血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）检测146例慢性丙型肝炎患者抗-HCV和HCVRNA。结果抗-HCV及HCV RNA检出率分别为73．9％（108／146）和52．1％（76／146）；抗-HCV（＋）组和抗-HCV（-）组HCVRNA的检出率分别为75．9％（82／108）和10．5％（4／38）。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据，且可以弥补抗-HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。     

血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQPCR)检测146例慢性丙型肝炎患者抗HCV和HCVRNA。结果抗HCV及HCVRNA检出率分别为73.9%(108/146)和52.1%(76/146);抗HCV(+)组和抗HCV(-)组HCVRNA的检出率分别为75.9%(82/108)和10.5%(4/38)。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据,且可以弥补抗HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。     

动态联合检测抗HCV与HCV—RNA诊断丙型肝炎的意义

自从发现并应用融合蛋白C_(100—3)诊断丙型肝炎以来,多种特异性诊断方法相继应用,但目前临床常用的方法仍为抗HCV及PCR方法检测HCV—RNA,由于丙型肝炎病毒(HCV)在体内复制的阶段性及抗HCV产生较晚,部分患者体内抗HCV水平较低,使上述两种方法的敏感性和特异性受到影响,本文对两种方法进行动态观察,以期阐明各自的变化,指导临床应用。     

逆转录PCR检测丙型肝炎病毒RNA

逆转录ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ王捷，杨太成，江悦华，王晓怀（广州军区总医院医学实验科，５１００１０）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，流行病学研究表明，大约９０％的输血后肝炎均由ＨＣＶ引起，原发性肝癌的发生也与ＨＣＶ感染相关［１］。目前...     

逆转录-半套式-聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA

目的探讨建立一种更简便,更特异灵敏的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)单管法.方法采用蜡隔将RT和PCR扩增2个独立的反应体系在1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来,设计内外引物,优化反应体系及条件,使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成.结果在60例血透析患者血清中,33例(55%)抗-HCV-IgG阳性和27例抗-HCV-IgG阴性血清用单管RT-PCR分别检出28例(85%)和3例(9%)HCV RNA阳性,并对3份阳性PCR产物作核酸序列测定.本方法的检测灵敏度为102拷贝/ml.结论 RT-PCR单管法在保持高灵敏度的前提下,提高了特异性,具有简单高效,杜绝外源性污染等优点.     

丙肝患者血清HCV RNA定量与抗-HCV检测效果分析

丙型肝炎病毒（HCV）感染严重危害人类的健康，自HCV正式命名以来，即成为病毒性肝炎研究的热点之一。HCV呈全球性分布，我国整体人群的流行率约为3％，而其慢性化率高达85％，其中20％患者易发展为肝硬化，且与肝细胞癌的发生密切相关。我们采用实时荧光定量PCR检测丙肝患者血清HCV RNA，并与ELISA夹心法测定抗-HCV的结果相比较，以便更好地监测HCV的感染，并及时进行抗病毒治疗。     

PCR-BHEL技术对血清中HCV RNA的检测

目的比较聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大（PCR-BHEL）技术与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血清中丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）的结果。方法采用PCR-BHEL技术和RT-PCR对65例血清标本的HCVRNA进行检测,并将这两种检测方法的检测结果进行比较,以确定PCR-BHEL技术在检测HCVRNA中的高敏感性。结果38例抗-HCV阳性血清标本经PCR-BHEL技术和RT-PCR检测HCVRNA的检出率分别为84．21％（32／38）和55．26％（21／38）;27例抗-HCV阴性血清标本经PCR-BHEL技术检测HCVRNA的检出率为11．11％（3／27）;而经RT-PCR检测HCVRNA结果均为阴性。两种方法检测HCVRNA结果的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PCR-BHEL技术较RT-PCR的灵敏度高,能够有效地提高HCVRNA的检出率。     

逆转录聚合酶链反应检测血清中丙型肝炎病毒RNA

本文用本所自己合成的引物，对３０份怀疑ＨＣＶ感染血清进行ＨＣＶＲＮＡＲＴ－ＰＣＲ检测。该３０份血清中，２２份抗－ＨＣＶ阳性，其中１８份ＨＣＶＲＮＡ为阳性，８份抗－ＨＣＶ阴性血清及怀疑阳性血清中，２份ＨＶＣＲＮＡ为阳性。结果提示，抗－ＨＣＶ抗体试剂盒用于检测急性ＨＣＶ感染有其不足之处，结合ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ的方法可提高急性ＨＣＶ感染的检出率。     

二重RT—PCR同时检测HGV与HCV RNA

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）具有相近的传播途径与类似的检测方法，本文建立了二重ＲＴ－ＰＣＲ法，用于同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ病毒核酸，其扩增产物分别为６０９ｂｐ与２５７ｂｐ在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的均能安全分离，ＨＧＶ产物经测序显示与报道的核酸序列同源性为８９．２％～９２．６％，该法具较好的批间重复性，二重ＰＣＲ法减轻了实验人员的操作强度，可降低测定费用近５０％，７６例样本检测显示     

