p75神经营养素受体在新生和成年大鼠背根神经节中的不同表达

目的：研究神经生长因子低亲和力受体p75NTR在新生和成年大鼠背根经节中的表达，以探讨p75NTR在背根神经节神经元中的作用。方法：取新生和3月龄大鼠背根神经节，免疫组化ABC法观察p75NTR在神经元中分布和表达。结果：新生大鼠背根神经节中可见较多的p75NTR阳性反应神经元，免疫反应产物主要位于胞浆。成年大鼠背根神经节大多数神经元有p75NTR阳性免疫反应产物，主要位于细胞核。结论：p75NTR在新生和成年大鼠背根神经节神经元中表现为不同表达方式，提示其在神经元发育和分化的不同阶段发挥着一定的作用。     

不同损伤模型背根节内p75NTR的表达及其意义

目的：探讨不同损伤模型中背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）神经元和胶质细胞中p75NTR免疫产物的变化及其意义。方法：建立单纯坐骨神经损伤、单纯脊髓背索损伤以及合并损伤（脊髓背索损伤前1周损伤坐骨神经）模型，动物被随机分成正常组、单纯坐骨神经损伤组、单纯脊髓损伤组、合并损伤组。从脊髓损伤处嘴侧5mm处注入快蓝（fastblue，FB）以逆行标记DRG中感觉神经元，用免疫荧光组织化学方法观察不同模型中p75NTR在背根节神经元和胶质细胞的阳性产物，并结合FB逆行示踪观察FB阳性神经元中p75NTR的表达。结果：单纯坐骨神经损伤组背根节中胶质细胞源性p75NTR免疫阳性产物较正常组增加，神经元中p75NTR阳性产物较正常组低；单纯脊髓损伤组胶质细胞源性p75NTR免疫阳性产物较单纯坐骨神经损伤组和合并损伤组明显降低；坐骨神经损伤合并脊髓损伤组p75NTR的表达与单纯坐骨神经损伤组相似，在胶质细胞内上调，在神经元内降低，大多数FB标记的感觉神经元p75NTR表达呈阴性，但被p75NTR免疫阳性胶质细胞围绕。结论：不同损伤模型DRG中，p75NTR阳性产物在神经元和胶质细胞中具有明显差异，胶质细胞源性p75NTR可能参与了脊髓损伤后上行传导束的再生。     

p75NTR在牙发育与组织再生领域中的研究进展

p75NTR属低亲和力神经营养因子受体,被认为是神经嵴源性干细胞的重要表面标志物,不仅在神经干细胞的增殖、迁移、分化、生存、凋亡等多重生物学效应发挥重要的调控作用,还在胚胎发育过程中调控多种组织的发生发育。特别是近年来研究发现,p75NTR在牙发育启动、牙源性干细胞分化与矿化能力等方面有着重要的调控作用,并逐步被学者们所关注,因此,本文就p75NTR的结构特点和生理功能、参与调控牙发育与组织再生的生物学效应和分子机制作一综述。     

p75NTR在谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中的表达

目的:观察谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中神经营养因子受体p75(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)表达水平的变化.方法:建立谷氨酸诱导的新生大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,RT-PCR和Western blot方法检测p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达变化.结果:谷氨酸刺激后,p75NTR在mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)水平的表达较对照组明显增高;N-甲基-D-门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的特异性拮抗剂MK-801可明显减弱p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达上调(P<0.05).结论:p75NTR的活化与谷氨酸兴奋毒性神经损伤过程密切相关.     

吗啡耐受大鼠背根神经节磷酸化p38 MAPK的表达

 【目的】 观察鞘内慢性注射吗啡是否激活背根神经节(DRG)神经元,使其p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平发生改变&#65377; 【方法】 通过对成年雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射吗啡15 μg而建立吗啡耐受的动物模型,或连续7 d在吗啡注射前30 min预先鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580 10 μg,用50 ℃热水甩尾法观察吗啡的镇痛效果,并用免疫组织化学法观察DRG 磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达变化&#65377;【结果】 慢性鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用明显下降(P < 0.001),吗啡耐受形成;而SB203580预处理可明显抑制吗啡耐受的形成(P < 0.001);免疫组织化学染色显示脊髓DRG p-p38 MAPK表达明显上调(P < 0.01),且以小&#65380;中型神经元增加为主&#65377; 【结论】 鞘内慢性注射吗啡可激活脊髓DRG小型和中型神经元,使其p38 MAPK磷酸化水平增加,这可能是吗啡耐受的机制之一&#65377;     

