超广谱β—内酰胺酶的研究进展

产生超广谱β-内酰胺酶是大多数细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要机制。笔对超广谱β-内酰胺酶的产生机制、分类、检测方法、耐药谱及其主要的产生菌种等研究进展进行了综述。     

超广谱β-内酰胺酶的检测方法及其应用

[目的]比较三种方法检测从临床感染病人标本中分离的产超广谱β-内酰胺酶菌株的敏感性,以建立有效和实用的方法检测超广谱β-内酰胺酶。[方法]以头孢泊肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南为指示底物,用纸片扩散初筛法,纸片相邻协同法和Etest法,并用双纸片增效试验法确证,检测312株革兰阴性菌中ESBLs产生情况。[结果]在312株实验菌中纸片筛选法检出43株,检出率13．8％,纸片相邻协同法检出48株,检出率15．4％,Etest法检出47株,检出率15．1％,双纸片增效确证试验检出51株为：ESBLs菌株。[结论]纸片相邻协同法操作简便、价格低廉,且敏感性好,检出率高,值得一般实验室推广应用。且头孢噻肟为检测ESBLs菌株最佳指示底物。     

超广谱β内酰胺酶的检测及耐药性

研究产超广谱 β内酰胺酶 (ＥＳＢＬｓ)细菌的检测及耐药性 ,对指导临床用药方面具有重要的意义。我们重点比较了3种ＥＳＢＬｓ的检测方法 ,分析了 37株产ＥＳＢＬｓ细菌的耐药性 ,报告如下。一、材料和方法1 菌株 :系 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 1年 6月 ,从门诊和住院患者的尿、痰、脓等标本中分离。大肠埃希菌 2 32株 ;肺炎克雷伯菌 58株 ,产酸克雷伯菌 38株 ;阴沟肠杆菌 2 1株 ,产气肠杆菌 1 2株 ,板崎肠杆菌和聚团肠杆菌各 1株。质控菌株 :大肠埃希菌ＡＴＣＣ2 592 2 (阴性对照 ) ,肺炎克雷伯菌ＧＹ2 0 0 0 (阳性对照 ) ,均由杭州天和微生…     

超广谱β—内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的 了解超广谱β内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）细菌的检测及耐一的情况,以利于对ＥＳＢＬｓ的监控和治疗。方法 用ＮＣＣＬＳ推荐的初筛和确证实验及双纸片协同实验、Ｅ －ｔｅｓｔ、 Ｖｉｔｅｋ３２型全自动分析系统药敏检测卡ＧＮＳ－ＮＴ对１６０株大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌进行ＥＳＢＬｓ的鉴定,并检测确证ＥＳＢＬｓ阳性菌株的药敏情况。结果 共检出ＥＬＳＬｓ菌株３３株,双纸片协同实验、Ｅ－ｔｅｓｔ、ＧＮＳ－ＮＧ三者     

超广谱内酰胺酶研究进展

超广谱β-内酰胺酶(extended specturn β-lactamerses,ESBLs)是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,且能被克拉维酸抑制。ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生,以     

超广谱β—内酰胺酶常用检测方法的评价

目的 对三种常用超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）测定方法进行评价。方法 采用纸片扩散法、双纸片增效试验、双纸片协同试验三种方法测定３０株ＥＳＢＬｓ阳性和５０株ＥＳＢＬｓ阴性的革兰氏阴性杆菌及临床分离的６５株革兰氏阴性杆菌产ＥＳＢＬｓ情况。结果 纸和扩散法、双纸片增效试验、双纸片协同试验三种方法敏感性分别为９３．３％、８６．７％、９３．３％,特异性分别为９０．０％、１００．０％、１００．０％,临床分     

β内酰胺酶的研究新进展

产生 β内酰胺酶是革兰阴性杆菌对 β内酰胺类抗生素耐药的最重要机制。β内酰胺酶可水解 β内酰胺类抗生素的β内酰胺环 ,使其丧失抗菌活性。β内酰胺酶在青霉素应用于临床前就已经存在。 2 0世纪 60年代 ,希腊一株临床分离的大肠杆菌中发现了第一个质粒介导的 β 内酰胺酶 (ＴＥＭ 1 )。随后ＴＥＭ 1蔓延到世界各地 ,肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌和淋球菌等多种细菌中均检测出了ＴＥＭ 1。此后 2 0年中 ,人类研制了许多耐 β内酰胺酶的新β 内酰胺类抗生素。但每种新 β 内酰胺类抗生素应用于临床不久 ,细菌就会产生一种新的…     