荧光定量PCR检测HBVDNA与血清HBV标志物的关系

目的　探讨荧光定量 PCR检测血清 HBVDNA与血清 HBV标志物的关系。方法　采用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量 PCR(FQ- PCR)两种方法同时检测 357份肝炎患者血清 ,并对结果进行对比分析。结果　肝硬化组HBVDNA含量明显低于 HBs Ag携带者组 (P<0 .0 5)。血清 HBs Ag、抗 - HBc、HBe Ag阳性组 HBVDNA含量明显高于HBs Ag、抗 - HBc、抗 - HBe和 HBs Ag、抗 - HBc阳性组 (P<0 .0 1 ) ,而后两组 HBVDNA检出率仍较高。结论　 FQ- PCR可真实反映 HBV感染、复制及病程变化 ,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义     

血友病A患者血制品治疗后HBV和HCV感染指标分析

目的对血友病A患者替代治疗后血液传播乙型、丙型肝炎病毒(HBV、HCV)的感染指标进行检测。方法对经本院确诊的35例血友病A患者采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-HCV、HBV六项指标。结果 35例血友病A患者的抗-HCV阳性率为88.6%,输血次数和输注血液制品为主的种类与患者抗-HCV阳性率有相关性(P<0.01)。HBV六项指标检查,其中5例患者抗-HBe阳性(占14.3%),明显低于抗-HCV阳性率。结论血友病A患者替代治疗输血次数越多,感染风险越大,而较少输注以冷沉淀为主的血液制品的患者,其感染风险相对较小,且目前HCV感染率明显高于HBV感染率。     

血浆丙型肝炎病毒核酸稳定性的研究

目的：建立血浆丙型病毒性肝炎病毒(HCV)核酸的稳定保存方法，提高荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测的准确性。方法：HCV混合血浆以TRIZOL提取病毒核酸，分别保存于70％乙醇溶液及溶解于焦碳酸二乙醇(DEPC)水中。在4℃放置不同时间后，以FQ-PCR检测HCV RNA拷贝数。HCV RNA冻干质控品溶解于DEPC水并提取核酸后同时测定作为对照。另外，对保存的HCV RNA稀释后作线性分析。结果：未提取核酸的病毒血浆及70％乙醇溶液中的HCV RNA在4℃保存8d后，病毒核酸拷贝数无明显改变。HCV RNA DEPC水溶液在4℃放置30min后即发现拷贝数降低,5h后下降为零。质控品测定值无明显降低。在70％乙醇溶液中保存的HCV RNA稀释后测定值具有线性(r=0．9991)。结论：病毒在血浆及70％乙醇溶液中保存，其核酸可以在4℃稳定保存至少8d并具有良好的线性。病毒核酸DEPC水溶液在4℃易发生降解。     

拟输血手术患者混合血清样本丙型肝炎病毒核酸检测分析

目的 探讨不同数量混合血清样本丙肝病毒核酸(HCV RNA)检测在拟输血手术患者中的临床应用.方法 用酶联免疫吸附试验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测单份血清样本抗-HCV,聚合酶链反应技术(polymerase chin reaction,PCR)检测单份血清样本、...     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

目的探讨提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法分别以ＨＣＶ基因组５＇端非编码区（５＇ＵＴＲ）、非结构基因４区（ＮＳ４）及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。结果ＨＣＶ不同基因区（５′ＵＴＲ、ＮＳ４、ＮＳ５ｂ）引物的ＰＣＲ扩增阳性率分别为９２％、６２％、５９％。以双退火温度扩增ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区基因，扩增阳性率分别提高到７７％与７９％。将血清按原血清、１０－１～１０－１０系列稀释后检测，发现２份血清单退火温度ＰＣＲ的检出水平分别为１０－５与１０－７，双退火温度ＰＣＲ检出水平则分别提高至１０－８与１０－９稀释血清。结论５′ＵＴＲ引物对ＨＣＶＲＮＡ的检出率明显高于ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区引物。双退火温度ＰＣＲ可显著提高ＨＣＶＲＮＡ检出的敏感性     

庚型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

分别在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因５′端非编码区（５′－ＵＴＲ）、非结构（ＮＳ）３及区非结构（ＮＳ）５区设计套式引物，建立逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测血清ＨＧＶ ＲＮＡ。在２９９份不同血汪标本中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性者４１例，基于５′－ＵＴＲ、ＮＳ３区及ＮＳ５区引物ＰＣＲ的阳性率分别为８７．８％、８０．５％和９７．６％。本研究结果表明根据中国株ＨＧＶ基因ＮＳ５区部分序列设计引     

肝移植术后丙型肝炎病毒感染

目的：探讨肝移植术后丙型肝炎病毒感染的危险因素及处理对策。方法：回顾性分析2001年4月～2005年2月间，复旦大学附属中山医院15例肝移植术后丙型肝炎病毒感染的临床资料，了解相关危险因素、诊断、治疗及预后情况。结果：15例中9例肝移植术后HCV复发，血清中检测到HCVRNA，和(或)出现病理肝活检组织学改变。3例死亡皆因HCV复发不能控制所致。干扰素-α联合利巴韦林治疗4例，HCVRNA血清滴度在治疗后1周皆明显下降。结论：HCV复发是目前肝移植术后一个普遍而又处理棘手的问题。控制并减少HCV复发的危险因素，早期诊断并进行有效的预防和治疗，是提高丙肝肝移植效果的重要途径。     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.