四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

粘附LAK细胞（A—LAK）体内外抗肿瘤活性的研究

本文研究了A－LAK细胞的体内外抗肿瘤作用，并与LAK细胞进行了比较。18hLDH－L释放实验结果表明，A－LAK细胞与LAK细胞一样对NK敏感的K562和对NK非敏感的Anip973细胞均有抗肿瘤作用。但A－LAK对杀伤靶细胞的能力明显高于LAK细胞，两者相比差异非常显著（P＜0．01）。体内实验表明，A－LAK对高转移入肺腺癌在裸小鼠体内的肺转移抑制率达82.7％，而LAK的肺转移抑制率46％，两者相比（P＜0．01）有显著差异。A－LAK和LAK细胞对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤也有显著的抑癌作用，并有明显的延长动物生存期的作用，而A－LAK细胞的抑癌作用较LAK细胞强。     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

脐血LAK与CIK细胞杀伤活性研究

寻求一种可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。方法用多种细胞因子诱生ＣＩＫ细胞,用ＭＴＴ法测定ＬＡＫ和ＣＩＫ细胞杀伤活性。结果在峰值期ＣＩＫ细胞杀伤活必均显著高于ＬＡＫ细胞。     

中药增强LAK细胞抗肿瘤作用的实验研究

本研究以荷移植瘤小鼠为实验模型，将补中益气汤与ｒＩＬ２／ＬＡＫ联合进行试验治疗，观察其抑瘤百分率。结果是：ｒＩＬ２／ＬＡＫ治疗组的抑瘤率为４７％，与ＮＳ对照组比较差异显著（Ｐ〈０．０５）；ｒＩＬ２／ＬＡＫ与补中益气汤联合治疗组的抑瘤率为５９％，与ＮＳ组比较差异很显著（Ｐ〈０．０５），与单独ｒＩＬ２／ＬＡＫ治疗组比较差异亦明显（Ｐ〈０．０５）。结果提示：补中益气汤联合ｒＩＬ２／ＬＡＫ应用能使其抗瘤效     

CD3AK与LAK细胞体外培养增殖及细胞毒活性的比较

我院 1993～ 1998年应用 CD3AK细胞、L AK细胞治疗癌症过程中 ,在细胞培养期间进行了两种细胞增殖力及杀伤力的比较。近年来对于 L AK细胞的抗肿瘤作用及临床已有广泛深入的研究。对 CD3AK也有了初步探讨。但对两种效应细胞的体外增殖及抗肿瘤作用同时进行比较则未见报道。本文对 CD3AK、L AK细胞的体外扩增、杀伤作用进行了比较 ,以期为选择合适的抗癌效应细胞用于临床治疗提供依据。1　资料与方法1.1　资料　均为住院癌症患者 ,不能应用常规手术及放、化疗 ,输用 CD3AK及 L AK细胞各 78例。1.2　主要试剂及细胞株　 Anip- 937…     

LAK细胞免疫活性研究

本文用~(51)Cr-铬酸钠释放法分析了由PBL、SPC和THC制备的LAK细胞免疫活性变化规律。证明LAK细胞的NK活性和LAK活性与IL-2有非常明显的正向依赖关系,与培养细胞密度有明显的负向依赖关系。无IL-2诱导,不表现LAK活性,在低细胞密度条件下少量的IL-2即可激活LAK细胞,细胞密度增大,IL-2剂量需要相应增加,用2×10~6/ml细胞密度制备LAK细胞,诱导LAK细胞活性的最佳IL-2剂量为1000 IU/ml。单用IL-2激活LAK细胞,NK活性高峰时相在48h左右;LAK活性高峰时相在60h前后。LAK细胞杀伤活性可以在培养液中维持1～2天时间,要在较长时间内维持LAK细胞活性,须定期更换培养基,添加IL-2。LAK细胞杀伤活性与细胞形态学变化不完全同步。     

脐血LAK与CIK细胞杀伤活性研究

目的　寻求一种可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。方法　用多种细胞因子诱生CIK细胞 ,用MTT法测定LAK和CIK细胞杀伤活性。结果　在峰值期CIK细胞杀伤活性均显著高于LAK细胞 (P <0 .0 5 )。结论　CIK细胞与LAK细胞属不同的细胞毒性细胞 ,脐血CIK细胞的高杀伤活性提示其可能成为过继免疫疗法的生力军。     