革兰阴性杆菌超广谱β内酰胺酶检测与耐药性分析

随着广谱抗生素在临床普遍应用，尤其是近年来三代头孢菌素的广泛使用，使革兰阴性杆菌(主要为肠杆菌科细菌)产生了ESBLs，此酶能水解所有青霉素类，第一、二、三代和部分第四代头孢菌素以及单环氨曲南类，给临床治疗带来了很大困难，因此ESBLs的检测对于指导临床治疗，控制院内感染的传播具有重要意义，本文就我院2003年3月—2004年3月，对于临床标本所分离的革兰阴性杆菌ESBLs检测与耐药性结果作了统计分析，现报道如下：     

超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的了解超广谱β内酰胺酶(ESBLS)细菌的检测及耐药性的情况,以利于对ESBLS的监控和治疗.方法用NCCLS推荐的初筛和确证实验及双纸片协同实验、E-test、Vitek 32型全自动分析系统药敏检测卡GNS-NT对160株大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌进行ESBLS的鉴定,并检测确证ESBLS阳性菌株的药敏情况.结果共检出ESBLS菌株33株,双纸片协同实验、E-test、GNS-NT三者的灵敏度各为84.8%、87.9%、93.9%,特异性均为100%.亚胺配能、头孢西丁、阿米卡星、舒普深对ESBLS敏感率分为96%、88%、84%,84%. 结论除NCCLS推荐的确证试验外,Vitek 32型全自动分析系统药敏检测卡GNS-NT卡检出ESBLS最为敏感.亚胺配能、头孢西丁、阿米卡星是对ESBLS进行临床治疗的首选药物.     

239株革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的：检测超广谱β—内酰胺酶(extended spectrum β-lactamases,ESBLs)在革兰阴性杆菌中的表达及耐药特点，为临床积累经验。方法：应用双纸片协同试验和确证试验对239株革兰阴性杆菌进行ESBLs检测，同时分析药敏结果。结果：239株革兰阴性杆菌中ESBLs的检出率为20．5％(49／239)，其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、其他菌种的检出率分别为23．3％(21／90)、33．3％(8／24)、16．0％(20／125)。产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌菌株对青霉素类、第三代头抱菌素、β—内酰胺酶抑制药、β—内酰胺类、氨基糖苷类的耐药率分别为100％，57％～95％、19％～71％、0～90％、38％～90％，其中耐药率最低的为β—内酰胺类的亚胺培南-西司他丁(0)、β—内酰胺酶抑制药的哌拉西林-三唑巴坦(19％)和氨基糖香类的阿米卡星(38％)。结论：不仅大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌可产ESBLs，其他革兰阴性杆菌也可产ESBLs；对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌感染的治疗可首选亚胺培南-西司他丁。     

在中国首次检出CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶基因

目的探讨湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)的检出率及其基因型。方法采用多重PCR法对产ES- BLs的142株临床分离的肠杆菌进行CTX-M酶基因检测,然后用组特异性引物对CTX-M酶整个开放阅读框进行扩增,PCR产物测序并确定其基因型。结果湖南地区中南大学三所附属医院肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs检出率为76.8%(109/142):对109株产CTX-M型ESBLs肠杆菌科细菌进行特异性PCR扩增,进行分组,发现CTX-M-1组48株,CTX-M-9组48株,另外13株可能属于CTX-M-2组和CTX-M-8组。根据不同病室不同菌株来源,共测序25株,组特异性PCR产物测序后发现有三种基因型,分别为CTX-M-15型、CTX-M-3型和CTX-M-14型。其中CTX-M-15型6株,CTX-M-3型7株,CTX-M-14型11株。结论本地区CTX-M型ESBLs检出率较高,共检出三种CTX-M酶基因型,并且CTX-M-15型ESBLs是在国内首次被发现。     

聚合酶链反应检测SEN病毒D亚型方法的建立

目的：研究建立SEN病毒D亚型（SENV－D）聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法：选择SENV－D开放读码框1高度保守序列，设计合成2对特异性引物，建立检测SENV－D感染的套式PCR方法。对327例无偿献血和职业献血者进行SENV感染的检测，并对部分PCR阳性产物进行克隆测序，结果：该方法特异性和灵敏度均较高，检测结果显示无偿献血人群SENV－D感染率为5．5％，职业献血人群为6．7％，两者无统计学差异，结论：我国广东部分地区无偿献血和职业献血人群中存在SENV－D亚型感染；建立的该方法适用于SENV感染的检测。     

