骨髓有核细胞几种计数方法的比较

骨髓有核细胞的数量是判断骨髓增生程度的重要指标。但到目前为止还没有一种直接计数这些细胞的方法[1 ] 。为了给临床提供更准确、可靠 ,可进行前后结果方法的动态比较 ,我们选用乙二胺四乙酸二钾 (EDTA K2 )抗凝骨髓 ,然后对骨髓有核细胞进行直接定量计数 ,并与其他 3种方法进行比较。表 1 　 三种不同方法对高、中、低值标本骨髓有核细胞测试有关参数方法 高值 xsCV中值 xsCV低值 xsCV方法 2 * 7.47 1.3 2 0 .1762 4.667.87 0 .3 1944 6.0 43 46.5 40 .777方法 3 * * 3 0 1.3 0 2 2 .5 0 0 .0 75 2 17.2 0 2 9.40 0 .13 611.2 0 3 .…     

骨髓有核细胞直接定量计数的实验研究

目的探讨骨髓有核细胞直接定量计数的准确方法。方法选用EDTA-K2抗凝骨髓,稀释20倍后,以血细胞计数池准确计数有核细胞;同时对有核细胞增生程度以高倍镜法进行比较。结果123份EDTA-K2抗凝的骨髓标本有核细胞进行直接定量计数,结果介于6.0～456.0×109/L之间,平均95.3×109/L。低、中、高3份骨髓标本有核细胞直接定量计数法,CV分别为0.096、0.061和0.061;高倍视野法CV分别为0.348、0.136和0.075。123份骨髓有核细胞增生经高倍视野法观察:极度活跃5份、明显活跃33份、活跃52份、减低26份、极度减低7份,各增生梯度之间,采用t检验:t值分别为7.28、3.41、2.56和4.30,差异均具有显著意义。结论选用EDTA-K2抗凝骨髓并进行骨髓有核细胞直接定量计数是必要的也是可行的,该法较目前国内常规方法准确性高、重复性好,便于操作。     

用血细胞计数仪计数法评价骨髓有核细胞增生度

骨髓有核细胞增生度对于各类血液病的诊断、治疗、疗效观察、指导疗法、判断疗效及愈后都有重要意义。特别目前在有核细胞增生度五级法的基础上提出的七级分类法对成熟红细胞与有核细胞比例的计数提出了更高的要求。过     

骨髓有核细胞直接定量计数的实验研究

目的探讨骨髓有核细胞直接定量计数的准确方法.方法选用EDTA-K2抗凝骨髓,稀释20倍后,以血细胞计数池准确计数有核细胞;同时对有核细胞增生程度以高倍镜法进行比较.结果 123份EDTAK2抗凝的骨髓标本有核细胞进行直接定量计数,结果介于6.0～456.0×109/L之间,平均95.3×109/L.低、中、高3份骨髓标本有核细胞直接定量计数法,CV分别为0.096、0.061和0.061:高倍视野法CV分别为0.348、0.136和0.075.123份骨髓有核细胞增生经高倍视野法观察:极度活跃5份、明显活跃33份、活跃52份、减低26份、极度减低7份,各增生梯度之间,采用t检验:t值分别为7.28、3.41、2.56和4.30,差异均具有显著意义.结论 选用EDTA-K2抗凝骨髓并进行骨髓有核细胞直接定量计数是必要的也是可行的,该法较目前国内常规方法准确性高、重复性好,便于操作.     

硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用

为了研究硫化砷（As2S2）在体外对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞增殖的影响，并探讨其可能的作用机制，采用MTT法、流式细胞术、RT-PCR等多参数检测不同浓度As2S2诱导MDS细胞的凋亡。结果表明：①低浓度（0-0．6mg／L）的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用；②相对高浓度的硫化砷（1．5-0mg／L）对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用，且呈时间浓度依赖关系；bcl-2mRNA在As2S2作用后表达明显下调，bcl-2／bax比例明显下降（P〈0．05）；③MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡。结论：MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡；低浓度的硫化砷对MDS细胞没有明显的增殖抑制作用，高浓度的硫化砷主要通过诱导凋亡使MDS细胞死亡．     

