盐酸二甲双胍对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：研究盐酸二甲双胍（MF）对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响，为糖尿病患者经种植牙给药假说提供实验依据。方法：分离培养原代下颌骨成骨细胞，分别给予不同浓度的MF，MTT法检测大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、生化法测定碱性磷酸酶（ALP）活性、钙吸收、茜素红S钙染法检测矿化结节形成。结果：在一定浓度范围内，MF可以提高成骨细胞数量和ALP活性，促进钙吸收及矿化结节形成。结论：MF能促进原代下颌骨成骨细胞的增殖分化及矿化，提高成骨细胞的成骨能力。     

辛伐他汀对大鼠颅骨成骨细胞生物学特性的影响

目的：研究辛伐他汀对原代培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：组织块法分离培养大鼠颅骨成骨细胞,分别在含不同浓度辛伐他汀（1.0μmol/L、0.5μmol/L、0.25μmol/L、0.125μmol/L）培养液环境下培养成骨细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况;检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性以及培养液中骨钙素（OC）含量;Von Kossa染色观察成骨细胞矿化结节,用Image-Pro Plus（IPP6.0）软件及其相关系统完成图像采集及分析计算成骨细胞矿化面积的百分比,通过矿化结节面积百分比计算检测细胞的矿化能力。采用SPSS13.0对数据进行单因素方差分析。结果：辛伐他汀抑制成骨细胞的增殖,呈剂量依赖性。各浓度组的ALP活性均增加,以0.250μmol/L浓度组的作用效应最为显著;骨钙素水平增加,与对照组比较均有统计学意义;辛伐他汀能使成骨细胞矿化面积百分比显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：辛伐他汀抑制体外培养大鼠颅骨成骨细胞的增殖,但却促进成骨细胞的分化及矿化,发挥促进骨形成的作用。     

贴壁组织块反复消化法培养新生大鼠下颌骨成骨细胞及鉴定

目的探讨经济、高效的原代新生大鼠下颌骨成骨细胞培养方法。方法将新生24 h SD大鼠处死并取出下颌骨,剪碎,用改良的贴壁组织块反复消化法培养细胞,噻唑蓝（MTT）比色法检测其增殖能力,通过相差显微镜观察,用骨钙素免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色和钙结节染色方法对所获得的细胞进行鉴定。结果MTT实验显示接种后1～3 d内细胞增殖缓慢,为细胞生长适应期,第7天达到高峰,以后增长速度逐渐减慢。所培养的细胞能形成矿化结节,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性,具有典型的成骨细胞形态特征。结论改良的贴壁组织块反复消化法可获得大量且纯的新生大鼠下颌骨成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

建模时间及糖浓度对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞培养的影响

目的：探讨建模时间长短及不同糖浓度培养基对糖尿病大鼠下颌骨来源成骨细胞培养的影响为胰岛素经人工种植牙给药建立细胞模型。方法：链脲霉素诱导I型糖尿病大鼠模型，建模后10d及40d取其下颌骨，分别于葡萄糖含量为5．5mmol／L（低糖组）和25mmol／L（高糖组）的培养基中进行成骨细胞培养，观察细胞的形态及生长情况。细胞计数法检测生长增殖能力，碱性磷酸酶染色法、茜素红钙结节染色法分别检测分化及矿化能力。结果：细胞增殖能力由大到小依次为建模10d低糖组〉建模10d高糖组〉建模40d低糖组〉建模40d高糖组（p〈0．05），分化能力建模10d低糖组〉建模40d低糖组、建模10d高糖组及建模40d高糖组（p〈0．01）。建模10d低糖组可形成钙结节，其他组未能形成钙结节。结论：建模时间延长、高糖培养对糖尿病大鼠下颌骨来源成骨细胞的各项生物学活性指标均产生负面影响，其中建模时间主要抑制了细胞增殖，而高糖培养主要抑制了细胞的分化和矿化。     