逆转录套式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒

目的建立敏感、特异的逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，以检测中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染。方法根据中国人感染ＨＧＶ者ＮＳ５区部分核苷酸序列分析结果，设计套式ＰＣＲ引物，用于ＨＧＶＲＮＡ的检测，并与用国外报道引物所作的一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检测结果进行比较。结果共检测标本１３３份。以国外报道引物作一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检出率分别为８．３％和１１．３％，作者建立的套式ＰＣＲ检出率为１８．０％，对部分ＰＣＲ产物进行序列分析证实为ＨＧＶ特异性基因。结论建立的方法可在中国人群中显著提高ＨＧＶＲＮＡ检出率。     

多重聚合酶链反应在肺炎链球菌血清学分型中的应用

肺炎链球菌是儿科感染中常见的病原菌之一。基于荚膜多糖抗原的特点,传统荚膜肿胀实验可将肺炎链球菌分为46个血清群,90多种血清型。近年来随着分子生物学技术的发展,多重聚合酶链反应(MPPCR)技术不断成熟并逐步代替常规的荚膜肿胀实验,用于血清学分型。该技术具有简便快速、成本相对较低等优点,能有效的监测临床上肺炎链球菌流行血清型。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因型

目的建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１１３名健康人ａｐｏＥ基因型，频率分别为ε３／３６９．０％，ε３／２１６．８％，ε４／３１１．５％，ε４／２１．８％，ε４／４０．９％；ε２、ε３和ε４等位基因频率分别是９．３％、８３．２％和７．５％。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查     

自身引物菌落聚合酶链反应筛选LoxP序列重组阳性克隆

目的 研究LoxP序列小片段重组阳性克隆的筛选和鉴定方法。方法 采用合成的LoxP为上游引物，载体互补的序列为下游引物，直接以菌落为模板进行聚合酶链反应(PCR)，电泳分离出784bp的条带者为阳性；PCR阳性克隆再用酶切法进行对比鉴定及DNA测序分析确证。结果 用菌落PCR法随机筛选的6个菌落中3个为阳性，随机取1个阳性克隆进行DNA序列分析，证实含有LoxP插入序列。用酶切法对此3个阳性克隆进行鉴定，3个克隆和未进行酶切的对照均出现100bp以下模糊带，结果不能判断。结论 自身引物菌落PCR法用于筛选和鉴定LoxP序列重组阳性克隆是一种快速、简便、经济、高效的方法。     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

聚合酶链反应检测SEN病毒的方法学探讨

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增SEN病毒(SENV)核酸的优化条件。方法将标本分别以Acupure DNA／RNA提取法(方法1)、SDS-蛋白酶K方法(方法2)及裂解液提取’兀V核酸法(方法3)抽提SENV DNA模板，并用3组针对SENV DNA不同区的引物进行扩增，比较不同模板提取方法、不同扩增引物及不同体积标本对SENV DNA检出率的影响。结果在191份血清中，方法1、方法2和方法3提取核酸后可分别检测出15份、9份和7份。采用方法1提取SENV DNA的基础上，采用2组套式引物分别扩增出15份和11份，一次PCR引物仅检出2份SENV DNA阳性标本；应用引物2扩增至少需要50μl血清。结论不同引物扩增方法和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素。     

聚合酶链反应技术诊断苯丙酮尿症

为早期确诊，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶（ＥＣＯＲＩ、ＥＣＯＲＶ）方法，对初筛出具有高度苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可能的６例患儿，行苯丙氨酸羟化酶基因分析。结果确诊３例，还为其中１例患儿母亲再次妊娠的胎儿作产前ＰＣＲ检测，鉴定出与ＰＫＵ致病基因相连锁的遗传特异片段，据此诊断出胎儿为杂合子，并经随访证实。应用ＰＣＲ技术对ＰＫＵ患儿早期诊断乃至产前诊断是可靠且可行的。     

布鲁氏菌多重聚合酶链反应鉴定研究

目的　在同一体系中对布鲁氏菌6个种进行鉴定。方法　根据布鲁氏菌6个种的差异基因设计5对引物,应用多重聚合酶链反应（PCR）方法对布鲁氏菌进行鉴定。先用标准菌株建立方法,优化实验条件,然后扩增地方株进行验证。结果　除绵羊附睾种外多重引物PCR方法能将其余5个布鲁氏菌种全部鉴定出来。结论　这种方法快速准确,且对实验操作人员安全,是布鲁氏菌鉴定的辅助方法。