阿克拉霉素B、阿霉素和小檗碱对人外周血NK细胞活性影响的初步研究

本文研究了阿克拉霉素B、阿霉素和小檗碱对人外周血NK细胞活性的影响.NK细胞活性由测定~(51)Cr从NK细胞作用的标记K562细胞的释放率来决定.阿克拉霉素B(0.5和1.Oμg/ml),阿霉素(0.5和1.0μg/ml)和小檗碱(1.0和10μg/ml)作用1小时后,未见对NK细胞活性有显著影响,提示三个药物可能即不明显抑制也不促进NK细胞的细胞毒作用.阿克拉霉素B和小檗碱在高浓度时表现轻微的促进作用,但阿霉素有轻微抑制作用.三个药物均有不同程度地增加靶细胞~(51)Cr的自然释放率,以阿霉素最强,提示有细胞膜毒性产生.因而尚难肯定阿克拉霉素B和小檗碱的NK细胞活性促进作用.     

阿霉素和阿克拉霉素A对HeLa细胞DNA的嵌合作用

本文用琼脂糖电泳观察国产阿霉素和阿克拉霉素A对HeLa细胞DNA的嵌合作用.DNA经琼脂糖电泳及溴乙锭染色后,紫外荧光摄影,以药物与双链DNA发生嵌合作用时DNA的溴乙锭染色性丧失为嵌合指标.实验发现阿霉素在低浓度时(25μg/ml)即可与HeLa细胞DNA发生嵌合作用,而阿克拉霉素A仅在高浓度(400～800μg/ml)才发生此作用.本实验实现了这两个蒽环类抗生素对DNA嵌合能力的差异.     

平阳霉素对HeLa细胞DNA的体外断裂作用

用琼脂糖电泳及DNA电镜技术观察平阳霉素对HeLa细胞DNA的体外断裂作用。药物处理的DNA经琼脂糖电泳及溴乙锭染色后,紫外荧光摄影。0.5μg DNA与5μg/ml药物作用2h及200μg/ml作用10min即可见DNA断裂。应用碱性蛋白膜展层法制作DNA电镜标本,5μg/ml DNA与10μg/ml药物作用2h可见自然弯曲的DNA长链(±SD=5.97±1.95μm)被切割成DNA短段(±SD=0.73±0.24μm),对照组DNA长度长于药物处理组(P<0.01)。     

阿齐霉素对弓形虫形态影响的研究

为评价阿齐霉素对弓形虫的抑制、杀伤效应,体外培养的猴肾细胞经弓形虫感染后,给予不同浓度阿齐霉素(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml),然后以电镜观察药物作用后的弓形虫形态、体积、超微结构的改变。结果经透射电镜观察发现:虫体在药物作用下发生崩解,细胞内留下空泡,有的呈团块,没有明显的细胞器可见。通过扫描电镜观察,由于阿齐霉素的影响,使附着于猴肾细胞表面的虫体与未加药组相比明显皱缩,从而充分反映阿齐霉素的抑制、杀伤虫体作用。     

三氧化二砷与顺铂联用对人乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的探讨三氧化二砷与顺铂联合应用对人乳腺癌细胞的杀伤作用。方法将三氧化二砷与顺铂单独及联合应用于体外培养的乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法测定细胞抑制率,于透射电镜下观察细胞超微结构变化;用流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果1μg/ml三氧化二砷与1μg/ml顺铂联合应用于乳腺癌MCF-7细胞48h后,细胞抑制率为27.01%,明显高于单用三氧化二砷（1μg/ml）时的12.12%及单用顺铂（1μg/ml）时的10.93%。细胞超微结构及流式细胞仪观察均显示,联合应用比单用促凋亡效应更显著（P〈0.01）。结论三氧化二砷与顺铂联合应用,可高效杀伤人乳腺癌细胞,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

