大鼠心脏Cx43、Cx45表达的差异

连接蛋白(cx)组成心脏的间隙连接，为心脏细胞间通讯提供代谢偶联和电偶联，并为心肌的同步收缩提供低电阻传导途径。心肌间隙连接的数目、分布和组成在不同动物、同种动物的不同组织及不同发育时期均表现出差异，在心血管系统主要分布有：Cx37、Cx40、Cx43、Cx45和Cx46等。间隙连接与信息传导密切相关，心肌     

肝癌细胞中connexin32、connexin43的表达及其与间隙连接通讯功能的相关性

目的：研究肝细胞肝癌和正常肝细胞间隙连接蛋白connexin32（Cx32)、connexin43(Cx43）的表达，及其对间隙连接通讯功能（GJIC）的影响。方法：应用应用培养及流式细胞分析技术（FCM），研究肝癌细胞系HHCC、SMMC－7721和正常肝系QZG细胞中Cx32和Cx43的表达。结合Ｌucifer Yellow划痕标记荧光传输技术（SLDT），检测上述细胞的间隙连接通讯功能。结果：流式细胞仪分析证实，Cx32蛋白在肝癌细胞系HHCC、SMMC－7721和正常肝细胞系QZG细胞中表达的阳性率分别为1．9％、0．7％和99．0％；Cx43蛋白在HHCC、SMMC－7721和QZG细胞中表达的阳性率分别为7．3％、26．5％和99．1％。SLDT检测发现肝癌细胞HHCC，SMMC－7721的间隙连接通讯功能较正常肝细胞QZG明显减弱。结论；Cx3、Cx43蛋白在正常肝细胞中具有较高水平的表达，在肝癌细胞中表达水平显著降低，肝癌细胞的间隙连接通讯功能较正常肝细胞亦明显减弱。Cx32、Cx43表达调控异常引起的间隙连接通讯障碍可能与肝癌的发生密切相关。     

间隙连接Cx32mRNA,Cx43mRNA及其蛋白产物在肝细？…

探讨间隙连接基因Ｃｘ３２ｍＲＮＡ、Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及其蛋白产物在肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｏｎｍａ，ＨＣＣ）发生的重要意义，方法应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学法，原位杂交和流式细胞仪分析技术，研究６１例ＨＣＣ、１４例正常肝组织以及肝癌细胞系ＨＨＣＣ、ＳＭＭＣ－７７２１、正常肝细胞系ＱＺＧ中，Ｃｘ３２ｍＲＮＡ，Ｃｘ４３ｍＲＮＡ及其蛋白产物的表达规律。结果：Ｃｘ３２蛋白在ＨＣＣⅠ、Ⅱ、Ⅲ     

HeLa细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32的表达及其功能调控

目的 在HeLa宫颈癌细胞中研究不同浓度的多西环素对缝隙连接蛋白Cx26/Cx32表达及由其形成的缝隙连接通讯功能的影响.方法 采用Western印迹检测HeLa细胞中Cx26/Cx32的蛋白表达;荧光示踪实验用于检测HeLa细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能.结果 Western印迹结果显示多西环素在0...     

Cx43基因对近端流出道隔心肌化过程的调控机制

目的:探讨connexin43（Cx43）基因在小鼠近端流出道隔心肌化的作用及其机制。 方法:选用胚胎（ED）11.5 d至出生后1 d的Cx43基因剔除（KO）纯合型（Cx43-/-）、杂合型（Cx43+/-）及野生型（Cx43+/+）C57/BL6小鼠作为研究对象；采用PCR方法鉴定基因型；HE染色观察心脏结构，免疫组化法测定横纹肌肌动蛋白α-SCA、凋亡相关分子active caspase-3及神经嵴细胞的标志物AP-2的表达。 结果:①Cx43-/-小鼠大多出生后24 h内即死亡。大体解剖见明显的右室流出道圆锥部异常膨隆，右心房扩张；组织切片HE染色示右室流出道壁大量异常小梁状组织增生突起，形成多个囊状结构，右室流出道腔明显狭窄，右室腔扩张。Cx43+/-和Cx43+/+心脏无明显异常。②Cx43-/-小鼠近端流出道隔中央区域α-SCA的表达明显滞后。③Active caspase-3组化显示Cx43+/+凋亡细胞主要出现在近端流出道隔，ED12.5至ED15.5均可见到；Cx43+/-凋亡减少，Cx43-/-则仅见很少凋亡细胞。④Cx43-/-流出道AP-2的表达增多，且表达位置异常。 结论:Cx43 KO小鼠以右室流出道异常增生引起的梗阻性畸形为主要特征，该病变过程可能与胚胎期近端流出道隔心肌化迟滞有关，其近端流出道隔细胞凋亡减少和神经嵴细胞表达异常很可能参与了流出道心肌化异常的形成，表明Cx43在近端流出道隔心肌化过程中具有重要作用。     

