前列腺癌细胞凋亡相关基因表达及其意义

前列腺癌的治疗方法最主要是激素治疗，但当其发展为雄激素非依赖型时，对激素治疗的疗效甚微。需要其他治疗方法的配合，而前列腺癌细胞上有多种细胞凋亡相关基因表达，各种细胞凋亡相关基因及其间的相互作用影响着前列腺癌细胞的生长和分化，本主要介绍前列腺癌的凋亡相关基因及其在化疗，放疗及基因治疗等不同方法中的意义。     

Survivin在前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中的表达及意义

目的:探讨Survivin在前列腺癌激素非依赖进展中的可能作用。方法:采用流式细胞术测定前列腺癌雄激素依赖型细胞LNCaP和雄激素非依赖型细胞PC-3在雄激素剥夺时的凋亡情况,进而用Western-Blot鉴定这两株细胞中的Survivin表达情况,初步分析其在前列腺癌的激素非依赖存活中的作用。结果:在去雄激素情况下LNCaP凋亡细胞数显著高于PC-3;同时,Western-Blot证实Survivin在PC-3细胞中的表达显著高于LNCaP细胞。结论:Survivin在雄激素依赖型和雄激素非依赖型的前列腺癌细胞中的表达存在差异,而这种差异可能在前列腺癌细胞雄激素缺失时的生存发挥重要作用。     

EGFP-Apoptin融合蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 观察EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位，探讨Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 构建EGFP-Apoptin融合蛋白真核表达载体，用脂质体转染技术将其导入人肝癌细胞株HepG2中，在荧光显微镜下观察Apoptin在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位；用TUNEL法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应。结果 转染细胞中EGFP-Apoptin在肿瘤细胞中得以高表达，转染24h后逐渐从细胞质迁移至细胞核，最后定位于细胞核内。转染4～5d后逐渐诱导肿瘤细胞凋亡。结论 EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中具有核定位效应，并诱导肿瘤细胞凋亡；EGFP-Apoptin可以作为研究Apoptin在肿瘤细胞中分布和亚细胞定位的有效工具，用以探讨Apoptin在体外诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

肮肿瘤药物诱导细胞凋亡的分子机制研究进展

大多数抗肿瘤药物是通过诱导细胞凋亡来发挥它们的抗肿瘤效应,其诱导细胞凋亡的分子机制是由死亡受体依赖型及非依赖型途径介导的,这其中涉及到细胞色素C(Cyt c)的释放及凋亡蛋白酶(caspases)的活化.细胞生存因子(如Akt、HSPs、Survivin和NF-κB等)在信号传导途径中起着重要作用.通过增强促凋亡基因或抑制抗凋亡基因表达可以增强抗肿瘤药物敏感性,从而提高抗肿瘤效应.从分子水平上研究抗肿瘤药物诱导细胞凋亡机制将为新型肿瘤治疗策略的建立提供分子基础.     

内皮素-1对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响

 目的 观察内皮素-1（endothelin-1, ET-1）对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响，并研究其机制。方法 采用人激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3，设对照组、紫杉醇组、紫杉醇＋ET-1组。流式细胞仪测定PC3细胞周期分布和凋亡细胞百分比。免疫沉淀(immunoprecipitation , IP)及Western blot检测PC3细胞Bcl-2、Bax和Bax /Bcl-2异二聚体的表达。结果 紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的G0-G1(%)高于紫杉醇组，G2-M(%)低于紫杉醇组，凋亡细胞百分比低于紫杉醇组，差异有统计学意义（P＜0.05）。紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的Bcl-2磷酸化水平显著低于紫杉醇组，Bax /Bcl-2异二聚体水平显著高于紫杉醇组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ET-1能逆转紫杉醇对PC3细胞的G2/M 期阻滞，并能通过影响Bcl-2磷酸化作用于细胞凋亡通路，减少细胞凋亡，从而降低激素非依赖性前列腺癌PC3细胞对紫杉醇的敏感性。     

中药调控肿瘤细胞凋亡机制研究进展

细胞凋亡的概念是由英国学者Kerr于1972年首先提出，细胞凋亡又称细胞程序性死亡，是有核细胞在生理条件下，通过启动其自身遗传机制，主要通过内源性DNA内切酶的激活发生的自动死亡过程。现代医学研究证实，许多天然药物可以通过干扰肿瘤细胞生长、代谢、增殖等过程，最终诱导触发肿瘤细胞分化发生凋亡。中药诱导肿瘤细胞凋亡是中医药抗肿瘤的分子机制之一。阐明中药诱导肿瘤细胞凋亡的机制有助于医学临床和科研工作的深入，现将近年研究综述如下。     

凋亡素与肿瘤

肿瘤的本质是细胞增殖与凋亡失衡。诱导细胞凋亡将可能治疗肿瘤。来自鸡贫血病毒（CAV）的凋亡(Apoptin)能选择性出现在肿瘤细胞和转化细胞核内，以非p53依赖途径诱导肿瘤细胞凋亡，不被bcl-2过量表达抑制，不杀伤正常细胞，可能为肿瘤诊治提供新的途径。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与白血病的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是TNF超家族新成员。TRAIL能选择性诱导肿瘤细胞凋亡。而对正常细胞无明显毒性作用。故作为一种新型的肿瘤治疗生物制剂，具有良好的临床应用前景。但目前大量研究证明白血病细胞对TRAIL的诱导凋亡作用不敏感，其具体机制是近几年来肿瘤凋亡的研究热点。本文就其耐药机制的最新研究进展进行综述。     