异鼠李素诱导A549细胞凋亡的研究

目的观察异鼠李素是否能诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡及相关基因的变化。方法20μg/ml异鼠李素处理A549细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达。结果10～640μg/ml异鼠李素可抑制A549细胞生长,抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测20μg/ml异鼠李素处理后出现明显凋亡峰;药物可使bax表达上调,bcl-2表达明显下降,表达改变有浓度依赖性。结论异鼠李素可抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,bax表达上调有关。     

阿齐霉素对弓形虫形态影响的研究

为评价阿齐霉素对弓形虫的抑制、杀伤效应,体外培养的猴肾细胞经弓形虫感染后,给予不同浓度阿齐霉素(0．1μg／ml、1μg／ml、10μg／m1),然后以电镜观察药物作用后的弓形虫形态、体积、超微结构的改变。结果经透射电镜观察发现：虫体在药物作用下发生崩解,细胞内留下空泡,有的呈团块,没有明显的细胞器可见。通过扫描电镜观察,由于阿齐霉素的影响,使附着于猴肾细胞表面的虫体与未加药组相比明显皱缩,从而充分反映阿齐霉素的抑制、杀伤虫体作用。     

蛇毒心脏毒素诱导肺癌A549细胞的凋亡机制研究

目的:研究眼镜蛇心脏毒素(CTX)诱导肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:MTT法测定CTX体外细胞毒性作用;吉姆萨染色法观察CTX对A549细胞形态学的影响;线粒体膜电位(JC-1)法检测CTX诱导A549细胞后细胞JC-1的变化;流式细胞仪检测CTX对A549细胞凋亡的影响;Western blot法测定细胞色素C、凋亡蛋白酶前体(Procaspase)-3、Procaspase-9的表达;通过S180小鼠肉瘤模型检测CTX体内抗肿瘤活性。结果:CTX作用于A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.770μg/ml;0.5、1.0、2.0μg/ml CTX可引起A549细胞明显缩小,在高倍镜下可观察到胞核皱缩,形成染色质边集等形态学改变;流式细胞仪检测到CTX使A549细胞出现凋亡,并且具有量效关系;5μg/ml CTX作用于A549细胞0.5 h可使细胞JC-1降低;胞浆中检测到细胞色素C时,Procaspase-9的含量没有明显变化,随后逐渐减少,CTX诱导细胞凋亡具有时效关系;体内抑瘤实验显示在剂量为0.5、1.0、2.0 mg/kg时CTX对A549细胞有明显的抑制作用。结论:CTX对A549细胞有细胞毒性,可以使线粒体内细胞色素C释放,并激活Procaspase-9和Procaspase-3诱导A549细胞的凋亡。     

人支气管永生化HBE细胞形态计量学分析

目的:探索人支气管永生化HBE细胞超微结构的三维形态结构特征并与人肺腺癌A549细胞进行比较分析。方法:按常规方法制备HBE细胞与A549细胞的透射电镜样品。用Image-ProPlus图像分析软件设计网格测试系统,应用体视学原理和方法,分别测算HBE细胞和A549细胞核的体视学参数包括核体密度(VVn)、核表面积密度(SVn)、核表面积与体积比(RSVn)、核数密度(NVn)、核平均体积(vn)、核平均表面积(sn)和核浆比(Rnp);核仁的体视学参数包括核仁体密度(VVnu)、核仁表面积密度(SVnu)、核仁表面积与体积比(RSVnu)、核仁数密度(NVnu)、核仁平均体积(vnu)、核仁平均表面积(snu)等共13种体视学参数的数值。结果:①HBE细胞核平均体积(vn)和核平均表面积(sn)分别为206.74μm3和184.75μm2,明显小于A549细胞;②HBE细胞核及核仁的表面积与体积比(RSVn)分别为0.9192和2.3536,均大于A549细胞;③HBE细胞核浆比为0.3829,小于A549细胞。结论:HBE细胞核及核仁的形态与肺腺癌A549细胞有差异,其核和核仁的表面积、体积及形态大小均小于A549细胞。     

