细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性行

目的 探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性.方法 鼻息肉组织标本29例,下鼻甲黏膜标本11例,免疫组化法检测上皮细胞Fas、FasL、Bcl-2和PCNA蛋白的表达活性,TUNEL过氧化酶原位标记法检测上皮原位细胞凋亡括性.结果 在鼻息肉组,PCNA阳性细胞指数(PIPCNA)大于自身的细胞凋亡指数(AI,P<0.01),而且PIPCNA和AI绝对值均大于下鼻甲组(P<0.01),但PIPCNA/AI比值(1.95±0.66)却小于下鼻甲组(P<0.01);FasL和Bcl-2阳性细胞指数(PIFasLL、PIBcl-2均大干自身的Fas阳性细胞指数(PIFasP<0.05),但该三指数均大干下鼻甲组(P<0.01);PIBcl-2/PIFas比值大于下鼻甲组(P<0.01),但组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 鼻息肉上皮细胞的增殖活性和凋亡活性均增强,但前者仍然大干后者;Bcl-2介导的细胞凋亡抑制机制和FasL介导的细胞免疫逃逸机制可能对鼻息肉上皮细胞凋亡活性产生部分抑制作用.     

细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性

目的探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性。方法鼻息肉组织标本29例,下鼻甲黏膜标本11例,免疫组化法检测上皮细胞Fas、FasL、Bcl-2和PCNA蛋白的表达活性,TUNEL过氧化酶原位标记法检测上皮原位细胞凋亡活性。结果在鼻息肉组,PCNA阳性细胞指数（PIPCNA）大于自身的细胞凋亡指数（AI,P〈0.01）,而且PIPCNA和AI绝对值均大于下鼻甲组（P〈0.01）,但PIPCNA/AI比值（1.95±0.66）却小于下鼻甲组（P〈0.01）;FasL和Bcl-2阳性细胞指数（PIFasL、PIBcl-2）均大于自身的Fas阳性细胞指数（PIFas,P〈0.05）,但该三指数均大于下鼻甲组（P〈0.01）;PIBcl-2/PIFas比值大于下鼻甲组（P〈0.01）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论鼻息肉上皮细胞的增殖活性和凋亡活性均增强,但前者仍然大于后者;Bcl-2介导的细胞凋亡抑制机制和FasL介导的细胞免疫逃逸机制可能对鼻息肉上皮细胞凋亡活性产生部分抑制作用。     

红霉素干预对人鼻息肉上皮细胞凋亡的影响

目的观察红霉素对体外培养的鼻息肉上皮细胞B细胞淋巴瘤-2基因(B cell lymphomas-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响,探讨上皮细胞凋亡在鼻息肉组织形成中的意义。方法将30例鼻息肉及15例下鼻甲组织均分成两组,分别对其上皮细胞进行原代培养,其中一组加入红霉素。培养第1、3、5天应用末端脱氧核苷酰转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸原位缺口末端标记法(the TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测细胞凋亡情况,并用免疫组化法检测细胞凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2的表达。结果①鼻息肉红霉素组培养第1、3、5天的上皮细胞凋亡指数(用x±s表示,下同)分别为(33．23±6．50)％、(36．14±3．21)％和(52．63±7．86)％,对照组(不加红霉素组)为(31．02±5．60)％、(33．88±4．02)％和(39．64±7．48)％,培养第5天的上皮细胞凋亡指数红霉素组与对照组差异有统计学意义(t=4．480, P<0．05)。②鼻息肉上皮细胞Bcl-2和Bax表达均显著强于下鼻甲组织(P<0．01);培养第5天鼻息肉上皮细胞红霉素组Bax表达显著强于对照组(t=8．734,P<0．05),Bcl-2表达虽强于对照组,但差异无统计学意义;下鼻甲上皮细胞红霉素组与对照组的Bcl-2与Bax阳性表达差异均无统计学意义(P均>0．05);红霉素干预第5天鼻息肉上皮细胞显示明显的凋亡趋势(P<0．05)。结论红霉素能显著提高Bax蛋白的表达,有显著的促鼻息肉上皮细胞凋亡的作用。     

