miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响及MAPK/ERK信号通路在其中的作用

目的探讨miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响,分析MAPK/ERK信号通路在其中的作用。方法将培养的HTR-8/SVneo细胞分为4组,分别为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、miR-377模拟物组和miR-377+U0126组。对照组不进行转染;H_(2)O_(2)组以250μmol/L的H_(2)O_(2)作用24 h;miR-377模拟物组和miR-377+U0126组通过脂质体Lipo-fectamine3000将H_(2)O_(2)作用24 h后的HTR-8/SVneo细胞转染miR-377模拟物,miR-377+U0126组转染miR-377模拟物前1 h,加入浓度为20μmol/L的U0126处理HTR-8/SVneo细胞,转染48 h后进行后续实验。应用实时荧光定量PCR检测miR-377的表达,应用CCK-8实验检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况,应用比色法检测HTR-8/SVneo细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用酶标法检测HTR-8/SVneo细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,应用Transwell法检测HTR-8/SVneo细胞迁移数量,应用流式细胞仪检测HTR-8/SVneo细胞凋亡情况,应用Western blot检测MEK1/2、ERK1/2、P-MEK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果miR-377在H_(2)O_(2)组和对照组中的表达量分别为(1.02±0.09)和(0.31±0.04),H_(2)O_(2)组中miR-377的表达量显著低于对照组(t=19.073,P<0.05)。48、72、96 h时,3组HTR-8/SVneo细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平均显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);与miR-377模拟物组相比,miR-377+U0126组中HTR-8/SVneo细胞迁移能力显著降低,凋亡率和MDA水平显著升高,SOD和GSH-Px水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-377通过激活MAPK/ERK信号通路减弱了子痫前期HTR-8/SVneo细胞的凋亡和氧化应激。     

miR-548c-3p通过调控TRIM59表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究miR-548c-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测TRIM59 mRNA和miR-548c-3p的表达,Western blot检测TRIM59、增殖相关蛋白CyclinD1和p21,及迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达水平,MTT法测定HepG2细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-548c-3p与TRIM59的调控关系。结果与正常肝细胞L02相比,在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402组中TRIM59的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-548c-3p的表达量则均显著降低(P<0.05);过表达miR-548c-3p和抑制TRIM59表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-548c-3p靶向负调控TRIM59的表达;过表达TRIM59逆转了过表达miR-548c-3p对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-548c-3p通过靶向TRIM59基因抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-548c-3p是肝癌的潜在治疗靶点。     

LncRNA HOTAIR促进女性滋养层细胞迁移的机制

目的 探究长链非编码RNA HOTAIR对女性滋养层细胞系Swan 71和HTR-8/SVneo细胞迁移能力的影响以及潜在的分子机制。方法 采取特异性小干扰RNA敲低两种滋养层细胞系中HOTAIR后,采用划痕实验检测滋养层细胞迁移能力的改变,采用Western blot检测PI3K/AKT通路上蛋白的含量及其磷酸化水平的改变,采用Dunnett-t检验方法比较实验组与对照组数据的统计学差异。结果 与对照组比较,两种特异性小干扰RNA均可将Swan 71与HTR-8/SVneo细胞中HOTAIR的表达含量显著下调至30%以下;并且敲低HOTAIR后,两种滋养层细胞的迁移能力显著下降,细胞中PI3K/AKT蛋白总量不变,但其磷酸化水平都下调。结论 HOTAIR可促进女性滋养层细胞Swan 71与HTR-8/SVneo的迁移,上调PI3K与AKT蛋白的磷酸化水平,为后续开展更为深入的体内实验提供前期基础。     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

