多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

神经组织联合移植修复成鼠脊髓损伤的比较研究

目的比较胚胎脊髓与带蒂或游离周围神经联合移植修复脊髓损伤的能力。方法30只成年大鼠损伤胸髓后行胚胎脊髓加游离正中神经(P+F组)或加带蒂正中神经(V+F组)移植。术后8周行体感诱发电位(SEP)和光、电镜检查。结果V+F组胚胎脊髓与受体融合较好,体积增长378.4％、神经微丝蛋白密度(7.46±0.77)万个/mm2、神经元密度(1.36±0.34)万个/mm2,均高于P+F组(P<0.05),细胞分化程度高,SEP的P1、N1波潜伏期显著缩短(P<0.05)。结论胚胎脊髓与带蒂神经联合移植,能促进胚胎脊髓成熟分化和损伤神经元再生,效果优于与游离周围神经联合移植。     

胚胎鼠脊髓移植重建损伤成鼠脊髓神经通路的作用——光镜镀银染…

目的：观察胚胎鼠脊髓对成鼠损伤脊髓神经通路的修复作用。方法：将妊娠１４天（Ｅ１４）胚胎鼠脊髓植入损伤成鼠脊髓，取材制石蜡切片，镀银染色，光镜下观察神经纤维的再生和生长情况。结果：术后７天局部宿主神经纤维就可短距离再生进入移植物。术后３０天，移植物和宿主脊髓的界面区可见明显的纤维交错。随着动物存活时间的延长，交错纤维的数量进一步增加。结论：胚胎脊髓可以“粗略”地修复损伤脊髓的神经通路。     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。     

胚胎鼠脊髓移植重建损伤成鼠脊髓神经通路的作用──光镜镀银染色观察

目的：观察胚胎鼠脊髓对成鼠损伤脊髓神经通路的修复作用．方法：将妊娠１４天（Ｅ１４）胚胎鼠脊髓植入损伤成鼠脊髓，取材制石蜡切片，镀银染色，光镜下观察神经纤维的再生和生长情况．结果：术后７天局部宿主神经纤维就可短距离再生进入移植物．术后３０天，移植物和宿主脊髓的界面区可见明显的纤维交错．随着动物存活时间的延长，交错纤维的数量进一步增加．结论：胚胎脊髓可以“粗略”地修复损伤脊髓的神经通路．     

脊髓损伤修复的研究现状与进展

近年来 ,脊髓损伤 (spinalcordinjury ,SCI)呈现出高发生率、高致残率、高耗费、低死亡率 (<5 % )等新特点。加强SCI再生修复研究具有十分重要的理论价值和现实意义。1 　 移植修复1 .1 　 周围神经移植　Cheng等[1 ] 报道了大鼠自体肋间神经切成几节用含aFGF的Fibrin胶粘合桥接于横断脊髓的两断端 ,分 9个部位将损伤脊髓两断端的传导束、白质和灰质连接起来 ,通过术后 6个月的行为功能和免疫组化实验观察发现损伤脊髓的结构和功能得到明显的恢复 ,本研究成为用周围神经修复脊髓损伤研究的又一新的里程碑。1 .2 　 胚胎组织移植　脊髓…     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用研究

目的：探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用。方法：采用大鼠脊髓半横切损伤模型，将实验动物分为3组：pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植组（A组），单纯雪旺氏细胞移植组（B组），损伤对照组（C组）。对脊髓切片行Nissl染色，酸性磷酸酶（ACP）组织化学染色及原位末端标记（TUNEL）法染色，并用联合行为记分（CBS）观察大鼠神经功能恢复情况。结果：A、B、C三组前角神经元存活率呈显著性差异（A＞B＞C，P＜0．01）；A组ACP变化幅度明显降低（A＜B＜C）；细胞凋亡率为C＞B＞A。大鼠神经功能恢复也出现了相同的变化趋势。结论：pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤前角神经元有保护作用并促进大鼠损伤脊髓功能的恢复。     

