黑色普氏菌对人血红蛋白的利用和结合

目的：观察黑色普氏菌能否利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合。方法：将黑色普氏菌接种于含有各种浓度血红蛋白的TSB－联吡啶培养基中，厌氧培养，分光光度计监测细菌生长。采用斑点印迹法观察黑色普氏菌能否与人血红蛋白结合。结果：人血红蛋白能够浓度依赖性地促进黑色普氏菌的生长，黑色普氏菌能够与人血红蛋白结合，其结合强度受pH影响，pH=5时结合能力最强。结论：黑色普氏菌能够有效地利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合。     

可溶性CD14基因在COS-7细胞的表达

目的 :构建重组可溶性CD14真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将可溶性CD14基因定向克隆入真核表达质粒载体 pcDNA3.1+;DEAE -葡聚糖法转染COS - 7细胞 ,72h收集培养上清 ,Westernblot鉴定表达产物 ,ELISA检测表达水平。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;SDS -PAGE显示转染细胞可表达一分子量 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)的蛋白 ;Westernblot显示 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)处有免疫阳性蛋白带 ;ELISA检测表明 :转染 72h目的蛋白可达 2 .1μg/mL。 结论 :重组可溶性CD14基因可以在COS - 7细胞获得瞬时高效表达     

牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与福赛斯类杆菌表面蛋白间相互结合机制

目的 :探讨牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA与福赛斯类杆菌相互结合的机制。方法 :将福赛斯类杆菌ATCC 4 30 37全菌蛋白经室温、DTT和加热处理 ,SDS -PAGE梯度胶电泳 ,采用Western -blot技术检测其与牙龈卟啉单胞菌全菌蛋白及其菌毛FimA之间相互作用的表面蛋白分子。结果 :福赛斯类杆菌与牙龈卟啉单胞菌菌体蛋白相互结合的蛋白Mr分别为 36× 10 3 、2 1.9× 10 3 、7.4× 10 3 ;牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与Mr为 36×10 3 的福赛斯类杆菌菌体蛋白发生结合 ,且福赛斯类杆菌菌体蛋白变性不影响两者间结合。结论 :牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA能与福赛斯类杆菌菌体蛋白相互结合 ,两者结合为碳水化合物 -蛋白质凝集素样机制。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 :在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因 (glucanbindingproteinB ,gbpB) ,并对重组蛋白进行初步纯化 ,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础。方法 :将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体 pPROEXTMHTb ,构建表达质粒 pPROEXTMHTb - gbpB ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌经IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白条带 ,相对分子量 (Mr)为 4 .5～ 5 .0× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度较高的重组葡聚糖结合蛋白B。结论 :获得Mr为 4 .5～ 5 .0× 10 3 的重组葡聚糖结合蛋白B     

茶多酚对牙周主要病原菌的体外抗菌活性研究

目的　探讨茶多酚对牙周主要病原菌的抗菌活性。方法　采用琼脂稀释法药物敏感试验,测定茶多酚对牙周主要病原菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果　茶多酚对99株牙周主要病原菌均有明显的抗菌作用,对牙龈卟啉单胞菌的MIC50 、MIC90 为2 5 0mg/L ,对中间普氏菌的MIC50 、MIC90 为5 0 0mg/L ,对产黑色素普氏菌、具核梭杆菌和生痰二氧化碳噬纤维菌的MIC50为5 0 0mg/L ,MIC90 为10 0 0mg/L。本实验中1×10 6CFU/ml与1×10 8CFU/ml细菌接种密度对茶多酚的MIC值无明显影响。结论　茶多酚对牙周主要病原菌具有抗菌活性。     

氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响

目的　了解氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响。方法　对人牙乳头细胞体外培养 ,分别给予 0 .0 g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L、2 5 .0× 10 -6g/L氟处理 ,采用Westernblot方法分析氟对细胞培养外I型胶原的影响。结果　体外培养的人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原可以分泌Ⅰ型胶原。 0 .0g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L氟对细胞外Ⅰ型胶原量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;2 5 .0× 10 -6g/L氟处理组细胞外I型胶原量较其它组高 (P <0 .0 5 )。结论　过量氟可能抑制细胞外I型胶原降解     