局部应用糖皮质激素对鼻息肉组织中蛋白激酶C和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的:探讨局部应用糖皮质激素对鼻息肉组织中蛋白激酶C(PKC)、抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax蛋白表达的影响及意义.方法:应用免疫组织化学方法检测PKC、Bcl-2和Bax蛋白在16例鼻息肉患者(鼻息肉组)中的表达,并在鼻腔局部应用糖皮质激素治疗4周后观察其表达的变化;以同期手术的6例鼻中隔偏曲患者的下鼻甲黏膜组织作对照组.结果:糖皮质激素治疗前,鼻息肉组中PKC主要表达在嗜酸粒细胞(Eos)、血管内皮细胞及腺体细胞, Bcl-2及Bax蛋白主要表达于鼻黏膜腺体细胞、上皮层及Eos;与对照组相比,PKC、Bcl-2表达有明显差异(P<0.01),鼻息肉组PKC、Bcl-2在使用激素后,表达明显减低;Bax蛋白在使用激素后,表达明显增加.结论:鼻息肉组中PKC及细胞凋亡相关基因表达异常可能与鼻息肉的发生、发展有一定关系,糖皮质激素可能通过抑制鼻息肉组织中PKC的表达,调节相关凋亡基因的表达,减少Eos的浸润,达到治疗鼻息肉的效果.     

Bcl-2和Bax在自发性糖尿病小鼠耳蜗中的表达研究

目的观察自发性糖尿病小鼠耳蜗组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因的表达。方法非肥胖性糖尿病（non-obese,diabetes,NOD）雌鼠分为糖尿病4周组（D4组）、糖尿病12周组（D12组）和正常对照组（C组）。应用吖啶橙-碘化丙啶（AO-PI）荧光染色和DNA缺口末端原位标记法（TUNEL）检测耳蜗凋亡细胞;免疫组织化学法和Western blot技术检测Bcl-2和Bax在糖尿病耳蜗组织中的表达。结果 NOD小鼠耳蜗可见大量凋亡细胞,D12组比D4组明显增多（P〈0.05）;两组底回毛细胞较顶回凋亡率明显增高（P〈0.05）。D4组耳蜗中Bax在细胞浆内呈阳性表达,Bcl-2在细胞核及细胞浆内均呈阳性表达;D12组Bax在细胞核及细胞浆内均呈阳性表达,而Bcl-2在细胞浆内呈阳性表达;与C组比较,D4组Bax与Bcl-2表达显著增高（P〈0.05）,D12组Bax表达显著增高（P〈0.05）,但Bcl-2表达下调（P〈0.05）;D4组Bax表达较D12组显著降低（P〈0.05）,但Bcl-2表达较D12组显著增高（P〈0.05）。结论自发性糖尿病小鼠耳蜗存在明显细胞凋亡,其损伤机制与Bax表达增高及Bcl-2表达降低有关。     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Bcl-2与Bax的表达

目的 研究内耳免疫反应时细胞凋亡以及Bcl 2和Bax的表达情况,探讨自身免疫性内耳病发病机制。方法 选用健康SD大鼠60只,随机分成实验组30只（皮下注射Ⅱ型胶原与弗式佐剂）,佐剂组15只（皮下注射弗式佐剂）,对照组15只（予等量生理盐水）,免疫后进行畸变产物耳声发射（DPOAE）检测,扫描电镜形态学观察,DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡及免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达。结果 实验组DPOAE幅值下降（P<0.05）,部分毛细胞纤毛排列紊乱、簇状缺失, Corti器、血管纹和螺旋神经节可见TUNEL阳性染色, 且Bax/ Bcl-2表达比值上调,而对照组和佐剂组未见明显改变。结论 内耳免疫反应可诱导细胞凋亡发生, Bcl 2和Bax蛋白在其中起了重要调节作用。     

肿节风对鼻咽癌裸鼠移植瘤凋亡和端粒酶活性的影响

目的:评价肿节风提取物诱导鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞凋亡作用和抑制端粒酶活性的能力。方法:将移植人鼻咽癌CNE1、CNE2细胞的裸鼠随机分为肿节风组、环磷酰胺组和对照组,定期检测裸鼠的体重及肿瘤体积,给药一个疗程(30d)后解剖获取肿瘤组织,称量瘤体重量,计算抑瘤率。运用透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变;免疫组织化学法检测瘤组织Bcl-2和Bax的表达;流式细胞仪进行细胞周期、细胞凋亡分析;TUNEL法检测细胞凋亡;TRAP-ELISA方法观察药物处理前后组织端粒酶活性的变化。结果:动物实验表明,肿节风对CNE1、CNE2移植瘤有明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为40.8%和46.8%(与对照组比较P<0.01);且Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),而Bax蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);电镜下肿节风组瘤组织中可见较多典型的凋亡形态学改变;TUNEL法肿节风组凋亡指数明显高于对照组(P<0.01);流式细胞技术显示肿节风组G0/G1期细胞高于对照组(P<0.01),细胞阻滞在G0/G1期,凋亡率明显高于对照组(P<0.01);端粒酶活性检测中可见肿节风组比对照组端粒酶活性降低(P<0.01)。结论:肿节风在体内具有抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的作用,其抑瘤作用机制与诱导凋亡有关,抑制端粒酶活性可能起部分作用。     

