氯沙坦和硝苯地平对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察血管紧张素 (Ang )对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的作用及 AT1受体拮抗剂氯沙坦和钙通道阻滞剂硝苯地平对增殖的影响。方法 :幼龄 Wistar大鼠 (4周龄 ) 12只 ,分成对照组、Ang 组、氯沙坦加 Ang 组及硝苯地平加 Ang 组 ,采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞 ,分别测定 3H-胸腺嘧啶 (3H- Td R)、3H-亮氨酸 (3H- L eu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果 :Ang (0 .1μmol/ L)作用 2 4h能使 VSMC的 3H- Td R与 3H- L eu的掺入量比对照组 (1%胎牛血清 )增多 ,且 S期和 G2 / M期细胞增多 ,细胞增殖指数增大。与 Ang 组相比 ,Ang 加氯沙坦 (10 μm ol/ L)组和 Ang 加硝苯地平 (10 μmol/ L)组 ,3H-Td R、3H- L eu的掺入量减少 ,S期细胞构成比和细胞增殖指数减少。结论 :Ang 对 VSMC有促增殖作用 ,能被氯沙坦与硝苯地平所拮抗     

胰岛素对血管平滑肌细胞4E结合蛋白1和核糖体蛋白S6激酶磷酸化的刺激作用

目的研究胰岛素对血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白质合成翻译过程的两个调节子,4E-结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体蛋白S6激酶,磷酸化的调节作用及其生物学意义.方法培养大鼠胸主动脉VSMC.用3H-亮氨酸和3H-TdR掺入法分别测定蛋白质合成和DNA合成;免疫印迹法检测4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶的磷酸化.结果与对照相比,100 nmol/L胰岛素显著增加了VSMC的3H-亮氨酸和3H-TdR掺入.同样浓度的胰岛素作用于VSMC,可以诱导4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶发生磷酸化.二者的磷酸化分别于胰岛素刺激后,30 min和10 min达高峰.结论胰岛素可以刺激VSMC的4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶发生磷酸化,这可能是胰岛素发挥促进VSMC生长作用的机制.     

青蒿素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察青蒿素 (artemisinin ,Art)对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞周期的影响 ,探讨作用机制。方法 :体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Art组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;通过HE染色、DNA梯带检测和流式细胞术观察细胞的凋亡并测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,各浓度Art组VSMC计数不同程度减少 ,3H- TdR掺入率降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性 ;Art诱导细胞凋亡 ;使细胞周期阻滞于G0 / G1 期。结论 :Art对体外培养VSMC的增殖有抑制作用 ,可能通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡及干扰细胞周期等途径发挥作用     

胰岛素对血管平滑肌细胞4E结合蛋白1和核糖体蛋白S6激酶磷酸化的刺激作用

目的研究胰岛素对血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白质合成翻译过程的两个调节子,4E-结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体蛋白S6激酶,磷酸化的调节作用及其生物学意义。方法培养大鼠胸主动脉VSMC。用3H-亮氨酸和3H-TdR掺入法分别测定蛋白质合成和DNA合成;免疫印迹法检测4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶的磷酸化。结果与对照相比,100nmol/L胰岛素显著增加了VSMC的3H-亮氨酸和3H-TdR掺入。同样浓度的胰岛素作用于VSMC,可以诱导4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶发生磷酸化。二者的磷酸化分别于胰岛素刺激后,30min和10min达高峰。结论胰岛素可以刺激VSMC的4E-BP1和核糖体蛋白S6激酶发生磷酸化,这可能是胰岛素发挥促进VSMC生长作用的机制。     

阿魏酸钠抑制内皮素-1介导高血压病血管平滑肌细胞增殖的研究

目的研究阿魏酸钠(SF)对高血压痛患者血管平滑肌细胞(VSMC)在体外培养条件下内皮素-1(ET-1)介导增殖的影响.方法采用体外培养的VSMC,选用3～8代VSMC分为:ET-1组;SF组;ET-1与SF组.在ET-1组中加入6个不同浓度的SF(0,20,40,80,100,120μg/ml),培养24h后用苔酚蓝法(MTT)和氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞含量及其培养液中一氧化氮(NO).结果SF可使细胞MTT含量和3H-TdR掺入量明显减少,ET-1可使细胞MTT含量和3H-TdR掺入量明显增加.同时,SF可使ET-1所致的细胞MTT含量增加和3H-TdR掺入量增加明显减少,并随SF含量增加而NO升高.结论SF可抑制VSMC增殖,SF抑制ET-1诱导VSMC增殖,并呈剂量依赖型.其作用可能与通过拮抗ET-1、增高NO活性有关.     