miR-1246负向调控PLAC1表达对妊娠期糖尿病患者滋养细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-1246(miR-1246)在妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞生物学行为的影响与作用机制。方法收集慈溪市人民医院2017年8月-2019年6月收治的50例GDM患者和50例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-1246与胎盘特异性基因1(PLAC1)mRNA的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测PLAC1蛋白表达。脂质体技术体外转染miR-1246模拟物、抑制物及阴性对照(NC)至人滋养层细胞系HTR-8/SVneo,通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室实验及Annexin V-FITC/PI实验分别观察其对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验及蛋白质印迹分析miR-1246与PLAC1的靶向关系。结果 miR-1246在GDM患者胎盘组织中表达量显著高于健康胎盘组织(P0.01),而PLAC1 mRNA与蛋白在GDM胎盘组织中表达水平显著低于健康胎盘组织中的表达水平(P0.01)。体外转染miR-1246模拟物过表达miR-1246后,可明显抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并促进细胞凋亡(P0.01)。而体外转染miR-1246抑制物抑制miR-1246后,可明显促进HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并抑制细胞凋亡(P0.01)。PLAC1的3'-非编码区(3'-UTR)存在于miR-1246结合序列,miR-1246能够明显降低PLAC1-WT荧光素酶的活性(P0.05)。转染miR-1246模拟物可显著降低PLAC1的蛋白表达水平,而转染miR-1246抑制物结果与此相反(P0.05)。结论 miR-1246在GDM患者胎盘组织中呈现高表达,抑制miR-1246可显著促进胎盘细胞的增殖、迁移及侵袭并抑制其凋亡,miR-1246可能通过负调控PLAC1参与GDM的病理机制。     

microRNA-424-5p对电离辐射的A549细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨microRNA-424-5p(miR-424-5p)在辐射诱导的A549细胞侵袭和迁移中的作用。方法采用茎环RT-PCR检测辐照后A549细胞中miRNA的表达;Transwell小室实验检测A549细胞侵袭和迁移能力。结果 4GyX射线照射诱导了A549细胞中miR-424-5p的表达;过表达miR-424-5p后,与对照组相比,A549细胞侵袭和迁移能力明显增强;导入外源性miR-424-5p抑制物后进行4 GyX射线照射,A549细胞侵袭和迁移能力明显减弱。结论 4 GyX射线诱导了miR-424-5p的表达并促进了A549细胞的侵袭和迁移。本研究为未来进一步研究其分子作用机制奠定基础。     

锌指蛋白ZNF222在滋养层细胞迁移与侵袭中的功能

目的:研究锌指蛋白ZNF222在滋养层细胞增殖、迁移及侵袭中的功能。方法:免疫组织化学法检测ZNF222在人妊娠早期绒毛、蜕膜组织及非妊娠状态下子宫内膜组织中的表达。小干扰RNA敲降ZNF222的表达。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:锌指蛋白ZNF222在人妊娠早期绒毛中高表达、蜕膜组织中表达较弱,非妊娠状态子宫内膜组织表达非常弱。在人滋养层细胞系HTR8/SVneo中,敲降ZNF222后,细胞增殖能力无显著变化(ZNF222 siRNA-1,P=0.610; ZNF222 siRNA-2,P=0.277),但细胞迁移(ZNF222 siRNA-1,P=0.0265;ZNF222 siRNA-2,P=0.00586)和侵袭(ZNF222 siRNA-1,P=0.0327;ZNF222 siRNA-2,P=0.0412)能力显著减弱。结论:锌指蛋白ZNF222调控着人滋养层细胞的迁移和侵袭,推测ZNF222在人类胎盘形成过程中发挥重要作用。     

