囊性纤维化跨膜转导调节器在培养人子宫内膜上皮细胞的表达

目的　探讨雌、孕激素对体外培养人子宫内膜腺上皮细胞囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)基因和蛋白质表达的影响。　方法　采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)、原位杂交、免疫组织化学方法检测CFTR mRNA和蛋白质表达量的变化。　结果　RT PCR结果显示单纯雌二醇、雌二醇与孕酮合用、对照组均扩增出特异的 CFTR mRNA条带,孕酮组则未见到;原位杂交结果也证实雌二醇刺激CFTR mRNA的表达(P<0.05),孕酮则抑制CFTR mRNA的表达。免疫组织化学检测子宫内膜腺上皮细胞中CFTR蛋白质含量表明雌二醇显著刺激其生成。　结论　卵巢性激素雌二醇上调、孕酮下调体外培养人子宫内膜腺上皮细胞CFTR mRNA及蛋白质的表达,从而调节月经周期不同时相宫腔液微环境中水与电解质含量,适应不同的生殖阶段。     

雌、孕激素及肝素结合生长因子对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中HOXA10基因表达的调节,探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种方法测定各个条件下Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著提高Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达(P<0.05),同时加RU486后HOXA10基因表达的上调趋势减弱。加HB-EGF刺激48 h后HOXA10基因的表达量增高(P<0.05)。结论雌、孕激素、HB-EGF对HOXA10基因的表达具有上调作用,RU486能够抑制孕激素的上调作用。     

雌、孕激素及肝素结合生长因子对Ishikawa细脆HOXA10基因表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）对Ishikawa细胞中HOXA10基因表达的调节，探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa，按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48h后，采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种方法测定各个条件下Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48h后都可以显著提高Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达（P〈0．05），同时加RU486后HOXA10基因表达的上调趋势减弱。加HBEGF刺激48h后HOXA10基因的表达量增高（P〈0．05）。结论雌、孕激素、HB-EGF对HOXA10基因的表达具有上调作用，RU486能够抑制孕激素的上调作用。     

小剂量米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响

通过口服米非司酮 ( RU486)改变子宫内膜的发育进程 ,观察内膜 H OXA11基因表达量的变化 ,以及与孕酮受体 ( PR)和白血病抑制因子 ( L IF)表达的相互关系。 13例月经周期正常志愿者观察两个周期。于对照周期的分泌中期取内膜。实验周期排卵前或后一次性口服 RU48610 mg,分泌中期取内膜 ,用原位杂交和免疫组织化学方法检测H OXA11、PR及 LIF的表达。结果 :对照周期内膜腺上皮 H OXA11和 PR呈阴性或弱阳性表达。服药后 ,腺上皮 H OXA11和 PR表达强度大多增加 ,而 LIF的表达强度大多下降 ;基质细胞的表达量变化无明显规律。提示 H OXA11基因的表达与孕激素及其受体密切相关 ;分泌中期腺上皮 H OX A11和 PR表达下降或消失是内膜分化成熟的重要标志 ;也是 L IF分泌达高峰的前提。     

大鼠胚泡植入过程中子宫内膜降钙素的动态表达及其与血清雌、孕激素水平的关系

目的　检测子宫内膜在大鼠胚泡植入过程中降钙素的表达规律及其与血清雌、孕激素水平的关系。　方法　取植入前后不同时期的大鼠子宫 ,通过免疫组织化学染色 ,检测降钙素在子宫内膜的表达规律 ,放射免疫学检测各组动物血清孕酮 (P)、雌二醇 (E2 )水平。　结果　孕第 3天 ,降钙素开始在子宫内膜腺上皮细胞呈阳性表达 ;于第 4天达峰值 ,随后迅速下降 ;第 6天腺腔分泌物、表面上皮细胞及蜕膜细胞呈阳性着色 ;第 7天 ,腺上皮细胞的阳性着色基本消失 ,但表面上皮细胞和蜕膜细胞的阳性着色仍然存在。血清P从孕第 2天开始上升 ,第 5天达到高峰 ,此后下降。血清E2 水平在孕第 4天达到高峰 ,随后逐渐下降。　结论　降钙素在子宫内膜细胞表达水平的动态变化与胚泡植入密切相关 ,与血清雌、孕激素水平呈正相关 ;孕第 4天子宫内膜腺上皮中降钙素和血清雌激素水平达峰值是子宫内膜植入接受态的重要标志。     