高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓组织内源性阿片肽含量的影响

为探讨高压氧（HBO）治疗脊髓损伤（SCI）的机制，复制SCI模型，观察HBO对SCI大鼠脊髓组织中内源性阿片肽（β－EP及Dyn A）含量的影响。结果显示，损伤后大鼠脊髓组织中Dyn A和β－EP含量均明显升高；0．25MPa HBO治疗后Dyn A及β－EP含量均下降，以Dyn A为著。提示内源性阿片肽参与了SCI的继发性损伤机制，且以Dyn A的作用为主；HBO可抑制SCI后内源性阿片肽的释放，恢复脊髓组织的功能。     

真皮多能干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察真皮多能干细胞（dMSCs）移植对脊髓损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：32只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型，并随机分为真皮多能干细胞移植组（A组）及损伤对照组（B组），每组10只大鼠。伤后1w，移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞（dMSCs），而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1d、1w、8w、12w对两组大鼠进行动物行为学（BBB）评分和脊髓诱发电位（SEP和MEP）检测，并于移植后12w进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：BBB评分4w以后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），移植组明显高于对照组（P〈0．05）；SEP和MEP潜伏期和波幅值在8、12w后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后12w，移植组损伤脊髓结构的修复明显优于对照组。结论：移植治疗脊髓损伤，能明显改善其运动功能和神经形态，dMSC对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

甲基强的松龙和脑源性神经生长因子联合治疗促进大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复

目的：研究甲基强的松龙（MP）和脑源性神经生长因子（BDNF）联合治疗对大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复的影响。方法：采用28只SD大鼠T10脊髓损伤模型，随机分成MP和BDNF治疗组（A组），MP和脑脊液（CSF）对照组（B组），每组14只。应用逆转录-聚合酶链反应（RT－PCR）及免疫组织化学方法观察MP和BDNF联合治疗对脊髓损伤后髓鞘再生的作用，同时采用脊髓运动功能（BBB）评分观察脊髓神经功能的恢复情况。结果：伤后1d，A组中髓鞘蛋白前脂蛋白（PLP）mRNA的表达较B组增加了45．3％，差异有显著性意义（P＜0．05）。伤后10周，A组中快蓝（LFB）和髓鞘碱性蛋白（MBP）阳性的神经髓鞘的表达较B组增加了2倍，差异有显著性意义（P＜0．05）。A组大鼠脊髓神经功能恢复较好。结论：MP和BDNF联合治疗对大鼠脊髓损伤后髓鞘再生和功能恢复有明显的促进作用，是急性脊髓损伤一种有效的联合治疗方案。     

外周神经损伤对脊髓背角与中枢-外周移行区星形胶质细胞反应的影响

目的 应用免疫组化技术及电镜观察外周神经损伤后脊髓背角中枢--外周移行区星形胶质细胞反应。方法 51只成年wistar大鼠随机分为3组：A组（n=7）正常对照组;B组（n=24）背根压榨伤组;C组（n=20）坐骨神经压榨伤组。损伤组按存活期不同各分为4个亚组,每亚组5例,大鼠分别于伤后3天、2周、1月和2月处死取材。A组、B组3天、2月时相点各取2例用于电镜标本制作。免疫组化染色观察L5脊髓背角及中枢-外周移行区胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,电镜观察中枢-外周移行区星形胶质细胞反应。结果（1）背根和坐骨神经损伤可引起脊髓背角GFAP的显著表达,其中后者的GFAP表达随时间延长而减弱,而前者整个观察期持续高水平表达;（2）坐骨神经损伤不引起中枢-外周移行区GFAP的表达增强,但背根损伤可导致该区域GFAP的显著表达且持续整个观察期;（3）超微结构观察示背根压榨伤后中枢-外周移行区星形胶质细胞突起大量增生,占据了背根传入纤维的径路。结论 外周神经损伤引起的脊髓背角及中枢-外周移行区的反应性胶质化可能是背根再生不能重建脊髓和外周联系的重要原因。     