微小RNA-195靶向趋化因子5抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭及其机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-195通过靶向调控趋化因子(CCL)5对胎盘滋养细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。 方法采用随机数字表法,选取2018年8月至2019年8月在徐州市中心医院定期产前检查的70例孕妇,按照是否合并子痫前期(PE),将其分为PE组(n＝40)和对照组(n＝30)。选取2组受试者分娩时自胎盘母-胎界面组织中分离的滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞为研究对象,针对PE组胎盘滋养层细胞分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。根据转染结果,将PE组胎盘滋养层细胞分为miR-195 mimics亚组、miR-NC亚组、miR-195+pcDNA亚组、miR-195+pcDNA-CCL5亚组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测研究组与对照组胎盘组织中miR-195、CCL5 mRNA相对表达水平;MTT实验检测各亚组滋养细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察各亚组滋养细胞迁移能力,Western blotting法检测CCL5、PI3K及AKT蛋白相对表达水平;Pearson相关性分析对miR-195及CCL5表达相关性进行分析;荧光素酶实验验证miR-195与CCL5的靶向关系。本研究遵循的程序符合徐州市中心医院伦理委员会规定,通过该伦理委员会审查,并获得批准(审批文号：XZXY-LI-20181215-031)。所有受试者均签署临床研究知情同意书。 结果①PE组和对照组孕妇年龄、孕龄等一般临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2组孕妇血压及尿蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②PE组患者胎盘组织中miR-195 mRNA相对表达水平高于对照组(t＝10.932,P<0.001);PE组患者胎盘组织中CCL5 mRNA、蛋白相对表达水平低于对照组(t＝11.125、13.253,P<0.001)。③miR-195 mimics亚组滋养细胞中miR-195相对表达水平高于miR-NC亚组(P<0.001),miR-195 mimics亚组第1、2、3、4天细胞活力低于miR-NC亚组,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。④细胞培养72 h后,miR-195 mimics亚组侵袭细胞数、细胞迁移率均低于miR-NC亚组,并且差异均有统计学意义(t＝11.327,18.357,P<0.001)。⑤miR-195 mimics亚组细胞CCL5蛋白相对表达水平低于miR-NC亚组(P<0.001);miR-195 mRNA水平与CCL5蛋白相对表达水平呈负相关关系(r＝-0.326,P<0.001)。⑥miR-195 mimics亚组细胞中PI3K和AKT蛋白相对表达水平低于miR-NC亚组;miR-195+pcDNA-CCL5亚组细胞中PI3K和AKT蛋白相对表达水平均高于miR-195+pcDNA亚组,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论miR-195可能通过抑制CCL5的表达,进而抑制其下游PI3K/AKT信号通路的活化,最终影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,从而导致PE的发生。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭和转移中的作用机制研究

目的探讨miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭与转移中的作用机制。方法采用荧光定量PCR检测人乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,检测miR-125a-5p质粒在乳腺癌MDA231、MCF-7细胞中的转染效率,利用趋化运动实验与Transwell侵袭试验检测趋化运动能力和运动能力。结果人乳腺癌淋巴结转移、组织分期及雌激素受体均与miR-125a-5p表达水平有关,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-5p在MDA231和MCF-7中表达量较MCF-10A中低,差异有统计学意义(P<0.05);MDA231与MCF-7相比,MDA231中表达量更低,差异有统计学意义(P<0.05)。GAB2在MDA231/miR-125a-5p细胞组的表达量低于MDA231组和MDA231/NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);在AntimiR-125a-5p/MCF-7组中的表达量高于AntiNC/MCF-7和MCF-7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。穿过基质胶...     

咪唑安定联合miR-135a-5p影响宫颈癌细胞HeLa增殖 迁移及侵袭的机制研究

目的 探讨咪唑安定对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移及侵袭的影响及分子机制。方法 以RPMI-1640培养基对HeLa细胞常规培养，分别用25、50、100μmol/L的咪唑安定处理，记为低、中、高剂量组，常规培养的细胞作为NC组；将miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞，记为anti-miR-135a-5p组、anti-miR-NC组；miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞后用100μmol/L的咪唑安定处理，记为anti-miR-135a-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组。CCK-8检测细胞活性；Western blot法检测蛋白表达；克隆形成实验检测细胞克隆；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-135a-5p表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 不同剂量咪唑安定处理后，HeLa细胞活性、CyclinD1、MMP2、MMP9表达、细胞克隆、迁移和侵袭数量、miR-135a-5p表达降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。下调miR-135a-5p降低HeLa细胞活性、MMP2、CyclinD1、M...     