新抗病毒抗生素变活霉素A

变活霉素A为一新的蒽环类广谱抗病毒抗生素,在组织培养内对4株单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1),4株单纯疱疹Ⅱ型病毒,流感甲_3病毒及柯萨奇B_6病毒的致细胞病变作用均有抑制活性,IC_(50)为6.25～12.5μg/ml。相同剂量可降低HSV-1繁殖量 1.5～3.5个对数值(log10)。细胞感染HSV-1后 4～10小时再用变活霉素A处理,仍可抑制,推迟细胞病变的发展.250～500μg/ml变活霉素A在无细胞系统内对HSV-2 DNA聚合酶,人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶,鸭乙型肝炎病毒DNA聚合酶及牛胸腺DNA聚合酶α均无抑制活性。     

三叶青提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青乙醇提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法 采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青乙醇提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果在质量浓度为1～625μg/ml范围内,随着三叶青乙醇提取物浓度增大可抑制A375细胞的增殖(P<0.01);三叶青乙醇提取物浓度在1～5μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;而在25～625μg/ml时,对A375细胞有一定毒性。结论三叶青乙醇提取物在一定浓度范围内(1～625μg/ml)能抑制A375细胞的增殖,且呈剂量依赖关系。     

人促红细胞生成素在CHO细胞上的表达

为了获得人促红细胞生成素(EPO)的高效表达,以EPO gDNA 为基础构建了两个真核表达载体pDE、pCE,将它们分别经脂质体转染CHO-dhfr-细胞,其48h瞬时表达量分别为27.5ng/ml与88.90ng/ml.然后用氨甲喋呤(MTX)对转染细胞进行加压并挑选细胞克隆,共获得3株高效表达EPO的工程细胞株A,B,C,其中A来自质粒pCE,B和C来自pDE,在2×10-6mol/L的MTX的压力下,它们48h的最高表达水平分别为A:8.7μg/ml,B:10.76μg/ml,C:16.44μg/ml.经网织红细胞法测得它们均具有体内生物活性.     

梯度洗脱HPLC法测定盐酸平阳霉素及注射药物中的有关物质

目的 建立梯度洗脱HPLC法测定盐酸平阳霉素及注射用盐酸平阳霉素中的有关物质.方法 采用C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,己烷磺酸钠溶液(己烷磺酸钠7.53g与乙二胺四乙酸二钠3.72g以0.08mol/L乙酸溶液溶解并稀释至1000ml,用氨溶液调节pH为4.3)为流动相A,甲醇:乙腈(70:30)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长254nm,柱温30℃.结果 盐酸平阳霉素溶液在10～500μg/ml范围内,溶液浓度与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;最低检测浓度1μg/ml.结论 本法可用于测定盐酸平阳霉素及注射用盐酸平阳霉素中的有关物质.     

抗生素

阿克拉霉素A的作用机理Ⅰ. 对大分子合成的影响作者以小鼠肿瘤细胞株及大肠杆菌为材料,研究了阿克拉霉素A的作用机理。结果表明,抗生素浓度分别为0.0125和0.0063～0.0031微克/毫升时可完全和部分抑制小鼠成淋巴母细胞瘤L5178y细胞的生长。在完整的L5178y细胞株,抗生素抑制RNA的合成比对DNA大,即抑制50％RNA合成时抗生素浓度为0.07微克/毫升;对50%DNA合成则需要1.0微克/毫升。阿克拉霉素A选择性抑制程度较阿霉素更明显,但对蛋白质     