糖尿病患者牙周炎治疗后血清肿瘤坏死因子α和糖化血红蛋白的变化

目的　探讨牙周基础治疗对Ⅱ型糖尿病伴牙周炎患者的影响及其影响机制。方法选择 15例Ⅱ型糖尿病伴牙周炎患者 ,于牙周基础治疗前、后的 4～ 6周分别检测其体重指数、牙龈出血指数、探诊深度、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯和血清肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor alpha ,TNF α)的水平。 结果　除体重指数和总胆固醇无显著变化外 (P >0 0 5 ) ,其余各项临床及血清学指标均显著降低 ,治疗后与治疗前相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。其中 ,龈沟出血指数由(3 6 0± 0 5 1)降至 (1 6 7± 0 6 2 ) ,探诊深度由 (5 73± 1 16 )降至 (2 6 0± 0 83)。糖化血红蛋白由(9 78± 1 4 9) %降至 (8 4 1± 0 82 ) % ,甘油三酯由 (1 78± 0 5 2 )mmol/L降至 (1 38± 0 31)mmol/L ,TNF α由 (12 74± 3 95 )ng/L降至 (9 6 8± 2 5 2 )ng/L。 结论　对于Ⅱ型糖尿病伴牙周炎患者 ,牙周基础治疗可能通过降低患者血清TNF α的含量 ,降低其糖化血红蛋白的水平     

急性牙髓炎牙髓血白细胞总数的临床研究

牙髓血白细胞总数及其与全身周围血白细胞总数间的关系,很少有学者进行过报道。本组随机抽取门诊急性牙髓炎开髓引流患牙2 0个,年龄18～2 5岁,男13例,女7例。磨牙17个,前磨牙3个。在严格隔湿下,检查已开髓引流患牙的牙髓血白细胞总数,同时检查该患者全身周围血白细胞总数。结果:急性牙髓炎牙髓血白细胞总数最低值为2 .6×10 9/L ,最高值为5 .0×10 9/L ,均值为3.10 5×10 9/L。全身周围血白细胞总数最低值为4 .1×10 9/L ,最高值为11.6×10 9/L ,均值为7.0 75×10 9/L。急性牙髓炎牙髓血白细胞总数和均值低于全身周围血白细胞总数和均值…     

2×4矫治技术结合垫矫治替牙期前牙反

目的　探讨 2× 4技术结合磨牙牙合垫矫治替牙期前牙反牙合的效果及特点。方法　通过对 2 5例 7～ 11岁替牙期前牙反牙合患儿采用 2× 4技术结合磨牙牙合垫矫治 ,观察治疗前后颅面硬组织X线测量值的变化。结果　SNA角增加 1 87°,ANB角增加 2 82°,U1-NA角增加 2 6 1°;SNB角减少 1 13°,L1-NB角减少 1 2 4°,MP -SN角减少 1 14° ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　 2× 4技术结合磨牙牙合垫能有效地调整上下颌矢状方向的生长 ,是矫治替牙期前牙反牙合的有效方法。     

白血病患儿的拔牙问题

我科自 1997年起开展对白血病患儿的拔牙工作 ,本文对白血病患儿的拔牙问题进行总结和讨论。一、临床资料本组 2 7例患儿中 ,血液科收治的白血病化疗期患儿需要拔牙者 7例 ,门诊白血病缓解期患儿需要拔牙者 2 0例。其中男性 19例 ,女性 8例 ,年龄 5～ 12岁。急性淋巴细胞性白血病 2 2例 ,处于化疗期 7例 ,缓解期 15例 ;急性非淋巴细胞性白血病 5例 ,均为缓解期。残冠 4例 ,残根 3例 ,滞留乳牙 2 0例。适应症 :①精神状态良好。②血象 :白细胞 3.0× 10 9/Ｌ～ 10× 10 9/Ｌ。红细胞 3.0× 10 12 /Ｌ～ 5 .5× 10 12 /Ｌ。血小板90× 10 9/Ｌ…     

Characterization of binding and utilization of hemoglobin by Prevotella nigrescens

The ability of Prevotella nigrescens to utilize and bind to hemoglobin was investigated. Growth studies showed that P. nigrescens was able to utilize hemoglobin efficiently as an iron source. Binding of P. nigrescens to hemoglobin was demonstrated by dot blot assay. Heat and trypsin treatments of the bacteria led to a decrease in activity. Globin gave nearly complete inhibition of activity. Additionally, lactoferrin partially inhibited activity. In contrast, transferrin, cytochrome C and catalase exerted little or no inhibitory effect. Although the sugars tested did not affect activity, several of the amino acids tested, including arginine, cysteine, histidine and lysine, inhibited activity. In a solid phase assay, 41-, 56- and 59-kDa proteins of P. nigrescens reacted with hemoglobin. These results suggest that P. nigrescens utilizes hemoglobin for growth and 41-, 56- and 59-kDa proteins may be involved in hemoglobin binding.     

人牙本质涎蛋白的抗体制备和组织表达研究

目的制备人牙本质涎蛋白抗体,观察其在不同组织的表达情况.方法用原核表达并经过初步纯化的人牙本质涎蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗血清并用Western blot法测定效价和检测牙胚和其它组织的蛋白表达.结果抗人牙本质涎蛋白抗血清效价可达1100000;Western blot显示牙本质涎蛋白在人牙胚中有表达,其分子量约为Mr 60×103左右.结论牙本质涎蛋白在人牙胚组织中有表达,提示其在牙齿发生、牙本质修复和再矿化中可能起重要作用.     