上皮细胞钠离子通道在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系

目的上皮细胞钠离子通道(ENaC)在子痫前期患者胎盘中的表达及其与子痫前期(PE)发病的关系。 方法选择2009年3月至2011年3月在四川大学华西第二医院行剖宫产分娩的92例产妇的胎盘组织为研究对象,根据孕妇是否患有重度子痫前期,将其分别纳入重度PE组(n＝48,重度PE患者)和对照组(n＝44,正常妊娠者)。此外,选择于早孕期(孕龄为8～11孕周)因计划外妊娠等因素要求行人工终止妊娠孕妇的胎盘组织纳入早孕期组(n＝36)。早孕期组的胎盘组织取自选择性负压吸引人工终止妊娠术者。重度PE组和对照组产妇行剖宫产分娩待胎盘娩出后,立即取胎盘母体面的中央绒毛区组织。3组受试者的住院时间等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验在正常人滋养层细胞株HTR-8/Svneo上进行。采用免疫组化技术(SP法)检测ENaC在孕妇胎盘组织的定位。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(qPCR)及Western blotting法检测胎盘组织ENaC mRNA及蛋白的表达水平。此外,观察雌、孕激素对滋养细胞HTR-8/SVneo ENaC表达的调节作用。再利用小干扰RNA(SiRNA/ENaC)干预ENaC的表达后,通过划痕实验及侵袭实验观察HTR-8/Svneo细胞迁移及侵袭能力的变化。本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,标本的采集过程均征得受试对象同意,并与受试对象签署临床研究知情同意书。 结果①重度PE组和正常妊娠组孕妇孕前体质指数(BMI)、孕期体重增加、基础收缩压、晚孕期收缩压、孕期收缩压增加、基础舒张压、晚孕期舒张压、孕期舒张压增加、新生儿出生体重等一般临床资料比较,差异均有统计学意义(t＝2.586、2.16、2.139、15.817、13.078、4.896、16.600、11.119、8.456,P<0.05)。②免疫组化法结果显示,ENaCα亚基主要表达于早孕期胎盘合体滋养细胞及绒毛滋养细胞的细胞膜上。③ qPCR结果表示：ENaC各亚基在不同妊娠时期的胎盘组织中均有表达,但其表达水平存在差异,其中ENaC α亚基主要在早孕期表达,而ENaC β亚基主要在对照组表达。ENaC β亚基在重度PE组的相对表达水平为0.48±0.17,显著低于ENaC β亚基在正常妊娠组中的相对表达水平为0.89±0.20,并且差异有统计学意义(t＝2.465,P<0.05)。④雌激素(1 μmol/L)、孕激素(5 μmol/L)可下调ENaC mRNA在滋养细胞HTR-8/SVneo上的表达水平,孕激素(5 μmol/L)可下调ENaC在蛋白水平的表达水平。⑤ ENaC蛋白水平的表达被ENaC α亚基特异性小干扰RNA(siRNA/ENaC)下调后,HTR-8/SVneo细胞的迁移及侵袭能力减弱。 结论晚孕期胎盘组织中以ENaCβ亚基表达为主,重度PE患者ENaC β亚基表达水平较正常妊娠者降低;下调ENaC的表达滋养层细胞侵袭与细胞迁移的能力减弱,推测ENaC可能通过影响滋养细胞的迁移及侵袭参与PE发病。     

姜黄素通过上调miR-637抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨姜黄素对肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2和肾癌786-O细胞,将786-O细胞分为对照组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组、高剂量姜黄素组、miR-NC组、miR-637组、高剂量姜黄素+anti-miR-NC组、高剂量姜黄素+anti-miR-637组。分别进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、MTT、Transwell和蛋白质印迹（Western blot）实验来检测各组的miR-637表达量、细胞活力、迁移侵袭能力和相关蛋白表达水平。结果 与人正常肾小管上皮细胞HK-2比较,肾癌786-O细胞中miR-637的表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较,中、高剂量姜黄素组786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2及MMP-9表达水平均显著降低,p21表达显著升高,miR-637的表达水平均显著升高（均P<0.05）。与miR-NC组比较, miR-637组的miR-637表达水平提高,miR-637组的细胞活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达均显著降低,p21表达升高（均P<0.001）。与高剂量姜黄素+anti-miR-NC组比较,高剂量姜黄素+anti-miR-637组的miR-637表达水平降低,786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达均升高,p21表达降低（均P<0.05）。结论 姜黄素可能通过上调miR-637发挥肾癌抑制作用。     