肌基膜管移植修复脊髓缺损的实验研究

目的：应用自体肌基膜管（muscle basal lamin,MBL)移植结合神经生长因子（nerve growth factor,NGF)修复脊髓缺损。方法：18只雌性家犬脊髓横断后分为三组。A组：MBL移植结合注射NGF组,7只犬;B：单纯MBL移植组,7只犬;C组：对照组,切除脊髓0．5cm,3只犬。6个月后用免疫组化法对神经轴突进行特异染色,并用图像分析方法对脊髓横断处的远近端横截面进行神经纤维数比较,结果：A、B两组移植物中神经纤维计数比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）;各组远端神经纤维数比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）;近端神经纤维数比较,A组与B组差异有显著性意义（P＜0．05）,A组与C组差异有非常显著性意义（P＜0．01）,而B组与C组差异无显著性意义（P＞0．05）。光镜下观察到MBL移植物中有神经纤维通过。电镜证实横断远端存在新生神经纤维。结论：MBL作为一种生物管道,可作为神经轴突再生的通路;NGF具有促进神经轴突生长的作用。MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤,神经轴突能越过移植区到达远端。     

高压氧治疗脊髓损伤后脊髓组织中增殖细胞核抗原的表达变化

为探讨高压氧(HBO)对脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，笔者观察了HBO治疗后脊髓的组织学改变及PCNA的表达变化。结果显示，损伤后，脊髓组织出血、水肿、空泡变性、神经纤维排列紊乱、断裂；PCNA强阳性表达于神经元细胞中。治疗组中，0．1MPa HBO组的HE及免疫组织化学染色结果与损伤组相似；而0．25MPa HBO组则组织水肿消失，出血、空泡变性减轻，神经细胞形态恢复，结构排列相对完整；PCNA的表达强度较损伤组下降。说明PCNA能明确提示细胞的增殖指数；HBO治疗可阻止或减轻脊髓损伤的病理变化，有效修复脊髓组织的结构和功能。     

脑源性神经营养因子基因转染嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤的观察

目的观察BDNF基因转染的嗅鞘细胞（OECs）对脊髓损伤的修复作用。方法制作大鼠脊髓损伤模型,随机分为无OFCs移植组（6只）、非转染OECs移植组（6只）和转染OECs移植组（8只）,利用免疫组化、逆行示踪及顺行示踪技术对脊髓横断损伤区及其上位、下位脊髓不同平面进行观察。结果移植后12周在局部注射区仍可以见到预标记的OECs,免疫组化观察到脊髓损伤区有BDNF的表达。逆行示踪法在损伤平面头侧的脊髓、脑干和皮质中观察到示踪剂。顺行示踪法在脊髓损伤区可以见到再生的神经纤维通过。无嗅鞘细胞移植组及非转染嗅鞘细胞移植组损伤平面头侧的脊髓、脑干和皮质中未观察到示踪剂,脊髓损伤区内亦未见有再生神经纤维长入。结论移植BDNF转染的OECs可促进损伤的中枢神经轴突存活和再生,较单纯应用OECs能更好地促进脊髓损伤修复。     