骨髓巨核细胞和有核细胞计数的实验报告

目的 为了给确诊血液病及观察其疗效、预后,或判断骨髓移植造血功能恢复提供具有重要意义的骨髓巨核细胞数和有核细胞数定量数据,使该二项检验能为临床提供更准确、重复性更好的信息。方法 采用抗凝骨髓液、定量骨髓涂片、检查全涂片的巨核细胞以达到定量计数巨核细胞,并以传统每张涂片法作对照;以20倍稀释后用血细胞计数池计数的方法,达到定量计数骨髓有核细胞。结果 传统的每张涂片法38张涂片计数结果巨核细胞为299.97±97.27个/张(?±s),变异系数为65.8％;新推荐的骨髓巨核细胞定量计数法34张涂片结果为64.72±17.09/μl(?±s),变异系数为26.4％。114例骨髓有核细胞定量计数结果介于(6.0～456.0)×10~9/L之间((?97.3×10~9/L);三份骨髓有核细胞高、中、低值标本反复分别定量计数30次,变异系数分别为6.1％,6.1％和9.8％。结论 该研究推荐的骨髓巨核细胞和骨髓有核细胞定量计数法,与传统的每张涂片法或成熟红细胞与有核细胞比值及低倍镜估计法比较,具有方法学设计科学合理、重复性好,可提供具体而确切的数据,便于临床动态分析比较;同时还根据定量计数有核细胞的骨髓涂片,提出了一个高倍镜判断有核细胞增生程度的标准,可供必要时选用。     

骨髓增生异常综合征伴骨髓增生程度减低1例

骨髓增生异常综合征（简称MDS）是一种获得性造血功能严重紊乱的造血干细胞异常克隆性疾病。其中约有30％的MDS可演变为白血病,其特点是造血系统多样性增殖异常,这种异常的干细胞克隆以失调和低效的方式分化成熟,导致全血细胞数量的减少及功能形态的异常。多数病例骨髓增生活跃或明显活跃,本病例属于骨髓增生程度减低的MDS,现报道如下：     

骨髓涂片有核细胞量减少的真实性研究

目的研究骨髓涂片有核细胞的假阳性和假阴性减少,提高对涂片评估有核细胞量不足的认识。方法用骨髓穿刺针抽吸髓液涂片272例,随后同步以活检术获取组织块置于载玻片上制成印片,组织块入Bouin液固定,以骨髓印片和切片为对照,评估涂片对检查有核细胞量的价值。结果272例骨髓涂片有核细胞减少和增多级别均显著低于骨髓印片和切片(P<0.05~<0.01)。以印片和切片为对照,124例涂片有核细胞减少中,58.9%和66.1%为假阳性减少,常见误诊疾病为再生障碍性贫血、造血减低;而印片和切片细胞量增加中,涂片仍有26%和36%为假阴性减少,常见疾病或结论为脾功能亢进、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症等;印片和切片细胞减低者中,涂片符合率(91.2%和97.9%),以及涂片细胞增加者中,印片和切片符合率(95%和100%)均高。涂片诊断细胞量真性减少疾病或结论(再生障碍性贫血和造血减低)的假阳性分别为29.0%和37.1%,诊断真性增加疾病(脾功能亢进、特发性血小板增多症、真性红细胞增多症等)假阴性率为22.6%和21.8%,诊断指标性能评价均不佳。结论骨髓涂片评估有核细胞量差,常造成假阳性和假阴性结果,建议将印片作为常规项目以弥补涂片的不足。     

应用DNA微阵列对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞基因表达谱的初步研究

为了探讨应用DNA微阵列研究骨髓增生异常综合征(MDS)的基因表达谱的可行性，将2例患者骨髓单个核细胞RNA各取等量混合后进行逆转录Cy5标记，与Cy3标记的正常对照cDNA混合．与H141微阵列杂交、扫描、软件分析。结果H141s芯片中共点样13484个基因克隆，其中1064个靶克隆是由针对同一基因内不同序列的cDNA片段重复点样至少2次。重复点样检测结果表明：在2张芯片内各自完全一致的分别为625个(58．7％)和630个(59．2％)，而存在完全相反结果的cDNA片段分别有21个(2.0％)和11个(1．0％)。1064个靶克隆中重复点样数据完整且分别在2张芯片内结果一致的共有411个，其中在2张芯片间结果也完全一致的共有400个(97．3％)。2张芯片中MDS与正常对照比较存在差异表达的靶基因分别为1549和1311个，而2张芯片间表达差异一致的靶基因为409个，其中101个基因参与造血调控，主要涉及转录因子、细胞周期调节蛋白、代谢相关基因、表面黏附分子等。结论：DNA微阵列可用于对MDS患者混合标本的表达谱分析，为深入研究MDS的发病分子机理提供线索，但需要进行重复实验以降低微阵列操作过程引起的表达偏差。     

骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞内负调控因子的研究

为研究MDS患者细胞凋亡与骨髓内不同T细胞亚群胞内负调控因子的关系，采用胞内细胞因子染色技术对骨髓内不同亚群T细胞胞内的TNF—α和IFN-γ水平进行检测和分析，用RT—PCR技术测定BMMNC的凋亡基因Fas的mRNA水平。结果表明，MDS患者骨髓内产生TNF-α增多的淋巴细胞为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 细胞，产生IFN-γ增多的为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RA^ 细胞，但均以CD8^ CD45RO^ 细胞为主；MDS患者T淋巴细胞产生的IFN-γ与Fas mRNA存在相关性，而TNF—α与Fas mRNA相关性不强。结论：MDS患者造血微环境中不仅T淋巴细胞亚群失调，而且各亚群分泌负调控因子增多；MDS患者髓内IFN-γ主要来自于T淋巴细胞。     

骨髓有核细胞直接定量计数实验设计的理论探讨

作者曾报道了骨髓有核细胞直接定量计数与传统方法的实验比较及操作程序[1~3],其中仅对方法学作了简单评价,但方法学设计原理未作分析,现就此问题探讨如下,为了便于叙述,将直接计数方法一并简述如下。1骨髓有核细胞直接定量计数法1.1骨髓液的抗凝按常规方法抽取骨髓液0.2~0.5ml     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在恶性血液病骨髓有核细胞的表达及其抗凋亡作用

为探索胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞表面的表达及其与细胞凋亡的关系,收集MDS和AML患者各16例骨髓有核细胞,经离心涂片机制片,用免疫酶标记方法(APAAP)及TdT凋亡检测(TUNEL)法先后在同一标本上检测IGF-IR表达和凋亡信号,并以16名正常人骨髓有核细胞作对照.结果显示①MDS组骨髓细胞IGF-IR表达[(56.8±14.3)%]高于正常对照[(40.4±9.6)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞IGF-IR表达[(86.8±13.8)%]高于正常对照(P＜0.01),AML骨髓细胞IGF-IR表达高于MDS骨髓细胞(P＜0.01);②MDS组骨髓细胞凋亡率为[(5.4±3.0)%]高于正常对照[(1.2±0.9)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞凋亡率为[(0.3±0.4)%]低于正常对照(P＜0.01),MDS组细胞凋亡率明显高于AML组(P＜0.01);③细胞凋亡主要发生在IGF-IR阴性细胞[(9.0±4.8)%],IGF-IR阳性细胞中凋亡细胞仅占[(1.4±2.4)%](P＜0.01),IGF-IR表达与细胞凋亡呈负相关(r=-0.852;P＜0.01);④MDS骨髓细胞IGF-IR表达阳性率RAEB/RAEB-t/CMML组高于RA/RAS组,分别为(64.1±3.2)%和(53.5±16.2)%,但差异无显著性,细胞凋亡率RAEB/RAEB-t/CMML组低于RA/RAS组,分别为(3.1±2.1)%和(6.4±2.8)%,(P＜0.05);⑤MDS和AML中IGF-IR阳性率与原始细胞百分比存在明显的正相关(r=0.677;P＜0.01).结论MDS和AML造血细胞过度表达IGF-IR.IGF-IR表达增高可能预示造血细胞的恶性增殖倾向并通过某种途径抑制细胞凋亡.如果能证实此点,则抗IGF-IR治疗有希望成为治疗MDS和AML的新方法.     