心钠素及内皮素对心肌细胞肥大及心脏成纤维细胞增殖的影响

目的观察心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的调节作用.方法采用体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的 ET-1、ANP单独或联合作用细胞24 h,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白合成,Bradford法测细胞总蛋白含量,RT-PCR法测心肌细胞心钠素ANP mRNA的表达,评价ET-1、ANP对心肌细胞和成纤维细胞的作用.结果对于心肌细胞,ET-1显著促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,呈剂量依赖性,ANP mRNA表达明显增加;对于心脏成纤维细胞,ET-1促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,以上作用可被ANP明显抑制.结论ET-1促进ANP分泌的同时也促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ANP反之抑制ET-1的促心肌肥厚作用.     

心钠素及内皮素对心肌细胞肥大及心脏成纤维细胞增殖的影响

目的观察心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的调节作用。方法采用体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1、ANP单独或联合作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白合成,Brad-ford法测细胞总蛋白含量,RT-PCR法测心肌细胞心钠素ANPmRNA的表达,评价ET-1、ANP对心肌细胞和成纤维细胞的作用。结果对于心肌细胞,ET-1显著促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于心脏成纤维细胞,ET-1促进3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,以上作用可被ANP明显抑制。结论ET-1促进ANP分泌的同时也促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ANP反之抑制ET-1的促心肌肥厚作用。     

CD40-CD40配体与肺间质纤维化

作为一种重要的细胞间信息传递途径，CD40-CD40配体（CD40-CD40L）通路在肺间质纤维化发生发展中的作用逐渐受到重视。CD40-CD40L介导的免疫细胞间、免疫细胞与问质细胞间的相互作用相互激活是炎症存在、持续和纤维化形成的一个重要机制。拮抗CD40-CD40L的特异性免疫治疗为肺间质纤维化的防治提供了新的方向。     

内皮素对心脏细胞DNA和蛋白合成的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)对心脏心肌细胞和成纤维细胞DNA和蛋白合成作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心脏心肌细胞和成纤维细胞,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定两种细胞DNA、蛋白合成,Bradford法测两种细胞总蛋白含量,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)法测心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达.结果对于心肌细胞,ET-1(10-9～10-7mol/L)显著促进3H-TdR掺入率、较对照组分别增加0.31±0.079(P＜0.01)、1.193±0.267(P＜0.001)、1.336±0.278(P＜0.001),3H-Leu掺入率增加0.223±0.058(P＜0.01)、1.054±0.202(P＜0.001)、1.074±0.204(P＜0.001),呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于成纤维细胞,ET-1(10-8 mol/L)促进3H-TdR掺入率,较对照组增加0.248±0.02(P＜0.05)、3H-Leu掺入率较对照组增加0.434±0.041(P＜0.01).结论 ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,且对心肌细胞的作用强于对成纤维细胞的作用.提示ET-1促心肌肥厚主要使促进心肌细胞肥大,对间质纤维化作用较弱.     

西拉普利对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的为探讨西拉普利预防再狭窄及动脉粥样硬化的可能性,研究了西拉普利对血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑细胞(VSMC)增殖的影响。方法以培养的大鼠VSMG为模型、应用3H-TdR掺入试验观察VSMC增殖情况。结果PDGF能明显促进VSMCDNA合成,大剂量西拉普利能抑制PDGF诱导的细胞DNA合成,小剂量西拉普利增加细胞DNA合成。结论大剂量西拉普利能明显抑制VSMC增殖、对防治再狭窄及动脉粥样硬化可能有效。     