携带米非司酮可调控β内啡肽基因腺病毒的构建及鉴定

目的 构建携带米非司酮(RU486)可调控β内啡肽(β-EP)基因的腺病毒(Ad-RUNEP).方法 构建携带RU486可调控β-EP基因的腺病毒穿梭质粒pDC312-RUNEP,重组得到Ad-RUNEP后进行扩增,纯化和滴度测定,并分别在载体水平和病毒水平进行验证.Ad-RUNEP感染人皮肤癌上皮A431细胞株24 h后,将A431细胞株随机分为6个不同浓度RU486组(R0～5组),每组5孔,均加入RU486诱导β-EP表达,终浓度分别为0、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L,应用RU486孵育48 h后更换为不含RU486的培养液,于开始RU486孵育的第1天、第2天和第4天取培养液,离心后收集上清液,采用ELISA法测定上清液β-EP浓度.结果 经酶切鉴定表明RU486调控系统与β-EP均正确插入pDC312-RUNEP;Ad-RUNEP病毒滴度为2.25×1010pfu/ml.与R0组比较,R1～5组β-EP浓度升高(P＜0.05);与R4组比较,R1～3组β-EP浓度降低(P＜0.05);与孵育第1天比较,第2天时β-EP浓度升高(P＜0.05);与孵育第2天比较,第4天时β-EP浓度降低(P＜0.05).结论 成功构建了Ad-RUNEP,RU486对Ad-RUNEP合成β-EP具有良好的调控作用.     

HOXA11在人子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及与不育的关系

目的检测HOXA11蛋白在正常月经周期子宫内膜、早孕蜕膜和不明原因不育子宫内膜组织中的表达,探讨HOXA11与不明原因不育及雌孕激素受体(ER、PR)表达的相关性。方法采用免疫组织化学和Western-Blot方法对38例正常子宫内膜、15例早孕蜕膜和19例不明原因不育子宫内膜组织中HOXA11、ER及PR的表达。结果HOXA11蛋白在子宫内膜腺上皮和基质细胞均有表达,以分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜表达量较高;在不育内膜的表达量显著降低(P<0.05);ER、PR在各组表达量的变化与HOXA11相同,即分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜的表达量较高,而在不育内膜的表达量显著下降(P<0.05)。结论HOXA11基因在着床期子宫内膜的分化、发育以及着床后妊娠的维持起一定作用;HOXA11表达量下降与ER、PR表达量降低相关;HOXA11表达下降或缺失可能是女性不明原因不育的原因之一。     

缺氧环境下miR-7851-3p可能通过抑制Wnt8b表达调控子宫内膜腺上皮细胞增殖

目的 探究缺氧环境下影响子宫内膜腺上皮细胞增殖的潜在机制。方法 分别在常氧和缺氧条件下(1%氧浓度)培养子宫内膜腺上皮细胞,提取RNA,高通量测序分析两种状态子宫内膜腺上皮细胞微小RNAs(microRNAs, miRNAs)的差异表达,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)对差异表达的miRNA进行验证;通过Targetscan网站分析差异显著的miRNAs与增殖相关的靶基因,采用Western blot检测Wnt8b蛋白的表达。细胞计数(CCK8)检测正常和缺氧条件下培养子宫内膜腺上皮细胞之间的细胞增殖的情况。结果 miRNA高通量测序结果显示缺氧条件下miR-7851-3p、miR-125a-3p和miR-141-5p等16个miRNAs在子宫内膜腺上皮细胞中表达升高,qPCR检测结果显示缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞的miR-7851-3p的表达显著升高(P<0.001)。靶基因预测结果显示Wnt8b是miR-7851-3p潜在靶基因,而在缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞的Wnt8b蛋白表达降低。CCK8检测结果显示缺氧条件下子宫内膜腺上皮细胞增殖能力降低,尤其在培养36 h时差...     