脐血LAK细胞生物学特性影响因素的研究

采集２３名产妇的脐带血和８名正常成人的外周血制备ＬＡＫ细胞，随机分为４组，在培养第３，５，７，１４天，分别利用ＭＴＴ法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对４组ＬＡＫ细胞的增殖力和杀伤活性进行了测定，同时用细胞毒方法测定培养７天的ＬＡＫ细胞的免疫表型。结果发现，在不同培养时间，脐血来源的ＬＡＫ细胞增殖力显著高于成人血ＬＡＫ细胞（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），成人血清组，脐血血清组，红细胞组ＬＡＫ细胞增殖力有     

人胚脾LAK细胞体外抗肿瘤作用的实验研究

本文对人胚脾ＬＡＫ细胞的制备及其体外抗肿瘤作用进行了实验研究，为临床推广应用提供了可行性的依据。实验表明，在红细胞低渗休克法，溶血盐法，淋巴细胞分离液分离法中，以最后一种方法制备人胚脾ＬＡＫ前体细胞的效果最佳。用重组白细胞介素２诱导的人胚脾ＬＡＫ细胞在培养的第５～８ｄ对Ｋ５６２靶细胞的细胞毒活性最高，达６５．１％；而对Ｒａｊｉ靶细胞的细胞毒活性较低，在培养的第５ｄ为２６．７％。由此可见，人胚脾ＬＡＫ细胞对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ两种肿瘤细胞均有杀伤活性。     

人淋巴因子激活的杀伤细胞抗生素肽的分离纯化

目的　分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞 (lym phokine activated killer,L AK)内源性抗生素肽。方法　采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,并用 IL- 2和 PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine- SDS-PAGE鉴定其分子量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果　从人 L AK细胞酸溶性提取物中纯化出多个多肽 ,其中 HL P- 2 b、HL P- 3a完全纯化 ,分子量分别为 7.9× 10 3u和 4× 10 3u。HL P- 2 a、HL P- 2 c、HL P- 3b和 HL P- 3c基本纯化 ,主带分子量分别为 7.2× 10 3u、10 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u。 HL P- 3a具有抗金黄色葡萄球菌活性 ,HL P- 2 a、HL P- 2 b、HL P- 2 c、HL P- 3b、HL P- 3c具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗白色念珠菌活性。结论　人 L AK细胞含多种内源性抗生素肽分子     

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

CD3AK细胞和LAK细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者LAK细胞和CD3AK细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察CD3AK细胞和LAK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率。结果表明：①培养第1周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率分别为61．36％，54．23％和52．96％，显著高于LAK细胞组（P＜0．01）；③培养第2，3周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率高于LAK细胞，但无统计学差异（P＞0．05）；③随着培养时间延长，CD3AK细胞CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均不同程度下降，尤以CD_3~＋细胞率下降最快，而LAK细胞在培养第2周，CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均有所升高，但第3周时又开始下降；④CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率在培养第1周最高，而LAK细胞在培养第2周最高。提示：CD3MAb和IL－2激活CD3AK细胞和LAK细胞的途径不同，致使CD3AK细胞和LAK细胞向不同的表型特征分化。     

激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究

目的 :证实激活骨髓 (Activated bone marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤 (LAK)细胞不同的生物学效应。方法 :应用重组白细胞介素 - 2 (r IL - 2 )、抗 CD3 单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞 ,以 MTT比色分析法测定 ABM、L AK细胞的杀伤活性 ,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒 -巨噬细胞系祖细胞 (CFU- GM)、红系祖细胞 (BFU- E)培养。结果 :r IL- 2 +抗 CD3 单抗激活的 ABM组杀伤活性最强 (6 5 .8± 9.2 ) % ,r IL - 2激活的 ABM组次之为 (5 6 .3± 7.9) % ,活性强于相同条件下的 L AK组 ,两组差异具有显著性 (P<0 .0 1)。增殖倍数与相同条件下的 LAK细胞相比差异亦具有显著性。体外激活 3～ 5 d的 ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比 BFU- E、CFU- GM形成率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,LAK细胞则不具有造血祖细胞活性。结论 :ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于 L AK细胞 ,且能保持造血祖细胞活性 ,抗 CD3 单抗能够促进 r IL - 2诱导的 ABM抗肿瘤活性和增殖效应 ,不损伤造血祖细胞活性 ,是优于 LAK细胞的过继免疫疗法。     

