二巯基丙磺酸钠体内外抗肿瘤作用研究

目的观察含有两个巯基的化合物-二巯基丙磺酸钠(DMPS)在体内外的抗肿瘤作用。方法在体外培养的人肺腺癌A549细胞株中,通过MTT实验,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞生长繁殖的抑制作用;通过荧光显微镜和细胞凋亡-Hoechst33258染色试剂盒,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。在体内小鼠S180肉瘤模型中,观察不同浓度的DMPS对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验中,终浓度为8 mmol/L和16 mmol/L的DMPS应用48h(P<0.01)和72h(P<0.01)后,显著地抑制肿瘤细胞的生长繁殖;终浓度为8 mmol/L和16 mmol/L的DMPS应用6h和9h后,肿瘤细胞凋亡数量显著地增多(P<0.05,P<0.01)。体内实验中,1.5%DMPS以0.2ml/10g体重腹腔注射,1次/d,连续2周,可显著地降低瘤体重量(P<0.05)。结论高浓度的DMPS显著地抑制体外A549细胞系、体内S180细胞系的生长繁殖。     

牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响

目的 观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法 用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA 条带;AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术观察牡荆苷对EC-109细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术检测EC-109细胞中抑癌基因p53和促癌基因bcl-2蛋白的表达。结果 牡荆苷对EC-109细胞生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,且作用与牡荆苷浓度、作用时间呈正相关,可上调p53蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达。结论 牡荆苷可能通过上调p53蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,促进EC-109细胞凋亡,抑制EC-109细胞生长。     

大黄素抑制食管癌EC-109细胞增殖的机制探讨

目的：探讨大黄素对人食管癌细胞株EC-109增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度（0．0,2．5、5．0、10．0、20．0μg/mL）大黄索作用食管癌细胞EC-109,应用噻唑蓝比色法检测大黄素对食管癌细胞增殖的影响;用Annexin V-FTTC碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果：不同浓度大黄素可明显抑制EC．109细胞增殖,并且呈浓度-时间依赖性;在作用EC-109细胞2h后,细胞内活性氧明显增加;12h后可见细胞凋亡率分别为8．1％、15．6％、24．0％、36．5％。结论：大黄素能明显抑制EC-109细胞的增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生引起食管癌细胞EC-109凋亡。     

三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞凋亡的研究

目的探讨三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用MTT比色法测定三羟基异黄酮对EC-109细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL染色法研究三羟基异黄酮与EC-109细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和RT-PCR法检测bcl-2和bax的表达。结果三羟基异黄酮对EC-109细胞有明显抑制作用,随浓度增加和培养时间的延长而增强;三羟基异黄酮诱导EC-109细胞出现凋亡细胞形态;TUNEL染色法可见,经三羟基异黄酮处理24、48、72、96h后,EC-109细胞凋亡数随时间明显增加。免疫组织化学发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2蛋白阳性率减少,bax蛋白阳性率增加。RT-PCR也发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2mRNA条带密度降低,bax mRNA条带密度加强。结论三羟基异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡。     

LRP1基因下调对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究LRP1基因对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过已构建的amiRNA载体靶向沉默LRP1基因,用脂质体2000转染人食管癌细胞系EC-109,实验分为3组(转染空载体Ctrl LRP1组、LRP1 amiRNA-3组、转染LRP1 amiRNA-3干扰载体组)。应用Real-Time PCR和免疫组化实验分别检测LRP1 mRNA和蛋白的相对表达量,应用流式细胞技术检测人食管癌EC-109细胞的凋亡率。结果人食管癌EC-109细胞转染LRP1 amiRNA-3干扰载体后,mRNA和蛋白水平均被有效抑制,LRP1 mRNA和蛋白表达水平均下降;LRP1 amiRNA-3组细胞增殖水平低于转染空载体Ctrl LRP1组(P<0.05)。转染LRP1 amiRNA-3干扰载体对食管癌细胞产生了凋亡效应,且48 h左右凋亡作用达高峰。结论靶向抑制EC-109人食管癌细胞中LRP1基因的表达可显著抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡,进而影响细胞的生物学行为。     

光动力联合紫杉醇对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的 探讨血卟啉衍生物联合紫杉醇注射液对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法效应的影响.方法 将食管癌细胞株Eca-109分为8组:对照组、化疗组、化疗+高剂量光敏剂治疗组、化疗+中剂量光敏剂治疗组、化疗+低剂量光敏剂治疗组、高剂量光敏剂治疗组、中剂量光敏剂治疗组和低剂量光敏剂治疗组.种板孵育24 h,检测肿瘤细胞的存活率:于化疗方案组加入紫杉醇作用12 h,再往含光敏剂实验组分别加入血卟啉衍生物高、中、低剂量,4h后行光动力照射,照光前后荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率:流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 血卟啉衍生物浓度越高食管癌细胞显示的荧光强度越强,荧光强弱与细胞的活性成正比,与紫杉醇联合组则可见到更多凋亡细胞.在肿瘤细胞的生长抑制率、细胞凋亡率方面.化疗+高剂量光敏剂光动力治疗组与空白对照组、单纯化疗组及低剂量光敏剂光动力治疗组相比,差异均有显著意义(P<0.01);含光敏剂大剂量组与小剂量组相比,差异有显著意义(P<0.05);化疗组及光动力组与空白对照组相比.差异有显著意义(,P<0.05).结论 光动力联合紫杉醇化疗对人食管癌细胞细胞株Eca-109增殖有协同抑制作用,二者可协同诱导人食管癌细胞株发生凋亡.     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