血管紧张素Ⅱ经AT1受体和ERK1/2上调心肌细胞Cx43间隙连接

目的：探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。 方法： AngⅡ处理培养心肌细胞24 h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1 h加到培养基中，对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Western blotting分析、代谢标记和免疫沉淀测定、电镜观察心肌细胞Cx43表达、合成和间隙连接。 结果： Western blotting分析显示用10-9-10-6 mol/L AngⅡ刺激细胞24 h，Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)活性高于对照组（P<0.01），AT1受体拮抗剂缬沙坦（1 μmol/L）能完全阻断AngⅡ增加P-ERK1/2活性；用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，Cx43表达及P-ERK1/2活性均高于对照组(P<0.01)，ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059(1 μmol/L) 能阻断AngⅡ上调Cx43表达和增加P-ERK1/2活性。代谢标记和免疫沉淀测定显示AngⅡ处理组放射渗入Cx43的量明显高于对照组（P<0.01）,缬沙坦(1 μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加放射渗入Cx43的量。电镜观察表明用AngⅡ 0.1 μmol/L刺激心肌细胞24 h，AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小大于对照组（P<0.05）。 结论： AngⅡ通过AT1受体和ERK1/2促进培养心肌细胞合成Cx43，上调Cx43表达和增加间隙连接数目及大小。     

人类间隙连接蛋白CX58基因的克隆

目的 利用同源性分析，克隆定位新的人类间隙连接蛋白基因，并探讨该基因和遗传性耳聋的关系。方法 将小鼠Cx57基因的编码区与美国国家生物信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI)的表达序列标签数据库（database of expressed sequence tags,dbEST)进行BLAST（basic local alignment search tool）分析，在得到的代表人类新基因的EST序列构建重叠群上设计引物CX58F1/CX58F2和CX58R1／CX58R2，分别与cDNA文库及Ready cDNA载体臂上引物行巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)、cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得cDNA后与大规模测序结果比较，定位该基因，并在常染色体显性遗传性耳聋家系中进行突变分析。结果 将利用同源性分析得到的9个人类新的EST，构建重叠群设计引物行巢式PCR、RACE，在肝、肾的Ready cDNA和胎盘cDNA文库中得到1个全长cDNA并命名为CX58。通过与大规模测序结果比较，将该基因定位于1p32.3-p34.1。12个常染色体显性遗传性耳聋家系中未检测到突变。结论 通过同源性分析，我们克隆定位了1个新的人类间隙连接蛋白基因CX58。该基因突变可能不是引起常染色体显性遗传性耳聋的常见原因或与该病无关。     

ATP对人白血病细胞U937凋亡的影响

目的　探讨ATP诱导人白血病细胞U937细胞凋亡的机理。　方法　应用ATP(0 2 3g L)作用于培养的U937细胞 ,应用免疫荧光细胞化学方法检测连接蛋白Cx4 3、F 肌动蛋白 (F actin)、纽蛋白 (vinculin)的表达。　结果　ATP诱导U937细胞凋亡小体形成的同时Cx4 3表达增强、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装改善。　结论　ATP诱导人白血病细胞凋亡时 ,凋亡小体的形成与间隙连接蛋白Cx4 3表达、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装有着平行关系 ,表明它们在U937凋亡小体形成过程所起的重要作用     