同种LAK细胞治疗肺癌癌性胸水的疗效观察

采用同种ＬＡＫ细胞治疗癌癌性胸不４３例。其中腺癌２５例，鳞癌７例，小细胞癌７例，未定型４例；大量胸水２６例，中等量胸水１７例。ＬＡＫ细胞胸腔注射治疗１－２个疗程后，１５例胸水消失，２３例胸水显著减少，抽不出胸水，有效率为８８．４％；化疗组有效率３９．５％，两组差别显著，提示ＬＡＫ细胞胸腔注射治疗肺癌癌性胸不的疗效优于腹腔注射化疗药物。     

体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞时微管蛋白变化的免疫荧光研究

应用免疫荧光细胞化学方法观察了体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞(HR8348)时效靶细胞内微管蛋白的变化。结果表明,LAK细胞与靶细胞相互接触形成效靶复合体后,两种细胞胞浆内微管蛋白出现重排现象。LAK细胞内的微管蛋白全部集中在两类细胞质膜接触处,呈月芽状分布。靶细胞内的微管蛋白在效靶复合体质膜接触处浓集成斑块状并与LAK细胞的月芽状结构融合,靶细胞逐渐变性坏死。这提示,靶细胞的溶解可能与效靶细胞的微管重排有关。     

LAK细胞对直肠腺癌细胞杀伤的观察

采用体外培养方法,在恒温(37℃)和5％CO_2条件下,连续观察LAK细胞对直肠腺癌细胞系(HR8348)的结合率。杀伤活性及杀伤动态。结果表明:HR8348细胞对LAK细胞杀伤较敏感,在相同的效靶比例条件下,4h时效靶细胞结合率为52.0±3.6,LAK细胞杀伤率为49.0±2.3％。效靶细胞结合率及杀伤率呈正相关(P<0.01),LAK细胞的杀伤取决于效靶细胞的稳定结合。LAK细胞杀伤HR8348的动态过程是:效靶细胞主动趋向运动→相互识别→接触与结合→LAK细胞发挥杀伤作用→靶细胞溶解。LAK细胞杀伤作用随效靶共育时间延长乃效靶比例的增高而增强。     

病毒性心肌炎NK和LAK细胞活性与心肌损伤的关系

目的：系统地观察病毒性心肌炎，尤其是柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）心肌炎患儿自然杀伤细胞（ＮＫ）和淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性，并分析两者的内在关系，以及与心肌损伤的关系。方法：５６例病毒性心肌炎患儿，年龄３￣１２岁，男２６例，女３０例；另设对照组３０例，年龄３￣１２岁，男１６例，女１４例。采集静脉血，应用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记法测定ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性。结果：（１）心肌炎时ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均明     

N K 细胞、 L A K 细胞抗弓形虫作用机理的研究

目的：观察 Ｉ Ｌ ２在小鼠抗弓形虫机理中的作用。方法：应用３ Ｈ 尿嘧啶（３ Ｈ Ｕ）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（ Ｍ ｏｕｓｅ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍ ａｃｒｏｐｈａｇｅ, Ｍ Ｐ Ｍ ）内的增殖实验及１２５ Ⅰ 尿嘧啶核苷（１２５Ⅰ Ｕｄ Ｒ）标记的细胞毒实验,观察 Ｉ Ｌ ２的抗弓形虫作用。结果： Ｉ Ｌ ２对 Ｍ Ｐ Ｍ 的抗弓形虫作用及对 Ｉ Ｆ Ｎ γ诱导的 Ｍ Ｐ Ｍ 抗弓形虫作用无明显影响;正常小鼠 Ｎ Ｋ 细胞杀伤弓形虫感染靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（ Ｐ＜ ０００１）;而经 Ｉ Ｌ ２诱导的 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫靶细 胞的能力, 明显高于 Ｎ Ｋ 细胞（ Ｐ＜ ０００１）, 并与 Ｌ Ａ Ｋ 杀伤肿瘤细胞的能力无明显差别（ Ｐ＞ ００５）。结论：提示 Ｉ Ｌ ２体内应用提高弓形虫小鼠的生存能力的机理可能与提高体内 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫细胞的能力有关。