姜黄素对体外培养的人食管癌Ec-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究姜黄素对体外培养的人食管癌(esophageal carcinoma 109,Ec-109)细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度姜黄素对人食管癌Ec-109细胞增殖的影响;流式细胞术检测Ec-109细胞的凋亡情况;免疫细胞化学方法检测Fas、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的情况.结果 姜黄素可显著抑制Ec-109细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(inhibitory concentraltion 50,IC50)为22.09μmol/L(姜黄素浓度为80μmol/L作用60h).不同浓度姜黄素均可诱导Ec-109细胞凋亡.姜黄素可显著下调Ec-109细胞PCNA蛋白表达,显著上调Fas蛋白表达.结论 姜黄素可抑制体外培养的人食管癌Ec-109细胞的增殖,诱导其凋亡.     

牛蒡子苷元对人食管癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的:观察牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对体外培养的人食管癌细胞(esophageal cancer-1 cells,EC-1)增殖和凋亡的影响。方法:将不同浓度的ARG作用于EC-1,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞增殖抑制率、流式细胞术测定细胞周期变化,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)表达水平;将不同浓度的ARG作用于EC-1,流式细胞术检测细胞凋亡率、琼脂糖凝胶电泳和DNA缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick-end labelingtechnique,TUNEL)来检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2、Bax凋亡基因表达水平。结果:与对照组比较,ARG对EC-1细胞生长有抑制作用,随着时间/浓度的增加抑制作用逐渐增强(P<0.05);ARG可抑制EC-1由G0/G1向S期转换,G0/G1期细胞百分率较对照组显著增加,S期细胞百分率显著降低;随ARG浓度增加EC-1内PCNA表达水平逐渐降低。随ARG浓度增加,EC-1细胞凋亡率和凋亡指数显著增加(P<0.05);随ARG浓度增加,Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强(P<0.05)。结论:ARG有抑制EC-1增殖,下调EC-1内PCNA表达水平,阻滞细胞周期的作用。ARG可明显诱导EC-1细胞凋亡可能与ARG调控Bcl-2,Bax基因表达有关。     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响

目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P<0.05）。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P<0.05）。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低（P<0.05）。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P<0.05）,透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。     

壁虎粗多肽对3种消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的 探讨壁虎粗多肽(GCPS)对消化道肿瘤细胞体外增殖的抑制作用.方法 用不同浓度 (0.375、0.75、1.0、1.5、3.0 mg/mL) 的GCPS处理食管癌细胞EC109、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC803,于24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,并使用MTT法观察GCPS对3种人消化道肿瘤细胞增殖的影响.结果 与空白对照组比较,在倒置显微镜下可观察到GCPS作用24、48、72 h后的细胞形态有不同程度的改变.MTT法结果显示GCPS具有抑制人消化道肿瘤细胞增殖作用,且作用呈浓度和时间依赖性;48 h后GCPS作用于上述3种细胞的IC50为1.1、1.2 和1.6 mg/mL.结论 壁虎粗多肽可抑制HepG2、EC109和MGC803这3种消化道肿瘤细胞增殖.     

重组人生长激素联合奈达铂在体外对人食管癌细胞株EC109作用的实验研究

目的 研究重组人生长激素(rhGH)在体外对人食管癌细胞生长的影响.方法 实验分为对照组、rhGH组、奈达铂(nedaplatin,NDP)组和rhGH NDP 组共4组,利用体外细胞培养、MTT比色法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法,测定不同浓度的rhGH对人食管癌细胞株EC109细胞抑制率、细胞周期、增殖指数(PI)及核增殖抗原Ki-67表达的影响.结果 rhGH在体外不能明显促进EC109细胞分裂增殖,对照组与rhGH组、rhGH NDP组与NDP组比较细胞抑制率、PI、Ki-67表达强度差异均无统计学意义(均P＞0.05);rhGH各亚组间比较差异亦无统计学意义(均P＞0.05);NDP组、rhGH NDP组与rhGH组、对照组比较细胞抑制率增加,阻滞于G0～G1期的细胞数增加,S期细胞明显减少,PI明显降低,Ki-67表达强度明显下降(均P＜0.05).结论 重组人生长激素在体外不能明显促进食管癌EC109细胞生长.     