高压氧对大鼠急性脊髓损伤炎症因子表达的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后早期高压氧(HBO)治疗对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达的影响.方法 将36只SD大鼠随机分为2组:SCI组(18只)和HBO组(18只).2组均采用改良的Allen打击法建造大鼠脊髓损伤模型.模型建造成功后,HBO组于损伤2 h后开始行HBO治疗,1次/d.2组分别于损伤后6、12、24、72、120、168 h各取3只大鼠,取损伤部位脊髓组织采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其中TNF-α、IL-10 mRNA表达的变化.结果 SCI组大鼠脊髓组织中TNF-α mRNA表达逐渐升高,在伤后12h表达明显上调,至24h达高峰,高表达持续至损伤后72 h;HBO组大鼠脊髓组织中TNF-α mRNA表达变化趋势与SCI组一致,但升高幅度降低(P＜0.05);SCI组大鼠IL-10 mRNA表达在损伤后12 h开始升高,并随时间的推移逐渐升高,至168 h达高峰;HBO组表达变化趋势较一致,IL-10 mRNA升高幅度更明显(P＜0.05).结论 HBO能够减少前炎性细胞因子的释放,增加抗炎性细胞因子的表达,从而减少脊髓组织的继发损伤,保护受损的神经细胞,达到促进恢复的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of early HBO therapy on the expressions of pro inflammatory cytokine mRNA including tumor necrosis factor-α (TNF-α ) and interleukin-10 (IL-10) following spinal cord injury (SCI) in rats. Methods Forty SD rats were randomly divided into 3 groups:the sham operation group (n=4) , the SCI group (n = 18) , and the hyperbaric oxygen group (n = 18). Spinal cord injury model was developed by using the modified Allen impact. Then, the SCI group and the HBO group received HBO therapy 2 hours after injury, once a day. And 3 rats were randomly selected at 6, 12, 24, 72, 120 and 168 h following injury to take samples of injured spinal cord tissue and measure dynamic changes in the expressions of TNF-α, IL-10 mRNA by semi-quantitative RT-PCR method. Results Faint expression of the cytokine mRNA could be noticed in the sham group. The expression of TNF-α mRNA in the injured spinal cord tissue in the SCI group elevated gradually, increased obviously at 12 h after injury and reached peak at 24 h, and its high expression maintained till 72 h after injury. The tendency in the expression of TNF-α mRNA in the HBO group was identical to that of the SCI group, however, the amplitude in the increase of TNF-α mRNA decreased (P＜0. 05). The expression of IL-10 mRNA in the SCI group began to increase at 12 h after injury and increased gradually over time and reached peak at 168 h. The expressions of both TNF-α and IL-10 mRNA were more consistent in the HBO group, with more obvious increase in the expressions of IL-10 mRNA. Conclusions HBO could reduce the release of pro-inflammatory cytokines and increase the expression of anti-inflammatory cytokines,resulting in reduction of secondary spinal cord injury,protection of the damaged nerve cells and promotion of recovery.     

高压氧对周围神经损伤后再生作用机理的探讨

通过手术切断大白鼠右侧坐骨神经，应用显微外科技术进行端－端吻合并辅以高压氧治疗；观察该神经功能的恢复、组织学改变及神经吻合口瘢痕的含量，探讨高压氧对周围神经损伤后再生的影响。结果表明：高压氧治疗对周围神经损伤后不同时期的修复过程有明显的促进作用，可减轻神经间质水肿、减少神经吻合口的瘢痕、加快轴索再生和神经功能恢复。     

高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓组织中兴奋性氨基酸的影响

通过复制脊髓损伤（SCD模型，用常氧，高压氧（HBO），氮氧混合气，激素等分别处理各组大鼠后，取脊髓组织测兴奋性氨基酸（EAA，包括天冬氨酸Asp及谷氨酸Glu)含量，以探讨HBO治疗SCI的机制。结果显示，损伤后，大鼠脊髓组织中EAA（Glu)含量明显升高，经不同处理后，除氮氧混合气组外，Glu含量均有所下降，以0.25MPa HBO组和0.25MPa HOB 激素组下降最明显，与损伤组比较有显著性差异（P＜0．01），与正常对照组比较则无显著性差异；0.25MPa HBO组与0.1MPa HBO组比较及0.25MPaHBO激素组与激素组比较，均有显著性差异（P＜0．01）。提示HBO能通过减少组织中的EAA减轻SCI后的继发性损伤，恢复脊髓组织的功能，其中以0 .25MPa HBO和0.25MPa HBO并用激素治疗效果较佳。