皮鳞癌1号方对人皮肤鳞状癌A431细胞生长的抑制作用

目的:研究皮鳞癌1号方对人皮肤鳞状癌A431细胞生长的抑制作用。方法:以0、5、10、20、40、80μg(生药)/ml皮鳞癌1号方分别作用A431细胞24、48、72 h后,测定光密度并计算细胞增殖抑制率以评价其抑制作用;在显微镜下观察细胞形态学变化;光化学法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性;免疫细胞化学法测定B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:5、10、20、40、80μg(生药)/ml皮鳞癌1号方对A431细胞均有抑制作用(P<0.01);5、40μg(生药)/ml皮鳞癌1号方可使A431细胞增殖变缓,细胞出现皱缩,与周围细胞黏附力减弱;5、10、20μg(生药)/ml可明显增强A431细胞LDH活性、Bax表达,减弱Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax的比值(P<0.01)。结论:皮鳞癌1号方对A431细胞的增殖具有一定的抑制作用;可能与促进Bax表达、抑制Bcl-2表达、降低Bcl-2/Bax的比值有关。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的:研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞48、72 h后,凝胶电泳法测定细胞DNA裂解情况。以0(阴性对照)、40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞24、48、72 h后,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期分布情况;免疫组化法测定细胞生存素(Survivin)表达。结果:40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞48、72 h后出现凋亡细胞特有的梯状条带;与阴性对照比较,40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞24、48、72 h后细胞凋亡率升高,G0/G1期细胞比例升高,Survivin表达减弱,且呈时间、浓度依赖关系。结论:藤梨根乙酸乙酯提取物可诱导A549细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期,其机制可能与降低Survivin表达有关。     

维生素C对PM2.5致人肺癌A549细胞周期阻滞的影响

目的研究维生素C对PM2.5致人肺癌A549细胞周期阻滞的影响。方法用设定浓度的PM2.5(50、100和200μg/ml)单独或联合20μg/ml维生素C分别处理A549细胞24 h。用MTT比色法检测细胞活力,荧光探针检测细胞内活性氧,试剂盒检测MDA和SOD变化,用流式细胞仪检测细胞的周期时相,用Western blot检测细胞周期调控蛋白GADD45α的表达量。结果与空白对照组相比,PM2.5(50、100和200μg/ml)可降低细胞活力,提高ROS和MDA含量,降低SOD酶活,并在100和200μg/ml浓度组提高GADD45α蛋白表达量,使A549细胞阻滞在G2期。而20μg/ml维生素C可显著抑制上述损伤指标的升高,提高SOD酶活性,降低G2期细胞阻滞。结论本实验初步证明PM2.5可引起A549细胞氧化损伤并导致细胞发生G2期阻滞,维生素C抗氧化剂可有效抑制这一过程的发生,对细胞起到保护作用。     

β受体阻滞剂对乳鼠心肌细胞内质网应激致凋亡途径的影响

目的通过体外培养乳鼠心肌细胞,探讨β受体阻滞剂对乳鼠心肌细胞凋亡率及内质网应激作用的影响。方法培养乳鼠心肌细胞,确定β受体阻滞剂的饱和浓度,原代培养乳鼠心肌细胞72h后给予β受体阻滞剂溶液和衣霉素溶液干预,实验分4组:空白对照组、50μg/ml美托洛尔组、10μg/ml衣霉素组、10μg/ml衣霉素+50μg/ml美托洛尔组。确定美托洛尔的饱和浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组内质网应激指标GRP78、内质网应激致凋亡指标Caspase12,流式细胞术检测实验各组乳鼠心肌细胞凋亡率,确定美托洛尔对内质网应激致凋亡途径的影响作用。结果①美托洛尔的浓度为50μg/ml时,对内质网应激的影响已达最大。②与空白对照组比较,50μg/ml美托洛尔组心肌细胞内质网应激致凋亡指标Caspase12表达及心肌细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。10μg/ml衣霉素组、50μg/ml美托洛尔+10μg/ml衣霉素组心肌细胞内质网应激致凋亡指标Caspase12及心肌细胞凋亡率较空白对照组均明显增加(均P<0.05),且在衣霉素组时心肌细胞中内质网应激致凋亡指标Caspase12及心肌细胞凋亡率均最高,而50μg/ml美托洛尔+10μg/ml衣霉素组与10μg/ml衣霉素组比较,心肌细胞内质网应激致凋亡指标Casepase12及心肌细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论美托洛尔浓度在50μg/ml时为内质网应激保护的饱和浓度,β受体阻滞剂可以减轻内质网应激所致的凋亡途径。     

