血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与黎族支气管哮喘相关作用的研究

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与黎族支气管哮喘之间的关系。方法采用等位基因特异性聚合酶链式反应技术等方法,检测108例黎族支气管哮喘患者及115例健康黎族人PAF-AH基因第9外显子Val279Phe基因多态性和酶活性。结果(1)哮喘组与对照组研究对象血浆PAF-AH突变基因型频率、突变等位基因频率间差别均无显著性意义(P>0.05);(2)哮喘缓解组与对照组研究对象血浆PAF-AH活性间差别无显著性意义(P>0.05),二者均高于哮喘发作组(P<0.001);(3)不论是在对照组,还是在哮喘缓解组,Val/Val基因型和Val/Phe基因型血浆PAF-AH活性间差别均有显著性意义(P<0.01),而两组研究对象在同一基因型中血浆PAF-AH活性间差别均无显著性意义(P>0.05)。结论海南黎族哮喘与PAF-AH基因型无关,但其哮喘所处状态与PAF-AH活性有关。     

原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的 探讨β－肌球蛋白重链（βMHC）基因点突变与肥厚型心肌病（HCM）及扩张型心肌病（DCM）发病的关系。方法 选择56例原发性心肌病病人（HCM13例，DCM43例）及53例健康对照，应用聚合酶链反应（PCR）限制性扩增心脏β－肌球蛋白重链基因第13、14外显子，用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物，分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段，提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论 β－肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。     

一个新的双重杂合突变Met306Val和Thr181Asn导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症

目的 对1例遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺乏症患者及其家系成员进行凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因分析,揭示其发病的分子机制。方法提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,聚合酶链反应（PCR）法扩增FV0基因8个外显子及其侧翼序列,核苷酸序列分析检测FV0基因异常;将先证者突变序列、家系成员和100名正常人相应序列的PCR产物用限制性内切酶EC091I消化,以进一步确定基因突变位点并排除基因多态性;用蛋白质分子模型模拟软件对基因突变的分子结构病理学进行分析。结果先证者FV0基因8号外显子的10833位核苷酸发生A→G杂合突变,导致Met306Val;先证者7号外显子的9643位核苷酸发生C→A杂合突变,导致Thr181Asn。家系分析前者遗传于母亲,后者遗传于父亲,先证者胞妹为A10833G（Met306Val）杂合子。蛋白质空间构型模拟分析发现,Met306Val突变位于FⅦ分子的表面,产生空间位阻影响蛋白的结构和功能。结论FⅦ基因Met306Val和m18lAsn双重杂合突变是导致该遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症的分子机制;推测Met306Val突变改变了蛋白质分子的空间构型,从而影响FⅦ蛋白的功能。Met306Val突变是一种国际上尚未报道的新的突变类型。     

原发性心肌病β肌球蛋白重链基因突变研究

目的探讨β-肌球蛋白重链(βMHC)基因点突变与肥厚型心肌病(HCM)及扩张型心肌病(DCM)发病的关系。方法选择56例原发性心肌病病人(HCM13例,DCM43例)及53例健康对照,应用聚合酶链反应(PCR)限制性扩增心脏β-肌球蛋白重链基因第13、14外显子,用DdeⅠ、NⅠaⅢ限制性内切酶酶解其扩增产物,分析有无8848位及9124位点突变。结果 1例扩张型心肌病病人出现8848位点突变应产生的394bp片段,提示该病人可能存在8848位点突变。HCM病人未发现突变。结论β-肌球蛋白重链基因可能是DCM遗传易感性的基因标志之一。     

中国扩张型心肌病与β-肌球蛋白重链基因的相关性

目的研究β-肌球蛋白重链基因(MYH-7)在中国扩张型心肌病(DCM)患者中的突变情况。方法对81例DCM患者(其中8例为家族性DCM先证者)进行MYH-7基因突变扫描,聚合酶链反应分别扩增MYH-7基因功能区的15个外显子片段,双脱氧末端终止法测序。结果在所有DCM患者中未检出MYH-7的致病突变,仅在1例散发性DCM患者的7号外显子检出同义突变。结论MYH-7可能不是中国DCM患者的主要致病侯选基因。     

扩张型心肌病与血管紧张素转换酶基因多态性关系的研究

目的；研究血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与扩张型心肌病（DCM）的关系。方法：应用聚合酶链反应检测43例扩张型心肌病病人及99例正常对照的ACE基因I／D多态性。结果：DCM组ACE基因型DD型及D等位基因频率分别为30．2％和0．512。显高于正常对照组14．1％和0．375（P＜0．05），比值比（odds ratio,OR)分别为2．63，1．76。结论：ACE基因I／D多态性可能与扩张型心肌病发病有关，DD基因型可能是DCM发病的危险因子。     