蛇床子素对人鼻咽癌细胞CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨蛇床子素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响，寻找鼻咽癌综合治疗的新思路。方法  以蛇床子素不同梯度浓度处理CNE2细胞，采用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，RT-PCR和Western blot分别测定Bax、Bcl-2mRNA和蛋白的表达水平。结果　蛇床子素处理CNE2细胞24、48、72 h对细胞增殖均有不同程度抑制作用，且呈时间、剂量依赖性（P <0.05）。蛇床子素干预CNE2细胞48 h后，流式细胞术结果表明细胞凋亡率显著升高（P <0.01），RT-PCR与Western blot检测提示Bax mRNA、蛋白表达显著增加，而Bcl-2 mRNA及蛋白明显下调（P <0.01），均呈浓度依赖性。结论　蛇床子素对CNE2细胞具有抑制增殖和促进凋亡的生物学效应。     

凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在慢性鼻及鼻窦炎伴嗅觉障碍患者嗅黏膜中的表达

目的研究Bcl-2和Bax在慢性鼻及鼻窦炎（CRS）伴嗅觉障碍患者嗅黏膜中的表达,探讨其对嗅觉神经元（olfactory receptor neurons,ORNs）凋亡的调节作用。方法采用康涅狄格化学感受临床研究中心所采用的嗅觉检查法——CCCRC（Connecticut ChemosensoryClinical Research Center）对46例行功能性鼻内镜手术的患者进行嗅觉评分并分组：A组,CRS伴嗅觉障碍25例;B组,CRS不伴嗅觉障碍10例;C组,单纯鼻中隔偏曲行鼻中隔矫正术11例。免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax在3组患者嗅黏膜中的表达。结果在ORNs中,A组Bcl-2和Bax表达显著高于B组（q=3.24、4.29,P均〈0.05）和C组（q=8.56、12.99,P均〈0.01）,A组Bcl-2/Bax比值显著低于B组（q=3.76,P〈0.05）和C组（q=6.67,P〈0.01）;在基底细胞中,Bcl-2在3组表达无显著差异（q=0.68、0.69、1.06,P均〉0.05）,Bax在A组的表达显著高于B组和C组（q=9.54、11.98,P均〈0.01）,A组Bcl-2/Bax比值显著低于B组和C组（q=5.48、9.14,P均〈0.01）;在A、B、C 3组ORNs和基底细胞中,Bcl-2/Bax比值与嗅觉评分均呈正相关（rA分别为0.5631、0.8926,rB分别为0.5700、0.7991、rC分别为0.5694、0.8121,P均〈0.01）。结论细胞凋亡参与了CRS伴嗅觉障碍患者ORNs的减少,Bcl-2和Bax在此过程中起了重要的调控作用,Bcl-2/Bax比值决定细胞是否凋亡。     

内耳免疫反应中细胞凋亡的研究

目的探讨内耳免疫反应过程是否引起细胞凋亡以及Fas和FasL、Bcl-2和Bax的表达情况。方法选用雌性白色豚鼠16只，随机分为实验组和对照组各8只，以钥孔蛾血蓝蛋白全身免疫后，实验组以相同抗原进行内耳免疫，对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水，在内耳免疫7d后处死动物，取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过电镜和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)检测内耳凋亡细胞，免疫组化检测内耳Fas和FasL以及Bcl-2和Bax的表达。结果透射电镜观察发现实验组术后7d内耳外毛细胞、血管纹细胞及螺旋神经节细胞都出现了凋亡细胞的特征性改变，而对照组未发现具有上述特征的细胞。实验组内耳Corti器毛细胞，血管纹的缘细胞和螺旋神经节细胞存在TUNEL染色阳性细胞，TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征，对照组内耳的任何结构中都没发现TUNEL染色阳性细胞。免疫组化染色实验组Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带Fas和FasL蛋白表达阳性，而对照组只有螺旋神经节细胞和血管纹有较弱的Fas蛋白表达，FasL蛋白表达阴性。实验组Corti器、螺旋神经节细胞、侧壁Bcl-2蛋白表达阴性，对照组的Corti器、侧壁和螺旋神经节细胞Bcl-2蛋白表达阳性。实验组Corti器、侧壁和螺旋神经节细胞Bax蛋白表达阳性，对照组只有螺旋神经节细胞Bax蛋白表达弱阳性，Corti器、侧壁表达阴性。结论内耳免疫反应可诱导细胞凋亡发生，Fas-FasL是此过程的信号转导途径之一，Bcl-2和Bax蛋白在其中起了重要调节作用。     