多肽P-15对大鼠成骨细胞附着增殖分化的影响

目的研究多肽P-15对小牛骨表面生长的大鼠成骨细胞附着、增殖、分化的影响。方法对照组和实验组分别采用单纯无机小牛骨粉（anorganic bone mineral,ABM）和复合P-15的无机小牛骨粉接种大鼠成骨细胞进行体外培养。四甲基偶氮唑蓝[3-（4,5-dimehyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide,MTT]比色法检测大鼠成骨细胞在2组骨粉表面附着、增殖的速度,倒置相差显微镜观察成骨细胞在2组骨粉表面及周围的增殖情况,用对硝基苯磷酸二钠盐（p-nitrophenyl phosphate,PNPP）法检测2组成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。结果成骨细胞体外培养24h,实验组与对照组MTT比色法检测的光密度值分别为1.597±0.035、1.239±0.063,差异有统计学意义（P〈0.01）。培养72h,实验组和对照组PNPP法检测的ALP活性分别为（35.533±1.051）金氏单位/100mL和（34.645±1.187）金氏单位/100mL,实验组略高于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论多肽P-15加快了大鼠成骨细胞在骨粉表面粘附、增殖的速度,但对大鼠成骨细胞的分化无明显促进作用。     

格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化的影响.方法:原代培养分离下颌骨成骨细胞,将细胞接种于96孔板中,分两组:5.5mM葡萄糖(5.5mMG)(生理浓度葡萄糖)组,5.5mMG +10μmol/L格列美脲组,继续培养7d,1)MTT法检测大鼠下颌骨成骨细胞的增殖;2)生化法测定7d碱性磷酸酶(ALP)活性;3)Western blots检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达;4)RT-PCR检测骨钙素(OCN)的表达.结果:格列美脲能显著促进成骨细胞的增殖,ALP活性,ColⅠ的蛋白和OCN的mRNA的表达.结论:格列美脲能促进大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化.     

格列美脲对高糖环境下大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:探讨格列美脲对高糖培养的大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法:分离培养大鼠下颌骨成骨细胞,分别给予5.5 mmol/L(生理糖浓度)、16.5 mmol/L葡萄糖浓度的培养液培养,加入或不加入10μmol/L格列美脲后,用噻唑蓝法(MTT)观察成骨细胞7 d时的增殖情况,生化法测定7 d时的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western免疫印迹检测7 d和14d时Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达,实时定量PCR检测21 d时的骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:高糖浓度降低了成骨细胞的增殖、ALP活性和OCN的mRNA表达,提高了14 d时的ColⅠ的表达。格列美脲能够促进2种糖浓度下的成骨细胞增殖、ALP活性、ColⅠ的蛋白表达和OCN的mRNA表达。结论:高糖浓度降低了大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、分化和矿化能力,在2种糖浓度下,格列美脲促进大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、分化和矿化。     

气电纺纳米羟基磷灰石-聚羟基丁酸酯复合纤维支架与大鼠成骨细胞体外生物相容性研究

目的研究气电纺纳米羟基磷灰石-聚羟基丁酸酯[nanosized hydroxyapatite—poly（3-hydroxybutyrate）,nHAP-PHB]复合纤维支架对大鼠成骨细胞体外粘附、增殖及骨钙素分泌活性的影响。方法实验组将大鼠成骨细胞接种于气电纺nHAP—PHB复合纤维支架进行体外培养,对照组将大鼠成骨细胞接种于气电纺纯聚羟基丁酸酯（PHB）纤维支架行体外培养。2组进行扫描电镜观察、四甲基偶氮唑盐比色检测及骨钙素检测,评价nHAP—PHB复合纤维支架对大鼠成骨细胞体外粘附、增殖以及骨钙素合成分泌活性的影响。结果扫描电镜观察结果显示接种4h后,与纯PHB纤维支架相比,细胞在nHAP—PHB复合纤维支架上的铺展更完全。培养后第3、7、10、14天,实验组细胞增殖活性均强于对照组（P〈0．05）,骨钙素分泌活性均高于对照组（P〈0．05）。结论nHAP—PHB复合纤维中nHAP增强了支架材料与大鼠成骨细胞的生物相容性。     

牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响

目的：明确牙本质非胶原蛋白（dentin non—collagenous proteins,dNCPs）对人牙髓干细胞（human dental pulp stemcells,hDPSCs）增殖及矿化能力的影响。方法：通过细胞活性噻唑蓝（MTT）比色法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10¨g／mLdNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响。结果：dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）;诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）;诱导2周后,茜素红染色显示10μg／mLdNCPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论：10μ∥mLdNCPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。     