高效液相色谱法与微生物法测定血清乙酰白霉素的比较

目的:寻求一种准确度和灵敏度高、重现性好的乙酰白霉素血药浓度高效液相色谱(HPLC)测定法。(?)建立HPLC测定乙酰白霉素方法,然后以志愿男性口服乙酰白霉素颗粒剂后采取血样为研究样本,同步用微生物法和HPLC进行测定比较分析。结果:建立的HPLC色谱图:乙酰白霉素标准液与经活性碳处理乙酰白霉素口服颗粒剂甲醇液在231nm波长下,均呈现8个组分,血清药物和血清空白色谱图显示有某些杂质可干扰A_9和A_8,其他组分同标准药物色谱图。试验方法的线性关系良好,不同标准浓度与乙酰白霉素主要组分A5峰高的r=0.9996;药物浓度在0.026～3.0μg/ml范围内与A_5峰高呈直线关系;平均回收率96.43％,实际最小检测量0.02μg/ml,变异系数(CV):药物浓度在0.5与1.5μg/ml时,CV_(批内)为4.75％与5.80％,CV_(批间)为6.42％与6.70％。微生物法:线性关系:不同浓度标准液与抑菌圈直径的r为0.9986,药物浓度在0.06～2.00μg/ml范围内与抑菌圈直径线性关系良好;最小检出量0.06μg/ml;CV为5.07％～8.8％。结论:HPLC乙酰白霉素血药浓度测定法准确度与灵敏度高,重现性良好的试验方法。     

石棉纤维间接作用的细胞毒性及遗传毒性

目的 探讨石棉纤维与培养的人肺泡上皮细胞间接作用（纤维不与细胞直接接触）后的细胞毒性和遗传毒性，以及活性氧在其中的作用。方法 用固体作用物与培养细胞隔开的TRANSWELL培养板，观察由国际抗癌团体（UICC）提供标准温石棉对人肺泡上皮（A549）细胞间接作用及直接作用不同时间后的细胞毒性和遗传毒性。同时，在染毒过程中分别加入活性氧清除剂[过氧化氢酶（CAT）细胞间接作用及直接作用不同时间后的细胞毒性和遗传毒性。同时，在染毒过程中分别加入活性氧清除剂[过氧化氢酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD），甘露醇（Mannitol)]，以观察活性氧在石棉间接作用引起的细胞毒性及遗传毒性中的影响。结果 UICC温石棉纤维直接与A549细胞接触，作用24h,在40μg/ml时可引起细胞存活率明显下降，而石棉纤维间接与细胞作用24h，则在80μg/ml时才引起细胞存活率的明显下降，在石棉直接作用时，3种抗氧化剂均可部分抑制石棉导致的细胞存活率下降，但均未抑制到对照组水平；而在石棉间接作用时，3种抗氧化剂均可完全抑制石棉纤维导致的细胞存活率下降，UICC温石棉纤维直接与A549细胞接触，作用24h，在10μg/ml时即可明显引起细胞DNA链断裂，而石棉纤维间接与细胞作用24h，即使在80μg/ml时也未能引起细胞DNA链断裂程度的明显增加。而当较高浓度的温石棉与A549细胞间接作用3h，均可引起细胞DNA链断裂的明显增加，3种抗氧化剂均可明显抑制石棉纤维导致的细胞DNA链断裂，其中，甘露醇和SOD可完全抑制石棉的这种损伤作用。结论 石棉纤维在不与细胞直接接触时也可通过其表面产生的活性氧造成靶细胞损伤和遗传物质的损伤，该研究结果可为对石棉采取表面改性以降低石棉纤维的毒性提供理论依据。