原位杂交检测HOXA-10基因在人子宫内膜的表达

目的 :探讨正常生育妇女月经周期不同时期子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞中HOXA-1 0基因的表达。方法 :采用原位杂交的方法。结果 :HOXA-1 0基因在子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞均有表达 ;中晚分泌期的表达高于增殖期及分泌早期 ,且间质细胞的表达高于腺上皮细胞。结论 :( 1 ) HOXA-1 0基因在分泌中期子宫内膜高表达提示其可能在人胚胎着床过程中起某种作用。 ( 2 ) HOXA-1 0基因可能在人子宫内膜蜕膜化过程中有重要作用。     

白介素-1β对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及细胞黏附分子-1的影响

目的 研究白介素-1β（IL-1β）对小鼠着床窗口期子宫内膜上皮细胞分泌金属蛋白酶-9（MMP-9）及细胞黏附分子-1（ICAM-1）的影响.方法 离体培养着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞,用IL-1β作为处理因素,通过免疫组织化学SP法对子宫内膜上皮细胞MMP-9、ICAM-1蛋白的表达进行检测.结果 随着IL-1β浓度的增加,原代培养的子宫内膜上皮细胞分泌MMP-9及ICAM-1表达量均呈浓度依赖性升高（P〈0.05）.结论 一定水平的IL-1β可以促进子宫内膜上皮细胞MMP-9及ICAM-1的分泌,有利于胚胎着床.     

雌激素和孕酮对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

目的探讨17β-雌二醇(E2)和孕酮(P)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)mRNA表达和蛋白合成的影响。方法原代培养的HUVECs,分别给予10-6mol／L,血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)单独或合并10-9、10-7、10-5mol／L 17β- E2或P处理细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察TF mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)和双辛丁酸法测定细胞裂解液中TF蛋白浓度。结果 10-6mol／L Ang Ⅱ对HUVECs有明显的损伤作用,内皮细胞TF mRNA表达和蛋白合成均显著增加,10-9mol／L17β-E2明显抑制Ang Ⅱ对内皮细胞TF mRNA表达和蛋白合成的刺激作用,但随着雌激素浓度的增加,抑制作用逐渐减弱;而随着P浓度的增大,增加了Ang Ⅱ刺激内皮细胞TF mRNA表达和TF蛋白合成的作用,加重了对内皮细胞的损伤。结论低剂量的雌激素对内皮细胞有保护作用,随着雌激素浓度的增加,这种保护作用逐渐减弱;低剂量的P对内皮细胞无保护作用,高剂量P对内皮细胞有损伤作用。     

雌、孕激素和肝素结合生长因子对Ishikawa细胞金属蛋白酶组织抑制物-1表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)蛋白表达的调节及其在胚胎种植中的意义。方法体外培养高度分化的子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素与米非司酮(RU486)联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫细胞化学、Western blot两种方法测定各种条件下Ishikawa细胞中MMP-9、TIMP-1蛋白的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著降低Ishikawa细胞中TIMP-1蛋白的表达(P<0．05),同时加RU486后 TIMP-1蛋白的下降趋势减弱。相反,加HB-EGF刺激48 h后TIMP-1蛋白的表达增高(P<0．05)。各种因素处理48 h后, Ishikawa细胞中MMP-9蛋白均没有阳性表达。结论雌、孕激素对TIMP-1蛋白的表达具有下调作用,RU486可抑制孕激素的下调作用;HB-EGF对TIMP-1蛋白的表达具有上调作用;MMP-9蛋白在Ishikawa细胞中无表达。     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响

目的研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进内异症发生发展的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用不同浓度17β-E2处理子宫内膜间质细胞48 h;此后选用10-10mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞12、24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测17β-E2处理前后子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。同法分析雌激素受体拮抗剂ICI182,780(10-6mol/L)对17β-E2促进β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。免疫组织化学染色观察17β-E2作用后β-catenin在子宫内膜间质细胞中的定位。结果17β-E2能明显促进内异症患者在位子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖性,于10-10mol/L作用48 h最明显。雌激素受体拮抗剂ICI182,780能明显抑制17β-E2对子宫内膜间质细胞β-catenin mRNA和蛋白的表达。免疫组织化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在子宫内膜间质细胞核内的表达。结论雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症在位子宫内膜的异位种植。     

人子宫内膜体外构建的实验研究

目的探讨体外构建人子宫内膜的新方法。方法将采用筛网分离法获得的原代人子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞依次接种到自制的液态胶原材料上共培养,形成子宫内膜组织,并与二维条件下正常培养的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞进行比较。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的子宫内膜的组织学特征,以及两种细胞在不同培养条件下的生长和分布情况。结果分离获得的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的纯度分别达到95%和90%。在Ⅰ型液态胶原形成的凝胶内,子宫内膜基质细胞排列紧密,腺上皮细胞呈腺体样结构。结论两种细胞与Ⅰ型液态胶原凝胶复合后构建的子宫内膜具有正常子宫内膜组织的结构。