TGF β1和bFGF对鼠口腔黏膜固有层前体细胞的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）对大鼠口腔黏膜固有层前体细胞（OMLPPC）的增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法体外扩增培养OMLPPC,利用5ng／mLTGF-β1、10ng／mlbFGF单独及联合作用于OMLPPC,利用MTT方法检测OMLPPC的增殖,利用试剂盒检测其碱性磷酸酶活性,以RT．PCR方法检测各组矿化基因骨钙素（OCN）的表达。结果对细胞的增殖,3d时各组间未见显著性差异;7、14d,bFGF单独作用明显促进细胞的增殖（P〈0．05）,TGF-β1单独作用抑制细胞的增殖（P〈0．05）。TGF-β1＋bFGF组7d时增殖不受影响,14d时增殖变缓。碱性磷酸酶活性检测,对照组及bFGF组各时间点增加均无显著性差异。TGF．131组间7、14d比3d时ALP活性有显著性差异（P〈0．05）。TGF-131＋bFGF组14d时ALP活性显著增强（P〈0．05）。RT—PCR检测OCN结果显示,各组培养14d后,TGF-131组、TGF-β1＋bFGF组表达OCN,对照组、bFGF组未见表达。结论一定浓度的bFGF和TGF-131联合作用,不仅可保证OMLPPCs的增殖,而且能诱导并促进其向矿化方向的分化。     

胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞分化的影响

目的：研究胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞分化的影响。方法：按照培养基中胰岛素的浓度（0,10-5,10-6,10-7 mol/L）,将对照组和糖尿病组成骨细胞分为N、DM、DM＋Inse-5、DM＋Inse-6及DM＋Inse-7四组,用PNPP法、考马斯亮蓝法、放射免疫法及RT-PCR分别检测各组蛋白校正ALP含量（3、7、14、21d）、骨钙素水平（0~28d）以及ColΙA1、Runx2（2d）的mRNA表达。结果：N组在4个时间点的ALP含量均为最高,各组的变化趋势大体一致,于14天时达到最高值,21d下降;N组0~7dBGP分泌量达峰值,之后逐渐降低,而DM各组的变化趋势与之相反;DM加胰岛素各组的ColΙA1的mRNA表达较DM组明显增强,而Runx2表达明显减弱（P〈0.05）。结论：胰岛素可以纠正糖尿病大鼠成骨细胞的分化功能障碍。     

胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞糖摄取的影响

目的：研究胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞糖摄取的影响。方法：按照培养基中胰岛素的浓度（0,10-6mol/L）,将对照组和糖尿病组成骨细胞分为N、N＋Ins、DM、DM＋Ins4组,荧光显微镜观察它们对2-脱氧荧光葡萄糖（2-NBDG）的摄取能力。结果：2-NBDG的摄取量,20min时由大到小依次为N＋Ins〉DM＋Ins〉DM〉N;40min时依次为DM〉N＋Ins〉N及DM＋Ins。结论：胰岛素可以抑制糖尿病大鼠成骨细胞过高的糖摄取。     

实验性糖尿病牙周炎诱导成骨细胞凋亡的研究

目的观察糖尿病牙周炎条件下成骨细胞的凋亡情况。方法选用SD大鼠62只,随机分为糖尿病牙周炎组（DP）、单纯牙周炎组（P）以及空白对照组（N）。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法诱导大鼠糖尿病模型,采用丝线结扎联合口内接种细菌的方法建立牙周炎模型。各组动物分别于DP组、P组丝线结扎后第3、6周时分批处死,取标本进行组织学检测,并计算各组成骨细胞凋亡百分率。结果丝线结扎后3、6周时,成骨细胞凋亡百分率由高至低依次为DP组、P组、N组,组间两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。在丝线结扎后3周和6周时,DP组成骨细胞凋亡百分率均达到P组的2倍。结论糖尿病可促进牙周炎条件下牙周组织中成骨细胞的凋亡。     

孕期碘营养状态对子代大鼠成骨细胞的影响

目的 观察孕期碘营养状态的改变对大鼠仔鼠成骨细胞的的影响。方法 雌性 Wistar大鼠,交配妊娠后,取孕鼠 20 只按体重随机分成对照Ⅰ组,对照Ⅱ组,碘缺乏组,碘过量组。自妊娠日起,对照Ⅰ组饲以普通饲料+去离子水,对照Ⅱ组饲以缺碘饲料+适碘去离子水,碘缺乏组饲以缺碘饲料+去离子水,碘过量组饲以普通饲料+高碘水。孕18日时,检测各组孕鼠甲状腺激素和促甲状腺激素水平;仔鼠出生后,取出生24小时内仔鼠的颅骨成骨细胞进行培养,观察成骨细胞碱性磷酸酶活性和细胞增殖能力。 结果 碘缺乏组甲状腺激素含量较对照Ⅰ组、对照Ⅱ组和碘过量组明显降低（均P<0.05）,促甲状腺激素含量则明显升高（均P<0.05）;碘过量组甲状腺激素含量与对照Ⅰ组和对照Ⅱ组间差别没有统计学意义（均P>0.05）,但促甲状腺激素含量则明显升高（均P<0.05）。碘缺乏组成骨细胞碱性磷酸酶活性和细胞增殖能力较对照Ⅰ组、对照Ⅱ组和碘过量组明显下降（均P<0.05）。 结论 大鼠孕期碘营养状态不足,可导致新生仔鼠成骨细胞活性和增殖能力下降,这为进一步探讨其对牙齿发育矿化的研究提供了实验依据。     

