1月份采集的样品含量较高,符合中国药典规定钩藤药材在秋、冬二季采收。2.阴干和晒干的药材含量较高。为黔产钩藤药材提供了最佳加工方法。     

钩藤中不同成分降压作用的差异

目的：比较钩藤中提取的异钩藤碱、钩藤碱、钩藤总碱及非生物碱部分的降压作用。方法：大鼠麻醉后经颈总动脉插管记录外周血压和经股静脉微量输注实验用药。结果：实验表明钩藤中４种成分的降压强度为异钩藤碱（４２．０％）〉钩藤碱（３２．１％）〉钩藤总碱（２１．３％）〉钩藤非生物碱（１２．４％）。结论：提示钩藤中主要降压成分为异钩藤碱的钩藤碱。     

响应面法优化加速溶剂萃取钩藤中钩藤碱的工艺研究

目的:采用加速溶剂萃取技术方法,利用响应面分析法对提取钩藤中钩藤碱的工艺参数进行优化。方法:采用HPLC法测定钩藤碱的含量,流动相(甲醇-0.05%醋酸水溶液),检测波长为254 nm。通过响应面法考察加速溶剂萃取法的工艺条件。结果:通过单因素实验基础筛选出钩藤中钩藤碱的加速溶剂萃取技术3个主要因素,乙醇浓度、萃取次数和萃取时间。结论:通过响应面分析得出最佳组合条件为乙醇浓度50%、提取3次,萃取时间12 min。在此条件下,加速溶剂萃取法所提取的钩藤碱的含量是6.121 mg·g-1。加速溶剂萃取技术具有省时、方便、提取效率高等优点,适合于对钩藤中钩藤碱的提取。     

钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定

目的 研究和探讨钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的最佳提取与含量测定方法.方法 采用Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.01 mmol·L-1三乙胺水溶液(70:30,冰醋酸调pH 7.0)为流动相;流速:0.5 mL·min-1;柱温:30℃;进样器温度:5℃;检测波长为245 nm,测定和考察钩藤不同时间的水煎液和不同条件下甲醇冷浸超声提取液中主要有效成分钩藤碱和异钩藤碱含量的变化.结果 钩藤碱回归方程Y=76.7170X-0.0727(r=0.999 8),在2.5～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率99.84%～116.91%,RSD小于8.8%;异钩藤碱回归方程Y=87.4729X-0.3666(r=0.999 7),在2.0～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率87.08～104.97%,RSD小于7.3%;甲醇冷浸超声提取液中钩藤碱与异钩藤碱的提取率大约是水煎液中的十倍.在甲醇提取工艺中,影响提取率的因素从大到小依次为超声时间、甲醇用量、冷浸时间,经正交实验优选的最佳提取工艺为用20倍质量的甲醇,冷浸24h,超声60min.结论 钩藤药材中有效成分钩藤碱与异钩藤碱的提取,采用甲醇冷浸超声法优于水煎法.该含量测定方法快速、简便、准确,可为评价钩藤药材的质量提供依据.     

钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析

目的:探索钩藤属部分品种钩藤碱成分的含量,为评价这些品种药材质量提供试验依据.方法:应用HPLC测定钩藤属攀茎钩藤、侯钩藤、毛钩藤、倒挂金钩、北越钩藤和华钩藤33批不同产地药材钩藤碱含量.采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(含0.002 mol·L 1三乙胺,用冰乙酸调pH7.5)(64∶36),流速为1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.结果:攀茎钩藤和侯钩藤有5批样品可检出钩藤碱,但含量均较低,其余样品均未能检出钩藤碱.结论:试验所用钩藤属不同品种质量有所差异,同一品种质量随着产地不同而异.     

三种一般钩藤ITS序列的RFLP分析

目的以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对采集自3个不同地区的一般钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jack.进行RFLP遗传分析,研究不同地理区域一般钩藤的rDNA ITS序列是否具有生物地理差异。方法通过改良CTAB法提取一般钩藤总DNA,利用通用引物对其rDNA ITS序列进行PCR扩增,并对连接转化后扩增得到的rDNAITS序列进行限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析。结果获得采集自广东韶关阳山、广东梅州大埔、广西植物园的3种一般钩藤两种限制性内切酶(Msp I&HaeⅢ)酶切图谱。结论通过基于rDNAITS序列进行的RFLP分析,表明这3个地区的一般钩藤rDNA ITS序列无明显差异,不同区域的一般钩藤其遗传本质不具有地理差异。     

钩藤中吲哚类生物碱化学成分及药理活性研究进展

钩藤,原名钓藤,入药历史悠久,主要用来治疗风热头痛、头晕目眩、小儿惊厥、高血压等症状.近年来,大量药理实验证明,钩藤中的主要活性成分是吲哚类生物碱.就钩藤中的吲哚类生物碱的化学成分及其药理活性进行系统性综述,为进一步开发利用中药钩藤提供理论依据.     