胎盘绒毛Cx基因表达异常与胎盘发育异常

<正> 连接蛋白(Connexin Cx)基因编码装配缝隙连接通道的蛋白质,为细胞间物质交流和信息传递提供直接途径.而连接蛋白前体分子在4细胞期已经存在;表明CX基因在胚胎早期就开始表达,且表达时序和表达状态与胚胎发育、细胞分化密切相关.为了解胚胎人胎盘绒毛细胞Cx基因表达异常与胎盘发育异常的关系,本文采用Cx基因系列cDNA分子探针,通过Northern印迹法对5例正常胎盘、3例绒毛膜上皮细胞癌、2例葡萄胎及5例习惯性流产的胎盘绒毛细胞内Cx基因的表达状态进行了研究.结果显示:①在正常发育的胎盘绒毛中Cx31、Cx32、Cx40、Cx43、基因呈不同的表达状态,显示Cx基因在胎盘绒毛中的表达的多样性,说明胎盘绒毛不同细胞间在不同的通讯通道,且细胞连接蛋白基因的表达状态与绒毛细胞的分化及绒毛的发育过程基本一致;②绒毛膜上皮细胞癌Cx31、Cx43、基因不表达、而Cx32、Cx40、表达微弱;③葡萄胎中所有的Cx基因     

耳聋基因GJB3c．538C〉T突变致病性效应的初步研究

目的对人GJB3基因c．538C〉T点突变进行生物信息学及功能分析，预测并验证其致病性。方法聚合酶链反应扩增含GJB3基因c．538C〉T突变的编码区全序列，DNA测序验证后与T载体连接，再通过重组DNA技术，将GJB3基因编码区全序列导入pEGFP—N1载体，构建了GJB3基因野生型（pEGFP．Cx31-wT）和突变型（pEGFP．Cx31-R180X）表达载体，验证并纯化后，分别转染人胚肾HEK293细胞，观察EGFP-Cx31融合蛋白在细胞内定位表达情况。通过生物信息学方法分析c．538C〉T突变前后。Cx31蛋白的三维空间结构和平均势能变化。结果细胞内荧光定位结果显示GJB3c．538C〉T突变后，Cx31蛋白只于胞内表达，未能正常形成细胞间隙连接结构。而生物信息学分析结果也表明突变后Cx31蛋白的三维空间结构和Anolea原子平均势能均发生了明显变化。结论GJB3基因c．538C〉T点突变导致其编码的Cx31蛋白的结构与功能发生变化，可能通过影响细胞间隙连接的形成，从而导致遗传性耳聋的发生。     

激素性股骨头缺血性坏死模型兔股骨组织中间隙连接蛋白Cx43的表达

背景：激素性股骨头缺血性坏死的发病机制至今尚未完全阐明,间隙连接蛋白Cx43作为骨组织细胞间的主要间隙连接,通过介导骨细胞间信息、能力的正常传递参与调控骨组织细胞生长、分化,代偿性的骨增加或减少,间隙连接蛋白Cx43与激素性股骨头坏死发生发展的关系国内外尚少见报道。 目的：通过建立兔激素性股骨头坏死模型,初步探讨间隙连接蛋白Cx43在激素性股骨头坏死中的表达变化。 方法：将新西兰大白兔40只随机等分为两组,模型组采用内毒素+激素方法构建激素性股骨头坏死模型,对照组于相同时间点注射等量生理盐水。 结果与结论：建模4周后,苏木精-伊红染色结果显示,模型组股骨头软骨下区骨小梁变细,结构紊乱,空骨陷窝明显增多,脂肪细胞增多,髓腔内造血细胞明显减少;对照组股骨头软骨下区骨小梁排列整齐、很少见空骨陷窝,骨髓造血细胞丰富,脂肪细胞较少;免疫组织化学检测显示：Cx43蛋白阳性表达于骨小梁边缘成骨细胞及骨小梁内骨细胞胞浆上及骨髓细胞间质。Western blot检测显示,碱性磷酸酶和Cx43蛋白的表达在模型组中低于对照组(P < 0.05)。结果证实,在激素性股骨头坏死兔模型组织中Cx43蛋白表达下降,可能是激素性股骨头坏死发生发展的重要环节。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