鼻息肉中一氧化氮合酶表达及其意义

目的 :了解鼻息肉 (NP)中一氧化氮合酶 (NOS)的分布特点和活性及其在NP发病中的作用。方法 :用免疫组织化学法检测 30例NP(NP组 )及 2 0例正常鼻黏膜 (正常鼻黏膜组 )中NOS的表达 ,并用分光光度计法检测其活性。结果 :NP组NOS活性为 (4.0 79± 0 .6 5 5 )U/mg蛋白 ,正常鼻黏膜组为 (1.5 2 6± 0 .310 )U/mg蛋白 ,二者间差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;NP组iNOS有大量细胞表达 ,分布在黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞以及炎症细胞中 ,与正常鼻黏膜组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;而eNOS也有表达 ,但与正常鼻黏膜组比较 ,差异无统计学意义 ;NP组i NOS表达明显高于eNOS表达 ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :NP主要表达iNOS ,分布在黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞以及炎症细胞中 ,其产生的大量一氧化氮在NP的发病过程中可能起着重要的作用     

Tenascin在鼻息肉组织中的表达及其临床意义

目的：探讨Tenascin(TN)在鼻息肉组织中的表达和分布特征及其在鼻息肉发生中的可能作用。方法：采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶(SP)法检测24例鼻息肉标本(鼻息肉组)和15例慢性肥厚性鼻炎下鼻甲标本(下鼻甲组)中TN的表达，并以5例健康者(对照组)下鼻甲黏膜作对照。结果：鼻息肉组和下鼻甲组黏膜上皮细胞及腺上皮细胞均表达TN；鼻息肉组TN的黏膜上皮阳性细胞表达的吸光度值显著高于下鼻甲组(P＜0．01)；鼻息肉组TN的腺上皮阳性细胞表达的吸光度值显著高于下鼻甲组(P＜0．01)；对照组下鼻甲组织中黏膜上皮及腺体几乎检测不到TN的表达；鼻息肉组腺体TN阳性率明显高于下鼻甲组(P＜0．05)。结论：TN在鼻息肉组织中的高表达与鼻息肉的发生、发展相关；TN在鼻腔内的表达细胞是黏膜上皮细胞和浆液性腺上皮细胞。     

Expression of cell proliferation and apoptosis gene associated protein on nasal polyps and its significance]

OBJECTIVE: To further understand the pathogenic mechanism of nasal polyps, namely the cells proliferation and apoptosis in nasal polyps tissue. METHODS: The proliferation cell nuclear antigen (PCNA), apoptosis associated gene protein (Bcl-2, Bax) were determined in 26 tissue samples of nasal polyps and 14 controls from normal inferior turbinates respectively. RESULTS: (1) The positive expression e of PCNA, Bcl-2 and Bax were significantly higher in epithelium of nasal polyps than the controls, and the expression rate of Bcl-2/Bax, however, tended equipoise. (2) The expression of Bcl-2 were significantly stronger than Bax in glands, eosinophils of nasal polyps tissue, and there were not significant differences in inferior turbinates. CONCLUSION: There is strongly proliferation activity in the epithelium of nasal polyps, and expression imbalance of Bcl-2/Bax may be one of the important factors of eosinophilia in nasal polyps tissue.     