γ-干扰素和CD40配体刺激下大鼠血管平滑肌细胞凋亡与钙调神经磷酸酶的相关性

目的 观察在炎症因子γ-干扰素和CD40配体刺激下大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及钙调神经磷酸酶活性和表达水平的变化,进一步探讨血管平滑肌细胞凋亡的机制.方法 取200～250 g雄性清洁级SD大鼠,分离胸主动脉进行血管平滑肌细胞培养并分别给予炎症因子γ-干扰素、CD40配体和γ-干扰素+CD40配体共刺激及加入钙调神经磷酸酶阻断荆FK506处理.采用Western Blot检测钙调神经磷酸酶表达水平;定磷法检测钙调神经磷酸酶活性,流式细胞仪检测细胞表面CD40表达及平滑肌细胞凋亡.结果 对照组可表达一定量的CD40,用γ-干扰素刺激细胞后,细胞表面CD40荧光阳性细胞比率增高(18.5%±0.2%比44.2%±2.4%).用γ-干扰素、CD40配体分别刺激血管平滑肌细胞,钙调神经磷酸酶活性[分别为6.48±1.09 mmolPi/(g.h)和6.26±1.47 mmolPi/(g.h)]及表达水平(分别为0.82±0.24和0.73±0.20)均显著高于对照组[分别为1.56±0.53 mmolPi/(g.h)和0.38±0.12,P<0.01],γ-干扰素与CD40配体共刺激下钙调神经磷酸酶活性[11.70±2.73 mmolPi/(g.h)]及表达水平(2.85±0.61)较其余各组显著增高(P<0.01),平滑肌细胞凋亡水平显著高于其他刺激组.FK506作用下钙调神经磷酸酶活性[2.74±0.30 mmolPi/(g.h)]降低,平滑肌细胞凋亡水平较刺激组显著减少(P<0.01).钙调神经磷酸酶活性与凋亡水平呈显著正相关(P<0.05).结论 炎症因子γ-干扰素可促进血管平滑肌细胞表面CD40表达增加,通过CD40-CD40配体信号通路活化钙调神经磷酸酶,使血管平滑肌细胞的凋亡增加.     

肾上腺髓质素及其受体系统抑制溶血磷脂酸诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的观察溶血磷脂酸对肾上腺髓质素及其受体系统生成的影响和肾上腺髓质素在溶血磷脂酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,H3-TdR掺入测定血管平滑肌细胞DNA合成,γ-32P-ATP标记的同位素法测定丝裂原活化蛋白激酶活性,放射免疫法测定血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素的含量。结果溶血磷脂酸促进大鼠血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成,上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体CRLR、RAMP2和RAMP3mRNA表达;肾上腺髓质素可抑制溶血磷脂酸刺激大鼠血管平滑肌细胞3H-TdR掺入,抑制溶血磷脂酸诱导的丝裂原活化蛋白激酶激活。结论溶血磷脂酸上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统,肾上腺髓质素及其受体抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与其抑制丝裂原活化蛋白激酶激活有关。     

CD40-CD40L在动脉粥样硬化和血栓形成中的作用

近年来研究证实CD40分子与其配体CD40L在动脉粥样硬化的各个阶段均起重要作用。动脉粥样硬化的关键细胞成分——内皮细胞、巨噬细胞和平滑肌细胞上均有CD40和CD40L表达,两者结合能诱导人血管内皮细胞表达多种活性介质,参与动脉粥样硬化斑块的形成,而阻断CD40- CD40L通路可防止动脉粥样硬化或阻止已形成的斑块进展。CD40L可能参与血栓形成和血小板活化,急性脑梗死和急性冠状动脉综合征患者血液中的可溶性CD40L持续性增高。一些药物能够下调CS40L水平,为预防血管事件的发生提供了一个新的途径。     

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 （PDGF）对培养的血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原基因表达的影响

目的研究同型半胱氨酸（Hcy）对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原基因（cyclin D1）mRNA表达的影响。方法采用同位素技术测定3^H-TdR参入法和核酸分子杂交技术检测大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原基因（cyclin D1）mRNA表达的水平。结果Hcy能促进VSMC增殖，并且具有剂量效应关系，同时可增加cyclinD，mRNA表达水平3.2倍。结论Hcy促进VSMC增殖可能是通过增加cyclin D1 mRNA表达水平的途径实现的，使静止期细胞进入细胞分裂周期，从而促进VSMC迅速增殖。     