大鼠心脏缺血对间隙连接蛋白Cx43分布的影响

目的：探讨大鼠心脏缺血区心肌间隙连接蛋白43（Connexin 43．Cx43）的分布特征。方法：结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型。用免疫组织化学法显示心肌缺血区、边缘带及非缺血区Cx43的分布。结果：缺血中心区和边缘区Cx43表达明显紊乱。缺血中心区心肌细胞端-端相接处的Cx43严重消失．重接排列到细胞侧-侧相接处。边缘区Cx43阳性颗粒开始从细胞端-端处向四周扩散,非缺血区Cx43的表达与止常心肌相同。结论：急性短时间心肌缺血时Cx43已开始大量扩散和重新分布,可能是导致心功能异常的结构基础。     

有汗型外胚层发育不良一家系的Cx30基因突变检测及产前诊断

目的对一个中国汉族有汗型外胚层发育不良（hidrotic ectodermal dysplasis，HED）家系进行了突变筛查，并在此基础上对该家系中已孕5个月的胎儿进行了产前诊断。方法共收集了该家系2例患者及4名正常人的外周血标本，抽取了胎儿的脐血标本。扩增Cx30基因的整个编码区序列，直接双向测序，突变进一步经内切酶酶切分析验证，在成功地获得基因诊断结果后，进一步进行产前诊断。首先从脐血DNA标本中扩出Cx30基因的整个编码区序列，经内切酶酶切分析检测突变，并进一步将整个编码区序列克隆入T载体，测序验证突变。结果在两个受累患者中检测了相同的突变，即在Cx30基因存在一个263C→T的点突变，该突变导致了在GJB6蛋白第2个跨膜区中氨基酸残基改变（A88V）。胎儿的检测结果表明其基因组中同样存在该致病突变，因此是1个受累胎儿。结论实验数据表明Cx30基因中错义突变A88V也是中国汉族人群中有汗型外胚层发育不良的致病原因之一，可以通过基因诊断和产前诊断阻止致病基因的传递。     

人鼻咽上皮组织中间隙连接蛋白基因表达谱的研究

目的:研究细胞间隙连接蛋白基因(Cx)在正常人鼻咽上皮组织中的表达谱,在此基础上探索细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌组织中的表达,为研究鼻咽组织癌变的原因和机理提供新思路。方法:根据基因库中人间隙连接蛋白基因的mRNA序列,合成间隙连接蛋白基因家族中13个基因的PCR引物,用RT-PCR的方法检测这些基因在鼻咽组织中的表达。结果:18例正常人鼻咽组织中,检出Cx30、31.1、37、40、43分别有16、16、17、15、17例表达,Cx26、31、32、45分别有10、11、9、9例表达,Cx36、46、46.6、50分别有1、0、1、3例表达。结论:正常人鼻咽组织中,主要表达的间隙连接蛋白为Cx30、31.1、37、40、43。     

miR-206靶向Cx43调控ERK1/2通路在兔激素性股骨头坏死中的作用

目的　探讨微小RNA（MicroRNA,miR）-206调控缝隙连接蛋白（connexin,Cx）43激活蛋白激酶（ERK）1/2通路是否参与兔激素性股骨头坏死的发生发展,并初步阐明其机制。 方法　成年新西兰大白兔60只,随机分为实验组和对照组各30只,实验组接受内毒素（10 mg/kg）联合甲强龙（20 mg/kg）注射制作激素性股骨头坏死模型。注射2周、8周和16周后两组动物行MRI检查,HE染色确定模型建立成功;模型兔与相应对照组股骨头标本行原位杂交和实时荧光定量PCR（qPCR）检测miR-206表达,Western blot、免疫组织化学和qPCR检测Cx43、ERK1/2和Runx2基因及蛋白表达。 结果　建模成功率为70%;原位杂交显示miR-206表达定位于兔股骨头髓腔、成骨细胞及少量骨细胞。造模后2周、8周和16周,与对照组比较,实验组兔股骨头内miR-206表达上调;Cx43、Runx2基因表达下调,Cx43、ERK1/2、Runx2蛋白表达下调。 结论　miR-206可通过下调其靶蛋白Cx43,抑制ERK1/2信号通路,抑制成骨分化,参与激素性股骨头坏死发生发展及修复。     