miR-424-5p靶向KIF23调控细胞周期并抑制肝癌细胞的增殖和迁移能力

目的 探究miR-424-5p、KIF23对肝癌细胞的作用机制,为探索新的肝癌靶向治疗途径提供思路。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-424-5p的表达水平,生物信息学技术和萤光素酶报告基因验证KIF23与miR-424-5p在肝癌中的结合关系。qRT-PCR和蛋白免疫印迹(western blot, WB)分别检测KIF23 mRNA和蛋白表达水平。CCK8实验、克隆形成实验、迁移实验和流式细胞术评估miR-424-5p和KIF23对肿瘤细胞的增殖、迁移能力,以及对细胞周期进展的影响。结果 与正常肝组织比较,miR-424-5p在肝癌组织和细胞中显著低表达(P<0.05);KIF23是miR-424-5p的直接下游靶点,在肝癌组织和细胞中的表达显著上调(P<0.05)。过表达KIF23会促进肝癌细胞增殖和迁移,并将细胞周期阻滞于G2/M期。过表达miR-424-5p能显著减弱过表达KIF23对细胞增殖、迁移和细胞周期分布的影响(P<0.05)。结论 miR-424-5p可以通过靶向下调KIF23,从而抑制肝癌细胞增殖和迁移能力,影响细胞周...     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

二苯甲酮-3对绒毛外滋养层细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响

目的研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响。方法将HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、0.01、0.1、1 mg/L BP-3的培养基中培养24 h。采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Real-time PCR方法检测细胞miR-17-92基因簇的表达水平。结果与溶剂对照组相比,1 mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-17、miR-19a mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的凋亡率及miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-92a mRNA的表达水平均无明显变化。且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势。与抑制剂对照组相比,抑制miR-17和miR-19a表达后HTR-8/Svneo细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BP-3可通过抑制miR-17-92簇中miR-17、miR-19a的表达,抑制HTR-8/Svneo细胞增殖。     

miR-182-5p和Bcl-2在复发性流产患者胎盘绒毛组织中的表达水平及临床意义

目的 检测微小RNA-182-5p(miR-182-5p)和Bcl-2在复发性流产(RSA)患者胎盘绒毛组织中的表达水平及临床意义。方法 选择2017年6月—2018年12月天津医科大学中新生态城医院收治的55例RSA患者为研究组,自愿要求终止妊娠的50例正常早孕流产者为对照组。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察胎盘绒毛组织的结构和形态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-182-5p水平,采用免疫组化法检测Bax和Bcl-2水平,分析miR-182-5p、Bax及Bcl-2表达的相关性。结果 研究组孕妇胎盘绒毛形态不一,排列不规则,易见局部脱落,外层合体滋养层细胞数量明显减少,滋养层基底膜厚薄不均,萎缩融合,内层滋养层细胞数量增多,发生异常增生,排列紊乱,可见明显的绒毛间质水肿,绒毛内血管未发育完全,血细胞数量少,可见少量炎症细胞。对照组miR-182-5p、Bax及Bcl-2表达水平分别为(12.26±3.07)、(16.47±5.37)及(57.36±16.27),研究组miR-182-5p、Bax及Bcl-2表达水平分别为(14.38±4.41)、(52.16±...     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

一种新微小RNA 在BPDE抑制滋养层细胞侵袭迁移中的作用和调控机制

目的 探索新微小RNA miR-hz01在二羟环氧苯并芘(BPDE)抑制滋养层细胞侵袭迁移中的作用和机制，揭示BPDE抑制滋养层细胞侵袭迁移的新机制。方法 采用女性永生化滋养层细胞系Swan 71,进行BPDE染毒，并转染miR-hz01抑制剂对其进行敲低，通过细胞侵袭(Transwell)与划痕实验测定滋养层细胞侵袭迁移情况，采用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定miR-hz01含量，免疫印迹实验(Western blot, WB)实验测定细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB or AKT)蛋白表达水平。采用t检验比较两组数据之间的差异。结果 BPDE染毒的滋养层细胞中，miR-hz01表达水平是对照组的2.98倍，AKT蛋白表达水平是对照组的45.30%,滋养层细胞的侵袭迁移被抑制。BPDE染毒的滋养层细胞中再转染miR-hz01抑制剂(Inhibitor)或其相应阴性对照(Inhibitor-NC or NC),BPDE+Inhibitor组的AKT蛋白水平是BPDE+NC组的2.08倍，且滋养层细胞侵袭迁移功能有所恢复。结论 BPDE染毒的滋...