正常成人骨髓巨核细胞和其他有核细胞分类计数报告

目的　进一步探讨正常成人骨髓巨核细胞和其他有核细胞分类计数的参考值。方法　骨髓液用EDTA K2液抗凝 ,吸取 5 μl制成约 2× 3 5或 2 5× 3cm( 7cm2 )的厚薄涂片 ,用光镜分类计数全片巨核细胞换算成涂片单位面积 ,其他有核细胞计数 5 0 0只换算成百分比。结果　巨核细胞在一个单位面积 ( 1 5× 3cm ,4 5cm2 )中为 17～ 10 2( 5 1 0 0± 2 6 2 5 )只 ,习惯涂片多数面积 ( 7cm2 )为 2 6～ 16 6 ( 79 12± 4 0 83)只和每 1μl为 5～ 33只。粒系细胞总数为 4 5 8～ 6 0 2 ( 5 4 0 8± 4 5 0 ) % ,有核红细胞为 17 0～ 33 2 ( 2 5 4 6± 4 6 4 ) % ,粒红比值为 1 4～ 3 4∶1( 2 19± 0 5 7∶1)。结论　积累正常人骨髓巨核细胞和其他有核细胞参考值有助于提高细胞形态学的正确分析和诊断     

骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞中基因转录态势的研究

我们试图应用骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓单个核细胞（MNC）和正常对照骨髓细胞的RNA逆转成的cDNA与cDNA基因芯片杂交，检测出MDS细胞的特异性转录态势，从中选出MDS特异性表达的某些基因，加以证实，为MDS的诊断提供可能的分子标志。     

两种分离人骨髓单个核细胞方法的比较

目的:探讨外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗骨髓单个核细胞最佳的分离方法.方法:行自体骨髓移植外周动脉性疾病患者39例,分别采取羟乙基淀粉沉淀法和密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,观察骨髓丢失的单个核计数及CD34+细胞比率的差异.结果:羟乙基淀粉沉淀法得到的分离物的单个核细胞及CD34+细胞丢失率低于密度梯度离心法[羟乙基淀粉沉淀法为(55.08±6.00)%,(54.71±7.58)%;密度梯度离心法为(82.38±4.79)%,(73.30±3.68)%,P<0.01].结论:经比较,羟乙基淀粉沉淀法明显优于密度梯度离心法,在外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗中建议使用羟乙基淀粉沉淀法分离骨髓单个核细胞.     

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征肖志坚郝玉书骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一组起源于髓系定向干细胞或多能造血干细胞的异质性克隆性疾患［１］，主要特征是无效造血和高危演变为急性髓系白血病（ＡＭＬ）。近年不少作者研究了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）与ＭＤＳ的...     

巨幼细胞性贫血及骨髓增生异常综合征病态巨核细胞和多小核巨核细胞核象的观察

巨幼细胞性贫血（简称MA）及骨髓增生异常综合征（简称MDS）病人骨髓象均可见病态造血现象,如多小核巨核细胞作为分化较好的病态巨核细胞均可在这两病中出现,但我们发现在病态巨核细胞的类型和多小核巨核细胞核象的变化上,各有特征和不同.现将我们观察的结果作一报告.     

增生性贫血患儿骨髓单个核细胞转铁蛋白受体2表达情况及其意义探讨

本研究旨在探讨增生性贫血患儿骨髓单个核细胞转铁蛋白受体2(transferrin receptor 2,TfR2)表达情况,分析TfR2 mRNA表达水平与贫血程度、骨髓红系增生程度、基础疾病种类和铁状况等指标的相关关系,评价TfR2受体蛋白在红系造血方面的作用和在增生性贫血诊断方面的应用价值。实验分为两组:实验组系我院儿童血液肿瘤科收治的40例增生性贫血患者,对照组系经骨髓检查排除红系疾病和血液系恶性肿瘤的10例患者。收集研究对象的骨髓抗凝标本,采用荧光定量PCR检测增生性贫血患儿骨髓单个核细胞TfR2 mRNA表达水平,分析其与骨髓增生程度、原发疾病种类以及机体铁状况的关系。结果表明,增生性贫血组骨髓单个核细胞TfR2相对表达量显著高于对照组;增生性贫血组TfR2相对表达量与外周血Hb含量呈负相关关系(rs=-0.715),而与骨髓幼红细胞比例呈正相关关系(rs=0.533)。结论:增生性贫血患者TfR2表达水平增高,与骨髓增生程度、外周血贫血程度密切相关。