百日咳杆菌毒素S1亚单位在E.coli中的表达及其一步纯化

百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达及其一步纯化程继忠皇甫永穆海涛郑波白百破（ＤＴＰ）疫苗组成成分之一为百日咳杆菌，其成分复杂，全菌体疫苗接种后副作用大。为解决此问题，近年从中发现导致百日咳免疫的主要成分之一为百日咳毒素的Ｓ１亚单位，故选用...     

百日咳毒素S1亚单位缺失分子的构建及其在重组杆状病毒中的表达

目的：为探明校基端疏水区对百日咳毒素Ｓ１亚单位分泌性的影响,试图构建缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位。方法：应用ＰＣＲ技术构建了６种不同信号序列修饰的缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位编码基因,并使用重组杆状病毒（ｒＢＶ）技术实现了这些缺失Ｓ１亚单位（ｔＳ１）在昆虫细胞中的高水平表达。结果：这些缺失Ｓ１亚单位的表达量为每万个昆虫细胞１．０１～２．２５ｕｇ。细菌信号肽和流感病毒ＨＡ信号肽均能完整表达和正确剪切,但ＨＡ信号肽在昆虫细胞中的处理效率更高。结论：ｔＳ１亚单位缺失羧基端疏水区后在昆虫细胞中的表达量明显提高,这些ｔＳ１亚单位的异源性表达是由于信号肽剪切不全所导致,ｔＳ１分子表观分子量的漂移并不意味着信号肽剪切不正确。     

百日咳毒素S1亚单位的分子修饰及在重组杆状病毒中的表达

目的：百日咳毒素既是百日咳杆菌的主要毒性因子,又是重要的保护性抗原,其Ｓ１亚单位具有ＡＤＰ－核糖转移酶活性和免疫保护性决定簇。为高效表达前构建的一个丧失酶活性但仍保持保护决定簇的Ｓ１变异子,开展了本研究。方法：通过添加人流感病毒血凝素基因信号序列或嵌膜序列的方法,对天然和变异Ｓ１亚单位基因片段作了遗传学修饰。然后使用重组杆状病毒技术使这些Ｓ１亚单位在昆虫细胞和昆虫幼虫中实现了高水平表达。结果：这些     

百日咳毒素S1亚单位缺失分子的构建及其在重组杆状病毒中的 …

目的：为探明羧基端疏水区对百日咳毒素Ｓ１亚单位分泌性的影响，试图构建缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位。方法：应用ＰＣＲ技术构建了６种不同信号序列修饰的缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位编码基因，并使用重组杆状病毒技术实现了这些缺失Ｓ１亚单位在昆虫细胞中的高水平表达。结果：这些缺失Ｓ１亚单位的表达量为每万个昆虫细胞１．０１－２．２５μｇ。     

分子修饰的重组百日咳毒素S1亚单位的生物学和免疫学特性

目的：对重组杆状病毒表达的经多种信号序列修饰的天然和变异百日咳毒素（ＰＴ）Ｓ１亚单位（ｒＳ１）的生物学及免疫学特性作出评价。方法：应用生物化学和免疫学技术与方法对这些ｒＳ１的酶活性、分泌性和免疫原性等做了系统鉴定。结果：ｒＳ１变异子无可检出的酶活性；所有ｒＳ１display structure     

重组人IL-2在E.coli中的高效表达诱导因素及其纯化的研究

表达人IL-2的E.coli pETI-2/MM294在色氨酸饥饿的培养基中发酵,加入一定量的3—吲哚乙酸诱导其trp启动子,可以使rlL-2的表达量高达总菌体蛋白量的19％。高水平表达的rlL-2以不溶性的包含体形式存在于E.coli的胞浆中。通过破碎细菌、变性抽提和使rlL-2复性后,再经CM-SephadexC-50、DEAE-SephadexA-50、SephadexG-75等一系列层析步骤纯化,最终得到的rlL-2纯度达90％以上,比活性为7.21×10~5μ/mg,总回收率为10.5％。     