Anxiolytic effects of the aqueous extract of Uncaria rhynchophylla

The purpose of this study was to characterize the putative anxiolytic-like effects of the aqueous extract of hooks with stem of Uncaria rhynchophylla using the elevated plus maze (EPM) and the hole-board apparatus in rats and mice. Control rats were treated with an equal volume of saline, and positive control rats with buspirone (1 mg/kg). Single or repeated treatments of the aqueous extract of Uncaria rhynchophylla (200 mg/kg/day, p.o.) for 7 days significantly increased the time-spent and entries into open arms of the EPM, and reduced the time-spent and entries into the closed arms versus saline controls (P<0.05). However, no changes in spontaneous locomotor activity or myorelaxant effects were observed versus saline controls. In the hole-board test, repeated treatment with the aqueous extract of Uncaria rhynchophylla (100 or 200 mg/kg/day, p.o.) significantly increased the number of head-dips (P<0.05). In addition, the anxiolytic-like effects of Uncaria rhynchophylla extract as assessed using the EPM test were abolished by WAY 100635 (0.3 mg/kg, i.p.), a 5-HT(1A) receptor antagonist. These results suggest that Uncaria rhynchophylla is an effective anxiolytic agent, and acts via the serotonergic nervous system.     

Alkaloids from the leaves of Uncaria rhynchophylla and their inhibitory activity on NO production in lipopolysaccharide-activated microglia

Two new isomeric alkaloids, 18,19-dehydrocorynoxinic acid B (1) and 18,19-dehydrocorynoxinic acid (2), were isolated from the CHCl3 extract of the leaves of Uncaria rhynchophylla, together with four known rhynchophylline-type alkaloids, corynoxeine (3), isocorynoxeine (4), rhynchophylline (5), and isorhynchophylline (6), and an indole alkaloid glucoside, vincoside lactam (7). The structures of compounds 1 and 2 were elucidated by spectroscopic methods including UV, IR, HREIMS, 1D and 2D NMR, and CD experiments. The activity assay showed that compounds 3-6, with a C-16 carboxylic ester group, and 7 exhibited inhibitory activity on lipopolysaccharide (LPS)-induced NO release in primary cultured rat cortical microglia (IC 50: 13.7-19.0 microM). However, only weak inhibitory activity was observed for compounds 1 and 2, with a C-16 carboxylic acid group (IC 50: >100 microM).     

RP-HPLC测定市售钩藤中钩藤碱的含量

目的:建立反相高效液相色谱测定市售钩藤中钩藤碱的方法。方法:KromosilTMC18柱;检测波长254nm;柱温:30℃;流速:1mL.min-1;流动相:甲醇:水(0.01mol/L三乙胺,冰醋酸调pH7.2)=70∶30;进样量:20μL。结果:在0.244～1.22μg范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为100.13%。6批市售钩藤药材钩藤碱含量为0.1349～0.2107mg/g。结论:市售钩藤药材中钩藤碱含量变化较大。该方法简便,结果准确,可有效控制钩藤质量。     

Monoamine oxidase B (MAO-B) inhibition by active principles from Uncaria rhynchophylla

Attenuation of monoamine oxidase B (MAO-B) activity may provide protection against oxidative neurodegeneration. For this reason, inhibition of MAO-B activity is used as part of the treatment of Parkinson's and Alzheimer's patients. The hook of Uncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks. (Rubiaceae) is a traditional Chinese herbal drug that is generally used to treat convulsive disorders. In this study, the fractionation and purification of Uncaria rhynchophylla extracts using a bioguided assay isolated two known compounds, (+)-catechin and (-)-epicatechin. The compounds inhibited MAO-B, as measured by an assay of rat brain MAO-B separated by electrophoresis on a 7.5% native polyacrylamide gel. The IC(50) values of (+)-catechin and (-)-epicatechin were 88.6 and 58.9 microM, respectively, and inhibition occurred in a dose-dependent manner, as measured by the fluorescence method. The Lineweaver-Burk plot revealed K(i) values for (+)-catechin and (-)-epicatechin of 74 and 21 microM, respectively. This suggests that these two compounds, isolated here for the first time from Uncaria rhynchophylla, might be able to protect against neurodegeneration in vitro, and, therefore, the molecular mechanism deserves further study. This finding may also increase interest in the health benefits of Uncaria rhynchophylla.     

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts, VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin, FN)的影响。方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用Annexin V-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1) mRNA表达。结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高, Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高, Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR 胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR 胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。     

HPLC测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱的含量

目的：用HPLC法建立钩藤药材中钩藤碱（Rhynchophylline）、异钩藤碱（Isorhynchophylline）的含量测定方法,用于钩藤药材的质量控制。方法：色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以甲醇：水=65：35（V/V,含0.01mmol/L三乙胺,冰醋酸调PH7.0）为流动相,流速为1.0 ml.min-1,在245nm检测波长下,测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱含量。结果：钩藤碱及异钩藤碱的回归方程分别为Y=1.0E＋6x-21142和Y=1.1E＋6x-13566,线性范围分别为0.254～1.524μg和0.216～1.296μg,相关系数分别0.9999和0.9999。结论：本法正确、简便、快速,对于控制和评价钩藤药材的品质有重要意义。