miR-155对食管癌EC109细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究microRNA-155(miR-155)对高转移性人食管癌EC109细胞增殖和侵袭等生物学行为的影响.方法 以人食管癌EC109基因组DNA为模板,经PCR法扩增miR-155的前体序列,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其亚克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(-);然后将构建成功的pcDNA3.1(-)-pri-miR-155载体(命名为p-miR-155)体外瞬时转染人食管癌EC109细胞,利用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)法检测mR-155成熟体的表达水平,并利用MTT实验、克隆形成实验和划痕法检测EC109细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力.结果 成功构建携miR-155的真核表达载体;与空白(Mock)和对照组(p-Ctrl)相比,转染后的EC109细胞过表达miR-155、p-miR-155载体转染组EC109细胞的增殖抑制明显增加(P<0.01),同时克隆形成能力(在100和1000个细胞/孔接种条件下)明显下降(P<0.01),以及伤口愈合能力下降(P<0.01).结论 过表达miR-155可显著抑制人食管癌EC109细胞的增殖和迁移能力,为食管癌的治疗提供了潜在的策略.     

钒化钠对人食管癌细胞系EC109细胞株增殖影响的研究

目的：探讨不同浓度钒化钠对食管癌细胞系EC109增殖作用的影响。方法：将培养的食管癌细胞系EC109给予不同浓度及时间的钒化钠刺激,以噻唑蓝（MTT）比色法检测食管癌细胞系EC109增殖及增殖抑制情况。结果：一定浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109有生长抑制作用。结论：一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109细胞株的生长。     

miR-143通过负向调控Bcl-2抑制食管癌细胞的增殖

目的探讨miR-143通过负向调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)抑制食管癌细胞的增殖。方法 RTPCR法检测食管癌细胞TE-1、EC109、EC9706、KYSE150、KYSE510、SEG-1及人正常食管上皮细胞HEEC中miR-143表达,使用脂质体Lipofectamine~(TM) 2000将miR-143 mimics和miR-143 NC转入EC9706细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-143表达,CCK-8法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot检测Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 miR-143在食管癌细胞TE-1,EC109,EC9706,KYSE150,KYSE510及SEG-1中的表达量[(1.36±0.13),(1.08±0.10),(0.89±0.09),(0.95±0.09),(1.32±0.14),(0.96±0.11)]显著低于miR-143在人正常食管上皮细胞HEEC(2.38±0.15)中的表达量(P0.01)。与miR-143 NC组比较,miR-143 mimics组miR-143表达量显著升高(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞增殖能力降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时Bcl-2蛋白及mRNA表达量显著降低(P0.01)。结论miR-143过表达能通过下调Bcl-2表达抑制EC9706细胞增殖。     

白藜芦醇抑制食管癌Eca109细胞增殖的初步研究

目的观察白藜芦醇对人食管癌Eca109细胞增殖影响及凋亡诱导作用。方法噻唑蓝法测定细胞生长抑制率,倒置显微镜、透射电镜和HE染色法观察细胞的形态变化,流式细胞术用于检测白藜芦醇培养Eca109细胞前后的细胞凋亡情况。结果白藜芦醇对Eca109细胞生长有抑制作用,抑制率达76.42%,并呈剂量、时间效应关系。倒置显微镜下可见细胞生长明显被抑制,胞浆内颗粒增多增粗,部分细胞变圆悬浮在培养基中;HE染色和透射电镜观察发现白藜芦醇能诱导Eca109细胞呈现典型的细胞凋亡特征,如细胞体积变小,染色质浓缩等。流式细胞术检测结果显示,40 mg/L白藜芦醇培养Eca109细胞72 h后细胞凋亡率达19.52%,在DNA直方图上有明显的亚二倍体凋亡峰。结论白藜芦醇能明显抑制Eca109细胞增殖,并进一步诱导食管癌细胞凋亡。     

Enhancement of the therapeutic effect and red cell immune function by radix Trichosanthis in mice bearing Ehrlich ascites carcinoma

Various red cell immune functions were determined in 60 mice bearing Ehrlich ascites carcinoma treated and untreated with Radix Trichosanthis(RT), and compared with these of 30 normal mice. In mice bearing Ehrlich ascites carcinoma treated with RT, the rosette formation of red cell C3b receptor, the rosette formation of red cell immune complex, the rosette formation rate of red cell round cancer, the rate of PMN phagocytosis were enhanced, and the activity of superoxide dismutase (SOD) was satisfactory higher than those in mice bearing Ehrlich ascites carcinoma untreated with RT, and almost same as those in normal mice, while the rosette inhibition rate of red cell C3b receptor in serum was satisfactory lower than that in mice bearing Ehrlich ascites carcinoma untreated with RT, and almost same as that in normal mice.     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。