一氧化氮对体外培养脊髓及背根神经节细胞的作用

研究一氧氧化氮对体外培养脊髓及背根神经节细胞的作用。     

重组人p75NTR169-Fc抗酶裂嵌合体在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将两组扩增产物混合变性、复性后再扩增,得到"p75NTR(1～169)-IgG Fc(216～433)"融合基因,缩写为p75NTR169-Fc。(2)应用DNA重组技术将p75NTR169-Fc融合DNA片段经NcoⅠ、EcoRⅠ酶切插入到pET28a(+)原核表达载体中,获得pET28a-p75NTR169-Fc重组质粒。(3)利用pET28a(+)/BL21(DE3)原核表达系统诱导表达目的蛋白,经protein A亲和层析纯化,得到纯度约96%的p75NTR169-Fc重组蛋白质。(4)用MTT方法,以PC12细胞检验不同剂量重组蛋白抗β-淀粉样肽(Aβ25～35)细胞毒的作用。结果 (1)成功构建了pET28a-p75NTR169-Fc/BL21(DE3)表达系统,其高效表达可溶性重组蛋白。实验表明:该重组蛋白p75NTR169-Fc稳定性好,不再被蛋白酶降解,为单一条带。亲和层析纯化后,分子质量均一。(2)p75NTR169-Fc与p75NTR竞争结合Aβ(25～35),拮抗Aβ(25～35)对PC12的细胞毒作用。结论重组人抗酶裂嵌合体蛋白p75NTR169-Fc具有生物学活性,在临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)上具有应用前景,系针对神经退行性疾病的新的候选药物。     

NGF在成年猫脊髓和背根节分布的免疫组化研究

目的：探讨神经生长因子在成年猫脊髓背角和背根节的表达和意义。方法：采用抗神经生长因子多克隆抗体免疫组织化学方法,对5只雄性家猫L6节段脊髓和背根节作石蜡切片的NGF免疫组织化学染色。结果：神经生长因子免疫阳性反应主要出现在脊髓背角I,Ⅱ、Ⅲ板层外侧部的神经元胞核和胞浆中,以胞核为主,而在背根节阳性反应的神经元却寥寥无几。结论：神经生长因子可能参与脊髓神经元正常功能的维持。     

中药对脊髓损伤大鼠背根神经节c-Jun表达的影响

应用荧光免疫组化法及激光扫描共聚焦显微镜技术 ,探索中药脊髓Ⅰ号促进大鼠损伤脊髓修复再生的机制。结果表明 ,服用脊髓I号后脊髓损伤侧背根节神经元的c Jun表达明显上调 ;脊髓损伤侧背根节神经元的细胞核呈完整形态的数量明显增多。提示脊髓Ⅰ号可能通过对c Jun基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生     

应用p75NTR分选食管肿瘤干细胞并鉴定其生物学特性

目的:应用p75NTR进行人食管肿瘤干细胞的分选,并对其生物学特性进行鉴定。方法:对人食管癌标本癌细胞及食管癌细胞株TE-1、Eca109进行培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管癌细胞（esophageal cancer cells,ECCs）中的表达,应用磁珠分选（MACS）法进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,观察p75NTR阳性细胞的增殖、分化及软琼脂克隆形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力;应用化疗药物作用于ECCs后检测其中p75NTR阳性细胞与阴性细胞存活率,以评价p75NTR阳性细胞对化疗药物的耐受性。结果:8个食管肿瘤细胞系（株）中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系（株）SHEC-4、SHEC-6、SHEC-7、SHEC-8、Eca109、TE-1中均检测到p75NTR阳性细胞,阳性细胞比例分别为 2.71%、0.32%、3.35%、1.13%、2.15%、0.45%。与阴性及未分选细胞相比,MACS分选后的p75NTR阳性细胞具有较强的增殖能力,具有分化产生其他表型细胞的能力,在软琼脂中具有较强的克隆形成能力(P<0.01);行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,其中SHEC-7细胞只需2×103个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍。化疗药物分别作用于p75NTR阳性细胞与阴性细胞48 h后,p75NTR阳性细胞的存活比例明显高于阴性细胞(P<0.05)。结论:人食管肿瘤细胞中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,对化疗药物具有较强的耐受性,并具有较强的致瘤能力,具有肿瘤干细胞的特性。     