人La多肽融合蛋白在E.coli中的表达

目的　构建在E .coli中表达人La多肽的质粒。方法以人脾cDNA为模板 ,通过PCR获得La多肽 (全长 )的DNA片段。将此片段利用双酶切定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白 )融合系统的载体pMALTM c中 ,表达可溶性融合蛋白 ,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验 (IBT)证明 ,表达的融合蛋白具有La抗原多肽的特异性 ,而敏感性超过生化制备的ENA制品。结论重组融合蛋白与天然ENA制品存在免疫学同一性     

BPI23-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达

目的 构建ｐＢＶ－ＢＰＩ６００－Ｆｃγ１７００重组表达载体,转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１抗菌重组蛋白。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从ＨＬ－６０细胞和正常人白细胞ｍＲＮＡ中扩增编码ＰＢＩ２３和ＩｇＧ１Ｆｃ（Ｆｃγ１）的基因;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体;转化感受态Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α细胞,通过温控诱导表达ＢＰＩ２３－Ｆｃγ１重组蛋白。结果 （１）ＲＴ－ＰＣＲ     

组氨酸标签人β干扰素在E.coli BL21(DE3)中的表达、纯化和活性测定

目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-16b,重组克隆,经酶切与测序确认后转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达和条件优化.表达产物经West...     

抗人C1q轻链可变区基因在E.coli中的表达

应用基因工程技术，将抗人Ｃ１ｑ轻链可变区基因的重组质粒ｐＧＥＭ－Ｃ１ｑＶＬ中分离，克隆进表达载体ｐＪＬＡ５０２。该表达截体含ＣＩＴｓ８５７抑制子基因，通过开温诱导法，重组表达子在宿主菌ＨＢ１０１中表达，获得抗人Ｃ１ｑ轻链可变区片段，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明其分子量范围为１２－１３ＫＤ。这为进一步抗人Ｃ１ｑ小抗体的表达积累了经验，有利于用于抗原－抗体结构功能的研究。     

重组人IL—6在E.coli中的高效表达

通过计算机分析设计,人工合成了寡核苷酸引物,并优化了翻译起始区,应用PCR及重组DNA技术,获得了重组人白细胞介素6(IL—6)高效表达工程菌。从全菌SDS—PAGE考马斯亮蓝染色后薄层密度扫描分析表达产率为38.6％,分子量为2.1×10~4。以IL—6依赖性的小鼠杂交瘤细胞株B9用MTT法测定表达重组人IL—6的HGF活性为2×10~7U/L菌液。不同菌株表达重组人IL—6研究表明,以E.coli DH5α/pBV IL—6表达产率最高。     

hIL—16cDNA的克隆,测序及在E.coli中的表达与纯化研究

在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素—16（hIL－16）cDNA,并应用一种新型的大肠杆菌表达系统一硫氧还蛋白表达系统,成功地表达了重组hIL-16。hIL-16cDNA的扩增：从人PBMC中提取总RNA,poly（T）8-12反转录cDNA,以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL-16cDNA的克隆、测序与表达：利用E．coli表达载体pTrxFus,构建hIL－16。DNA的重组质粒,转化E．coli后,经色氨酸诱导,表达出相对分子质量（Mr）为30000的可溶性融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30％。序列测定证实,此片段长393bp,确为hIL-16cDNA。经一步渗透压休克,即获得了高纯度的表达蛋白。     

hIL－16cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究

在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素－16(hIL－16)cDNA,并应用一种新型的大肠杆菌表达系统─硫氧还蛋白表达系统,成功地表达了重组hIL－16。hIL－16cDNA的扩增从人PBMC中提取总RNA,poly(T)8－12反转录cDNA,以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL－16cDNA的克隆、测序与表达利用     

人PBMC中IL—18基因的克隆及在E.coli中的高效表达与纯化

从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞分别克隆了前体和成熟人白细胞介素－１８的基因,并应用大肠杆菌表达系统,成功地表达了重组ｈＩＬ－１８的前体和成熟蛋白,从人ＰＢＭＣ中提取总ＲＮＡ,用ｐｌｙ（Ｔ）８－１２反转录成ｃＤＮＡ,再以ＰＣＲ扩增出特异ＤＮＡ片段。利用Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体ｐＱＥ－３０,构建分别表达ｈＩＬ－１８前体和成熟蛋白的重组质粒ｐＱＥＩＬ１８ｐ和ｐＱＥＩＬ１８ｍ,转化Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５后,