受磷蛋白基因突变与中国成都地区扩张型心肌病的相关性研究

目的研究扩张型心肌病(DCM)患者的肌浆网受磷蛋白(phospholamban,PLN)基因突变情况,探讨该基因与中国DCM患者发病的关系。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法并结合核苷酸序列测定对89例DCM患者及110例对照组的PLN基因进行分析。结果病例组及对照组中均未发现存在异常构象,通过DNA测序未发现存在PLN基因第25核苷酸位点的C→T错义突变及116核苷酸位点的T→G突变。结论本研究未发现中国成都地区DCM患者PLN基因第25和116核苷酸位点存在突变。     

人类β-防御素-1（hBD-1）基因多态性与COPD的相关性研究

目的探讨中国北方汉族人人类β-防御素-1（humanβ-defensin-1,hBD-1）基因多态性与慢性阻塞性肺疾病（COPD）易感性的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP）检测hBD-1基因外显子2（exon2 Val38Ile）基因型在84例中国北方汉族人COPD患者和90例健康对照者中的分布特点。结果 hBd-1基因exon2 Ile38等位基因在COPD及健康对照组中突变频率分别为14.28%、5.00%,2组比较差异有统计学意义（P=0.017）。结论 hBD-1 exon2 Val38Ile基因多态性是中国汉族人群COPD发病的危险因素（OR=2.776）,hBd-1 exon 2基因Ile38突变与吸烟对COPD的发生存在正协同作用。     

儿茶酚—O—甲基转移酶Val158Met基因多态性与海洛因依赖的相关性研究

目的：探讨儿茶酚－O－甲基转移酶（COMT）基因多态性与海洛因依赖是否相关。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）及限制性内切酶（NaIII)酶切片断多态（RELPs)技术对154例患者及98例正常对照研究以探讨COMT（Val158Met)基因多态性与海洛因依赖是否相关。结果：COMT（Val158Met)基因多态性与海洛因依赖存在相关（P＜0．01）,编码低活性COMT的等位基因Met158可能是海洛因依赖的易感基因之一（OR＝2．146）。结论：COMT（Val158Met)基因多态性与海洛因依赖相关,编码低活性COMT的等位基因Met158可能是海洛因依赖的易感基因之一。     

变性梯度凝胶电泳分析PAH基因外显子3突变

采用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳、限制性内切酶分析及ＤＮＡ直接序列分析等方法，对５８例南方地区中国人苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子３进行了分析，发现９例ＰＫＵ患者外显子３存在突变，占ＰＫＵ患者的１５．５２％（９／５８），外显子３突变占ＰＡＨ基因突变的７．７６％（９／１１６），６例患者存在ＡｒｇｌｌｌＴｅｒ错义突变，该突变位点的基因内频率为５．１７％。结果提示中国南方和北方人群ＰＫＵ分子遗传学可能存在一定程度的差异。     

人食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变的研究

目的：研究人食管癌组织中DNA聚合酶β（POLB）基因的突变情况。方法：利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）、单链构象多态性（SSCP）和序列分析对30例人食管癌标本组织中DNA聚合酶β基因进行了检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据。结果：手术切除浸润癌组30例食管癌标本中有13例POLB发生变异,突变率为43．3％（13／30）;而癌旁对照29例正常,仅1例异常。早期原位癌组14标本中有5例POLB发生变异,突变率为35．7％（5／14）;另外,在1例食管鳞状上皮增生中也发现有POLB变异发生。在7例癌组织中存在相同58bp(177位到234位）的基因片段缺失;共有8种点突变形式：（1）375位A→G（Ile→Val),(2)454位T→C（Phe→Ser),(3)462位G→T（Tlu→终止码）,（4）466位G→A（Gly→Glu）,（5)613位A→T（Lys→Ile),(6)648位G→C（Gly→Arg),(7)660位A→G（Arg→Gly)(8)670位A→G（Glu→Gly)。结论：本研究首次在食管癌中发现POLB基因突变;该酶基因突变可能与食管癌的发生、发展相关。     

GSTP1第5外显子多态性与COPD关系研究

目的研究谷胱甘肽S转移酶P1基因(GSTP1)第5外显子遗传多态(A/G)与中国西南汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)的相关性.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析法(PCR-RFLP),检测91例COPD患者与87例健康对照者GSTP1第5外显子各种基因型和等位基因频率,并分析其与COPD两种临床表型、肺损伤CT改变的关系.结果GSTP1第5外显子各种基因型频率及等位基因频率在COPD组与对照组间的分布差异无显著性(P>0.05),Ile105的频率在肺气肿型(红喘型)中显著高于支气管炎型(紫肿型)(P<0.05),携有Ile105的患者,其CT肺气肿损伤评分显著高于携有Ile105的患者(P<0.05).结论GSTP1第5外显子遗传多态(A/G)可能与中国西南汉族人群COPD易感性无关,但可能与COPD的临床表型、肺实质损伤有关.     

甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白基因异亮氨酸796缬氨酸多态性与冠心病、高脂血症的相关研究

目的 :研究湖北汉族人群甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白 (SCAP)基因异亮氨酸 (Ile) 796缬氨酸(Val)多态性 ,探讨该多态性与冠心病、高脂血症的关系。方法 :应用PCR RFLP的分析方法 ,检测 1 5 0名湖北汉族体检健康者、1 32例冠心病和 6 6例高脂血症患者SCAP基因Ile796Val的等位基因频率。结果 :①冠心病、高脂血症、对照组等位基因A的频率分别为 0 .4 5 ,0 .4 8,0 .32 ,等位基因G的频率分别为 0 .5 5 ,0 .5 2 ,0 .6 8。②冠心病、高脂血症与对照组之间的基因型和等位基因的频率差异均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。③冠心病、高脂血症组内AA基因型的TC水平明显高于GG基因型的TC水平 (P <0 .0 5 )。结论 :SCAP基因Ile796Val多态性与冠心病、高脂血症密切相关。提示SCAP基因A等位基因与血浆高胆固醇有着密切的关系 ,可能是罹患高脂血症、冠心病的危险因子。     

应用变性高效液相色谱技术筛查一个正常血钾性周期性麻痹家系的SCN4A基因突变

目的 应用变性高效液相色谱(DHPLC)技术筛查一发生Met1592Val替换的正常血钾性周期性麻痹(normoKPP)家系的SCN4A基因,证实该突变为疾病相关突变,并总结其在此家系的临床表型特点。方法 总结一normoKPP家系14例患者的临床特点,应用DHPLC技术筛查SCN4A基因全部24个外显子,并对发现异常洗脱峰者进行测序。结果 该家系具有典型的normoKPP临床特征,无肌强直表现及早显、性别偏移现象,病程呈良性过程,发病早晚与症状严重程度及预后无相关。DHPLC筛查发现在外显子1及24存在杂合二倍体,测序及连锁分析证实位于外显子1的突变为良性多态性,外显子24的Met1592Val替换为疾病相关突变。结论 国人存在Met1592Val突变,此突变可导致normoKPP。normoKPP与高钾性周期性麻痹临床表现相似,两者可存在共同突变。     

培养的人癌细胞株(系)pot1基因exon12突变筛选

目的对培养的人癌细胞株（系）中pot1（protection of telomeres 1）基因exon12进行突变筛选。方法从27株培养的人癌细胞株（系）提取染色体组DNA，用PCR方法扩增hpot1基因exon12，PCR产物纯化后直接测序，测序结果与GenBank和NCBI数据库中pot1基因的数据比较，对培养的人癌细胞株（系）中hpot1基因exon12进行突变分析。结果测序结果显示，人宫颈癌Hela细胞株和人卵巢癌细胞株（高转移）HO8910-PM等5个来源于女性生殖系统癌细胞株中的4个，在hpot1基因exon12区有相同的置换突变（G17722→C），为错义突变，对应于cDNA的G1385→C，多肽链的Leu454→Phe；而其余23个不同来源的癌细胞株（系）均无突变。结论提示ppot1基因exon12（17722碱基）是突变热点区。并且这种突变可能具有女性生殖系统肿瘤特异性。     

Gene polymorphism of alpha-2 macroglobulin in patients with Parkinson''''s disease

Parkinson' s disease(PD) is one of the com-mon neurodegenerative disorders in the aged popu-lation,which is thought to be for the environmen-tal factors acting on predisposed individuals ingene. The typical pathologic manifestation of PDis the presence of Lewy body (LB) in substantianigra dopaminergic neurons. As the major compo-nent of LB is protein, those genes involved in pro-tein aggregation may also be the candidate genes ofPD. Biochemical studies showed that α2-macroglobulin (A2M) …     

酪氨酸羟化酶基因新突变导致多巴反应性肌张力障碍家系分析

【目的】研究多巴反应性肌张力障碍（DRD）家系TH基因突变特点。【方法】提取先证者及其父母和两个姐姐外周血基因组DNA,使用高通量测序（NGS）的方法对已知肌张力及运动障碍相关的256个致病基因进行检测。【结果】家系中2例患者（先证者和其大姐）的酪氨酸羟化酶（TH）基因外显子14、9存在c.1481C>T（p.Thr494Met）、c.943G>A（p.Gly315Ser）复合杂合突变,父母分别携带一个杂合突变,其表型正常的二姐和50名正常对照者均未检测到该突变。【结论】TH基因c.1481C>T（p.Thr494Met）、c.943G>A（p.Gly315Ser）突变导致了该DRD家系的基因异常,并且发现了新的TH基因突变,扩展了DRD基因型与临床表型的关系谱,对DRD的早期精准诊断和治疗是改善预后的关键。