NGF和BDNF在脊髓全横断后大鼠运动皮质的表达和分布

目的：探讨脊髓全横断后神经营养因子在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法：用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布。结果：各组的运动皮质中NGF和BDNF阳性神经元主要分布在第Ⅴ层；脊髓全横断后NGF和BDNF的表达均增高，NGF的表达高峰在脊髓全横断后7天，21天回到正常水平；BDNF表达在脊髓横断后21天到达高峰，28天回至正常水平。结论：脊髓损伤后大鼠运动皮质内NGF表达上调早于BDNF。     

Cotransfection of TrkA and p75NTR in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor ( p75^NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75^NTR or both by using lipofectmine^TM reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75^NTR or both genes were established.Studies on these transformant cell lines have shown different NGF responses. The p75^NTR transfection only resulted in the mild differentiation response, and transfection of TrkA gene caused remarkable neurite extension, up-regulation of neurofilament and decreased expression of N-myc oncogene after NGF treatment. The cotransfection of the two genes into this cell line resulted in the more rapid and more apparent morphological changes than single TrkA transfected cells after NGF treatment. The cotransfected cells underwent apoptosis after withdrawal of NGF.Conclusions The results indicate that coexpression of both low-and high-affinity NGF receptors are not only more efficient in restoration of NGF-induced differentiation pathway, but also be able to activate the pro-apoptotic activity of low-affinity NGF receptor and make the tumor cells become NGF-dependent and irreversibly differentiated.     

Cotransfection of TrkA and p75~(NTR) in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis of tumor cells

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor (p75NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75NTR or both by using lipofectmine?reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75NTR or both genes were established. Studies on these transformant cell line     

肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2、p75~（NTR）在非小细胞肺癌组织的表达及其生物学意义

目的探讨肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2及p75NTR在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法,检测44例NSCLC组织、17例癌旁组织、17例非肿瘤组织中的CD133、ABCG2及p75NTR蛋白的表达并对结果进行分析。结果 （1）CD133、ABCG2及p75NTR蛋白在44例NSCLC组织中的阳性表达率分别为68.2%（30/44）、31.8%（14/44）、47.7%（21/44）,在17例癌旁组织中分别为5.9%（1/17）、0（0/17）、11.8%（2/17）,在17例非肿瘤组织中分别为47.1%（8/17）、11.8%（2/17）、17.6%（3/17）,差异均有统计学意义（P〈0.05）;其中NSCLC组织中p75NTR蛋白的阳性表达与肿瘤的远处转移密切相关（P〈0.05）;（2）随肿瘤恶性度的增加,CD133蛋白的阳性表达率也明显增加,差异接近统计学意义（P=0.07）。结论 NSCLC组织中CD133、ABCG2及p75NTR的表达明显高于癌旁及非肿瘤组织,或许这三者与NSCLC恶性演进有关;肿瘤干细胞标记物CD133的表达与NSCLC的分化密切相关,CD133蛋白或许能成为NSCLC的肿瘤干细胞标记物。     

脊髓挤压伤后BDNF mRNA表达的RT-PCR研究

目的探讨实验性脊髓挤压伤后内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达变化.方法采用成年SD大鼠简易脊髓挤压伤模型.一步法抽提脊髓组织总RNA,分光光度计测OD260,OD280值.β-actin作内参照,RT-PCR技术检测内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达.结果(1)用RT-PCR技术检测到BDNF mRNA在正常大鼠脊髓表达.(2)脊髓挤压伤后BDNF mRNA在不同时段表达变化趋势不一.术后24h组、5d组、21d组BDNF mRNA的表达水平较正常组显著增高(P<0.05),而术后14d组虽高于正常组水平,但与正常组及损伤后除24h组外各组相比均无显著性差异(P>0.05).此外,除伤后24h组与14d组,伤后各组间比较亦均无显著性差异,表明脊髓挤压伤后24h,5d BDNF-mRNA表达明显增加,而14d略有下降,21d又有回升.结论(1)在正常大鼠脊髓有BDNF mRNA表达,提示BDNF可能与脊髓的生理功能有关.(2)cSCI后24h,5d,21d BDNF mRNA表达增高,可能有利于BDNF的合成,进而BDNF可能参与神经损伤修复.(3)BDNF mRNA于术后24h,5d明显升高,14d又回复近正常水平,而21d又明显回升,表明BDNF的表达在挤压伤脊髓内经历了双向变化.