细胞角蛋白在口腔扁平苔藓中表达的电泳研究

目的：研究口腔扁平苔藓（OLP）中细胞角蛋白（CK）的表达。方法：采用SDS—PAGE、Westernblot法检测15例OLP颊部病变和正常黏膜中细胞角蛋白的表达情况。结果：OLP组与对照组均出现CK1的表达，OLP组中CK2、CK4、CK5表达降低。结论：①．OLP时上皮分化产生CK1使上皮角化增厚，增强颊黏膜的抵抗性。②．OLP中CK2、CK4、CK5的异常表达分别与OLP的异常角化、基底细胞液化坏死有关。     

矫治力对兔牙周组织中Akt蛋白表达的影响

目的 探讨矫治力对兔牙周组织中Akt蛋白表达的影响。方法 选用24只日本大耳白兔建立正畸牙移动的动物模型,将实验动物上颌右侧戴矫治器,作为实验组;左侧未戴矫治器,作为对照组。分别在戴矫治器后3、5、7、14d各处死6只实验动物。用Western blot免疫印迹分析方法 对Akt蛋白表达的变化进行检测。结果 Western blot免疫印迹结果显示,加力3d后牙周组织中Akt蛋白表达增强,7d后牙周组织中Akt蛋白明显增强,随后缓慢下降,与对照侧相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 矫治力作用下兔牙周组织中Akt蛋白的表达变化明显,提示Akt参与牙周组织改建。     

口腔粘膜组织中HPV16DNA和空泡细胞关系的研究

本研究采用斑点杂交技术，检测８３例口腔扁平苔藓、口腔白斑、口腔鳞癌及正常口腔粘膜组织中的ＨＰＶ１６ ＤＮＡ，并分析ＨＰＶ１６ ＤＮＡ与空泡细胞出现的关系。口腔粘膜组织ＨＰＶ１６ ＤＮＡ的检出率为１０．８％，空泡细胞的检出率为３４．９％。两者均阳性的检出率为７．２％，结果提示空泡细胞不是ＨＰＶ感染所特有的，不能作为诊断ＨＰＶ的特征性指标。     

伴放线放线杆菌全染色体DNA探针的制备和鉴定

本研究的目的是制备伴放线放线杆菌全染色DNA探针,并评价其特异性和敏感性。抽提标准菌株Aa Y4 DNA,经~(32)P标记后制成探针,然后用斑点杂交法鉴定探针性质。结果Aa全染色体DNA探针的灵敏性为8×10~2纯菌或1ng同源DNA,探针与口腔常见菌的杂交显示仅与嗜沫嗜血杆菌有较弱的交叉反应。提示~(32)P标记Aa全染色体DNA探针的敏感性、特异性均较高,且方便实用,有临床推广应用价值。     

Dot blot hybridization in detection of human papillomavirus (HPV) infections in the oral cavity of women with genital HPV infections

The presence of human papillomavirus (HPV) types 2, 6, 7, 11, 13 and 16 DNA in cytologic scrapings of oral mucosa was studied in 309 women with genital HPV infections. The objective was to test the usefulness of oral mucosal scrapings (3 sequential swabs) in HPV DNA detection by dot blot hybridization. Based on hybridization with the 32P-labelled Alu-repeat probe, most samples contained more than 10(5) cells, which is an adequate number of cells for dot blot hybridization. Hybridization with 32P-labelled HPV DNA probes showed that 3.8% of the 309 women had an oral HPV infection. Of these, only 2 had clinical lesions indicative of HPV. All other oral HPV positive subjects had clinically healthy mucosa. HPV 6 was the most common (3.1%) type, followed by HPV 11 and 16 (1.1%). In 3 cases the genital mucosa harboured the same HPV type as found in the oral cavity. The results indicate that oral mucosal scraping results in adequate number of cells for dot blot hybridization with HPV DNA. Although the method is likely to result in an underestimation of latent and subclinical HPV infections, it is useful for studying the clinical HPV infections as well as other viral infections known to be present in exfoliated cells.     

小鼠cbfa1多克隆抗体制备及在骨和牙胚中的表达

目的　制备cbfa1多克隆抗体并进行鉴定和效价分析 ,观察其在骨和牙胚中的表达情况。方法　用自制的融合蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ,提取小鼠牙胚、颅骨和肝脏组织的总蛋白进行westernblot ,同时采用免疫组化染色观察其组织表达特性。结果　cbfa1蛋白在小鼠颅骨和牙胚组织中均有表达 ,在人骨肉瘤细胞系中呈强阳性表达。在免疫组化和westernblot的有效作用滴度分别为 1:40 0和 1:10 0 0。结论　成功地制备了兔抗小鼠cbfa1多克隆抗体