肿瘤细胞TRAIL信号传递途径中抗凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosisinducing ligand，TRAIL）是近年来发现的一种凋亡分子，为Ⅱ型膜蛋白，属于TNF家族成员，能够诱导多种肿瘤细胞与转化细胞发生凋亡，而对正常组织及细胞无凋亡诱导作用。早期认为肿瘤细胞对TRAIL敏感还是耐受，与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。近期研究表明，细胞内凋亡分子与抗凋亡分子的相互作用可能发挥了更重要的作用。现综述TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡途径中的抗凋亡机制。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

姜黄素作为一种传统中药,可抑制多种肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,本文综述了姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

糖皮质激素诱导肿瘤细胞抗凋亡的信号转导通路

糖皮质激素(如地塞米松)对大多数非实体性肿瘤(如淋巴瘤)具有促凋亡和抗增殖的作用而被广泛应用于肿瘤的治疗。另有研究表明,地塞米松联合细胞毒药物治疗实体瘤,可诱导起源于上皮组织的多种恶性肿瘤对化疗药物介导的细胞凋亡产生抵抗而影响疗效。因此,抗肿瘤药物联合糖皮质激素治疗实体肿瘤日渐引起临床工作者的关注。糖皮质激素诱导实体肿瘤细胞抗凋亡的作用与细胞类型有关,其分子机制与功能性糖皮质激素受体介导的细胞信号转导通路相关。现对糖皮质激素诱导肿瘤细胞抗凋亡作用的信号转导通路进行综述。     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子

【目的】鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子，进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制。【方法】在鉴定L-plastin启动子近3’端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上，利用TFSEARCH软件分析该片段的序列，寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子，并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子，利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子，并检测切除该片段序列后荧光素酶活性，研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用。【结果】TFSEARCH软件分析表明在距转录起始点-199-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG，凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3’端序列CAGCTG的转录因子，删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降。【结论】AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。     

miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控

目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响。方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高。抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡。结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关。     

枸杞多糖诱导雄激素不依赖型人前列腺癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能渍导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41．5％，同时PC-3细胞Bcl-2／Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量／效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

小分子化合物S1诱导PC3细胞凋亡的作用

目的：研究小分子化合物8-氧-8H-苊并［1,2-b］吡咯-9-腈的氨基或卤素取代衍生物（S1）对人雄性激素非依赖型前列腺癌PC3细胞的作用及机制。方法：常规培养PC3细胞,分为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05和0.01 μmol•L^-1 S1化合物组,同时设培养肿瘤细胞对照组和抗癌药物环磷酰胺（5.00 μmol•L^-1）对照组,采用MTT法检测PC3细胞增殖抑制率,流式细胞术检测诱导PC3细胞凋亡作用,Caspase 3、8和9试剂盒检测细胞凋亡途径。结果：0.10~10.00 μmol•L^-1 S1化合物组,PC3细胞生长抑制率明显高于环磷酰胺对照组（P<0.01）;5.00和10.00 μmol•L^-1S1化合物组PC3细胞凋亡率明显高于培养肿瘤细胞对照组（P<0.01）;10.00 μmol•L^-1S1化合物作用于PC3细胞后不同时间(1、2、4及6 h)细胞Caspase 3和Caspase 9活性均显著高于培养肿瘤细胞对照组（P<0.01）,Caspase 8活性未见明显改变。结论：S1化合物能够通过诱导PC3细胞凋亡而导致细胞死亡,其作用机制是线粒体途径,进一步证实S1化合物作为肿瘤治疗药物的可行性。     

清热解毒法诱导肿瘤细胞凋亡的研究

论述了肿瘤细胞凋亡的含义，结合清热消积方和单味蛇六谷的实验研究结果，认为清热解毒法诱导肿瘤细胞凋亡及其抗肿瘤作用机制之一。     

利用双向凝胶电泳和质谱技术进行前列腺癌差异蛋白质组学研究

目的 分离前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系差异表达蛋白质,为进一步研究前列腺癌的蛋白组学打下基础. 方法 培养前列腺癌雄激素依赖型(LNCaP)和非依赖型(DU145)细胞系,分别提取两种细胞系的总蛋白,进行等电点聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对所得胶图利用ImageMaster4.01软件进行分析,选取差异点进行质谱分析,对分析结果进行数据库检索. 结果 得到了分辨率和重复性均好的前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系的双向凝胶电泳图谱,每块凝胶上平均蛋白质点数为816±15,通过分析得到3倍差异点41个,完全差异点10个.对完全差异点进行质谱分析和数据库检索得到与差异点相对应的3个蛋白质,其中第83号和175号为未命名蛋白质,第632号蛋白质是KIAA1283蛋白质,具有载脂蛋白功能. 结论 在前列腺癌激素依赖型和激素非依赖型细胞系中存在差异表达蛋白质,并可以利用双向凝胶电泳技术进行分离,为进一步研究前列腺癌的蛋白质组学和发病机制提供了线索.     

鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子

 【目的】鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子，进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制。【方法】在鉴定L-plastin启动子近3’端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上，利用TFSEARCH软件分析该片段的序列，寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子，并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子，利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子，并检测切除该片段序列后荧光素酶活性，研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用。【结果】TFSEARCH软件分析表明在距转录起始点-199-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG，凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3’端序列CAGCTG的转录因子，删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降。【结论】AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。