大鼠睾丸Cx43蛋白表达的加龄变化

目的:研究Cx43蛋白在大鼠出生后不同周龄睾丸中表达和定位,探讨Cx43蛋白与大鼠睾丸发育和精子发生的相关性。方法:应用免疫组织化学研究Cx43蛋白在1、3、5、7、9、11、13周龄SD雄性大鼠睾丸中的表达,利用血细胞计数板检测5~13周龄精子的数量。结果:Cx43蛋白于第1周开始在支持细胞、精原细胞中表达,第3周在精母细胞中表达,第5周开始在间质细胞、精母细胞、精子细胞中表达,随周龄增加而表达增加;第5周开始出现精子,随周龄增加而增加,Cx43蛋白表达与精子数量呈正相关。结论:Cx43蛋白在大鼠睾丸发育和精子发生的各个阶段均有表达,提示其参与睾丸发育和精子发生的调节。     

雌激素改善卵巢切除合并慢性铝中毒对大鼠心脏Cx43表达和金属元素变化的影响

目的 探讨雌激素治疗卵巢切除合并慢性铝中毒大鼠,对心脏间隙连接蛋白43(Cx43)表达和金属离子含量的影响. 方法 40只6月龄雌性SD大鼠,随机分为卵巢假切除组(Sham组),卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除合并慢性铝中毒组(OVX+Al组)和卵巢切除合并慢性铝中毒及尼尔雌醇灌胃组(OVX+Al+E2组).于术后3个月,利用离子体发射光谱仪测定心脏金属元素含量,采用免疫组织化学和图像分析法观测心肌细胞Cx43表达.结果 1. Cx43表达:Sham组心房肌Cx43遍布于心肌细胞侧面连接和端闰盘处.心室肌分布于心肌闰盘处.OVX组心房肌的Cx43颗粒部分由细胞侧-侧连接处移至闰盘处或杂乱排列,心室肌Cx43由闰盘处移至细胞侧-侧连接处或杂乱地无序排列,少部分出现在细胞质中,OVX+Al组Cx43排列类似于OVX组,且更加紊乱.OVX+Al+E2组心房肌Cx43回复正常分布,但心室肌未发现回复.2.图像分析结果,各组大鼠心肌细胞Cx43的面积构成比比较无显著差异.3.金属元素含量:在Sham组,金属元素在心脏含量的排列顺序如下:Mg＞Ca＞Fe＞Zn＞Al＞Si＞Cu＞Mn＞Se和Cd.各组间比较具有显著差异的是:与Sham组比较,OVX组Zn降低;OVX+Al+E2组Al、Cd、Si、Se均升高;OVX+Al组与OVX组比较,Si升高、Zn降低.OVX+Al+E2组与OVX+Al组比较, Cd、Mn、Se升高. 结论雌激素改善卵巢切除及加铝后引起的心脏金属元素含量改变和心肌细胞间隙连接蛋白Cx43重构.     

过表达连接子蛋白40(Cx40)通过引起细胞周期阻滞抑制H9c2大鼠心肌细胞增殖

目的 建立过表达连接子蛋白40(Cx40)的H9c2心肌细胞稳定株，初步探讨慢病毒载体介导的Cx40蛋白过表达对H9c2细胞增殖的影响及其相关机制。方法 采用实时定量PCR从H9c2细胞株扩增Cx40基因片段，与慢病毒载体质粒pLVX-IRES-Puro连接，获得重组pLVX-Flag-Cx40表达载体。通过与包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞，获得携带Flag-Cx40的重组慢病毒颗粒。感染的H9c2细胞经嘌呤霉素(puromycin)筛选出稳定表达株(H9c2-Flag-Cx40细胞)。采用Western blot法检测Cx40蛋白表达情况；通过CCK-8法检测Cx40对H9c2细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期的变化；实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的mRNA表达；Western blot法检测cyclin D1蛋白表达；免疫共沉淀(Co-IP)实验检测H9c2细胞Cx40和Yes相关蛋白(YAP)的相互结合情况；分离胞质、胞核蛋白，利用Western blot法检测Cx40对YAP细胞定位的影响。结果 测序结果显示成功构建重组pLVX-Flag-...     

Cx43、心脏发育与先天性心脏病

Cx43是哺乳动物心脏中最主要的连接蛋白。近年的研究表明它在心脏发育中具有重要作用；Cx43基因可能是失天性心脏病的重要候选基因。本文综述了Cx43的结构、表达及其与心脏发育关系的研究进展。