转化生长因子-β1对大鼠牙周组织中白细胞介素-6、骨钙素水平的影响

目的：探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对大鼠牙周炎模型的牙周组织中白介素-6（interleukin-6,IL-6）、骨钙素水平（Bone gla protein,BGP）表达的影响。方法：在成功建立大鼠牙周炎模型的基础上,注射TGF-β1进行治疗,并先后将治疗1、2、3、4周的大鼠处死,取牙周组织标本作切片,观察牙周组织病理变化状况,并采用免疫组织化学法检测IL-6、BGP水平的变化。结果：与正常组相比牙周炎组牙周组织中IL-6表达明显增高（P〈0.05）,而BGP水平明显降低（P〈0.05）;各时间段牙周炎治疗组牙周组织中IL-6表达明显低于牙周炎组（P〈0.05）,BGP水平明显高于牙周炎组（P〈0.05）。结论：TGF-β1能抑制大鼠牙周炎模型牙周组织中IL-6的表达,同时对BGP的表达起促进作用。     

SD大鼠牙髓增龄变化对Nd：YAG激光照射的应激反应观察

目的：观察增龄牙髓对Nd：YAG激光照射的应激反应变化。方法：观察幼年组（6周龄）、成年组（12周龄）、老年组（72周龄）雄性SD大鼠切牙经不同能量密度脉冲式Nd：YAG激光照射后6h牙髓的组织形态学变化,利用图像分析系统对不同年龄大鼠成牙本质细胞中诱导型热休克蛋白（HSP70）表达的平均光密度值进行分析比较。结果：激光能量密度为1433mJ／mm^2和1910mJ／mm^2时,老年组成牙本质细胞中诱导型HSP70的表达强度显著高于幼年和成年组（P〈0．05）;能量密度为2388mJ／mm^2时,老年组成牙本质细胞中诱导型HSP70的表达强度显著低于幼年和成年组（P〈0．05）,且老年组部分成牙本质细胞变性坏死。结论：老年大鼠牙髓对激光刺激的耐受性下降。     

补肾方剂对糖尿病大鼠纯钛种植体骨结合影响的组织学研究

目的通过建立糖尿病大鼠骨内种植模型,研究补肾方剂对糖尿病大鼠纯钛种植体骨结合的影响。方法18只Wistar大鼠,4月龄,雄性,随机分为三组：糖尿病组、糖尿病补肾方剂治疗组、对照组,每组6只。糖尿病组、糖尿病补肾方剂治疗组空腹一次性腹腔注射STZ溶液（45mg/kg）,注射STZ三天后,大鼠空腹血糖高于16.65mmol/L,尿糖（＋＋＋）,糖尿病大鼠模型建立成功。对照组大鼠空腹腹腔注射等量生理盐水。三组动物,于左侧胫骨近中干骺端外侧制备直径1.0mm的种植孔,植入种植体,初期稳固;种植体植入术后第一天起,治疗组用补肾方剂灌胃（用量：补肾方剂90g水煎浓缩成1g/ml生药浓度药液每只动物1.5ml 2次/日）,对照组和糖尿病组自由饮食。种植术后12周,取下带种植体的胫骨,制作HE染色组织切片,采用光镜和骨组织形态计量学观察。结果光镜观察发现,补肾方剂治疗组结合骨板连续性较好、较厚,表面光滑,周边可见大量的成骨细胞。骨组织形态计量学参数比较发现,治疗组结合骨板的宽度、种植区骨细胞个数及非种植区骨细胞个数与对照组无显著差异（P〉0.05）;治疗组种植区成骨细胞个数显著高于对照组（P〈0.05）;糖尿病组结合骨板的宽度、种植区成骨细胞个数、种植区骨细胞个数及非种植区骨细胞个数均显著低于治疗组（P〈0.05）。结论补肾方剂可通过控制糖尿病和调节骨代谢有效促进和提高纯钛种植体的骨结合。