一氧化氮及其合酶在鼻息肉中的表达

目的：探讨一氧化氮(NO)及其合酶(NOS)在鼻息肉中的表达，以及NO在鼻息肉发病中的作用。方法：用免疫组织化学及原位杂交方法研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在鼻息肉中的表达，同时用原位杂交方法研究iNOS mRNA的表达，并用硝酸还原酶法研究NO在鼻息肉中的产生情况。结果：鼻息肉组织中eNOS主要分布于上皮、腺体细胞及血管内皮细胞，其染色强度稍强于对照组。iNOS在上皮细胞呈现较强的阳性染色，在息肉组织内主要表达于散在的炎症细胞。结论：eNOS活性增高可能与鼻息肉发病中血管过度扩张、腺体病理性分泌增多等有关。iNOS生成的较高浓度的NO在鼻息肉的病理过程中可能起到促进炎症发展的作用。     

Protein kinase C in eosinophil proliferation and infiltration in nasal polyp tissue]

OBJECTIVE: To explore the significance of protein kinase C (PKC) in eosinophil (EOS) proliferation and infiltration in nasal polyp tissues. METHODS: With the methods of in situ hybridization and immunohistochemistry staining, PKC and apoptosis gene (Bcl-2, Bax) expression were measured between nasal polyps from 26 patients and inferior turbinate mucous membrane tissue (ITMMT) from 20 normal persons. EOS was identified with May-Grünwald-Giemsa (MGG) staining. RESULTS: In EOS, the positive cell expressive rate of Bcl-2 mRNA and its protein were significantly higher in group of nasal polyps than that in group of ITMMT (P < 0.01). Although the positive cell expressive rate of Bax mRNA and its protein were slightly higher in group of nasal polyp tissue than that in group of ITMMT, the difference was not significant (P > 0.05). PKC was expressed in EOS of all 26 cases from nasal polyp tissues, but in 20 cases from ITMMT, only 7 cases showed occasional PKC expression. In both groups, PKC positive cell expression was significantly different, and the expression of PKC and Bcl-2 mRNA as well as their protein in EOS of nasal polyps showed remarkably positive relation (r1 = 0.0875, r2 = 0.0823, P < 0.01). CONCLUSION: PKC expression increasing in EOS of nasal polyp tissues was closely associated with apoptosis inhibiting. So we presumed that EOS inhibiting in nasal polyp tissues was obtained by activating PKC signal transduction pathway.     

鼻息肉中IL-15mRNA的表达及其作用

目的 观察IL-15mRNA在鼻息肉与下鼻甲中表达的差异及其与Bcl-2、Bcl-XL表达的关系,明确鼻息肉中IL-15的来源,探讨其在鼻息肉发病机制中的作用。方法 用原位杂交的方法测定24例鼻息肉与8例下鼻甲的IL-15mRNA的表达情况,同时用免疫组化法检测其组织中Bcl-2及Bcl-XL的表达情况。结果 鼻息肉组中IL-15mRNA在黏膜下固有层浸润的以EOS为主的炎症细胞有很强的表达,与下鼻甲组IL-15mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15mRNA在多数鼻息肉中的黏膜下腺体上皮细胞有表达,且强于在下鼻甲组的表达。黏膜下固有层炎症细胞IL-15mRNA的表达与Bcl-XL的表达有相关性(r＝0.592)。结论 IL-15通过旁分泌或自分泌的方式作用于位于黏膜下固有层中以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞,并通过Bcl-XL途径诱导的凋亡抑制在鼻息肉的发病中可能起重要作用。IL-15在鼻息肉中黏膜下腺体的表达强于在下鼻甲中的表达,可能参与了鼻息肉形成过程中黏膜下腺体分泌功能紊乱的病理过程。     

Effect of erythromycin on the expression of apoptotic gene on eosinophils in nasal polyps in vitro]

OBJECTIVE: To study the expression of apoptotic gene in nasal polyps and the possible effect of erythromycin on it. METHODS: Total 40 nasal polyps biopsies were detected the expression of Bcl-2, Bax, Bcl-xL as well as Fas protein on eosinophils by immunohistochemistry. The expression of Bax, Bcl-xL, Fas on eosinophils in 15 nasal polyps explants which cultured with or without erythromycin were detected also. RESULTS: In nasal polyps, the expression of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Fas protein on eosinophils are 5% (2/10), 65% (26/40), 40% (16/40) and 90% (36/40) respectively. As compared with inferior turbinate, there were significant difference in expression of Bax and Fas protein between two tissues (P < 0.05). After cultured with erythromycin, the expression of Bax protein increased (P < 0.05), but the expression of Bcl-xL and Fas protein had not changed. CONCLUSION: Bax may be the most significant gene which control the apoptosis of eosinophils in nasal polyps. And a possible mechaism which erythromycin promote the apoptosis of eosinophils is increase the expression of Bax.