阻断CD40-CD40配体系统对动脉粥样硬化的影响

目的探讨阻断CD40-CD40配体系统对动脉粥样硬化的影响。方法18只载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为阳性对照组(n=10)和抗CD40配体抗体组(n=8),并以近交系C57BL/6小鼠作为正常对照。测定血脂、可溶性血管细胞粘附分子1和可溶性细胞间粘附分子1浓度。观察主动脉组织病理形态学改变,免疫组织化学法测定斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞和CD4 T细胞百分率。Western杂交分析测定基质金属蛋白酶9的蛋白表达。结果抗CD40配体抗体治疗可明显降低可溶性血管细胞粘附分子1和可溶性细胞间粘附分子1浓度(P<0.01),对血脂无明显影响(P>0.05);可减轻动脉粥样硬化病变,减少斑块部位巨噬细胞和CD4 T细胞,增加平滑肌细胞数量(P<0.05),降低基质金属蛋白酶9的表达(P<0.01)。结论阻断CD40-CD40配体系统可使血清可溶性粘附分子浓度下降,抑制炎症反应,从而减轻动脉粥样硬化病变,对血脂无影响。     

莲心碱对血管平滑肌细胞增殖及热应激蛋白70和P53表达的影响

采用培养的内皮素所致血管平滑肌细胞增殖模型。用氚-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术、Westernblot及Northernblot分析方法，观察了莲心减对血管平滑肌细胞增殖的作用及对热应激蛋白70及其mRNA和抑癌基因P53表达的影响。结果发现，遂心碱能逆转内皮素所致的~3H－TdR掺入量增多，阻止血管平滑肌细胞由Go／G1期进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）．并能使效应激蛋白70及mRNA表达减弱，P53抑癌基因及mRNA表达增强。以上结果提示，莲心碱能抑制血管平滑肌细胞增殖，这可能与热应激蛋白70及P53的调控有关。     

钙激动剂介导血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

为探讨钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在雷尼丁刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用，以培养的大鼠血管平滑肌细胞为模型，用雷尼丁刺激其内贮Ca^2 释放入胞浆，环孢素A阻断钙调神经磷酸酶信号通路，维拉帕米阻断钙通道，检测血管平滑肌细胞钙调神经磷酸酶、丝裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶C活性，用^3H-亮氨酸及^3H－胸腺嘧啶掺入量作为反应细胞增殖的指标。结果显示，雷尼丁刺激组蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异显著（P＜0．01）；环孢素A及维拉帕米能明显抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白核酸合成速率增高，与雷尼丁刺激组相比差异显著（P＜0．01）。同时发现雷尼丁刺激组钙神经磷酸酶、蛋白激酶C活性与对照组平滑肌细胞相比差异显著（P＜0．05或0．01）。环孢素A和维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞钙调神经磷酸酶活性增高，维拉帕米抑制雷尼丁介导的平滑肌细胞蛋白激酶C活性的增高。提示钙调神经磷酸酶信号通路在雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖中起重要作用，但钙调神经磷酸酶信号通路不是雷尼丁介导平滑肌细胞增殖的唯一信号通路，以丝裂素活化蛋白激酶为核心的信号通路亦参与了雷尼丁刺激的平滑肌细胞增殖。     

银杏叶提取物对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察银杏叶提取物（EGB）对活性氧诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法用含100 g/L小牛血清的DMEM体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的过氧化氢（H2O2）作为外源性活性氧刺激VSMC增殖,应用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）掺入和细胞周期时相测定等方法观察给予不同浓度的EGB预处理后,EGB对H2O2作用后VSMC的增殖的影响。结果H2O2对VSMC的增殖活性具有剂量依赖性促进作用,EGB可以抑制H2O2诱导的VSMC增殖,且具有剂量依赖性。结论EGB对于动脉粥样硬化形成及经皮腔内冠状动脉介入治疗后再狭窄的防治可能具有应用前景。