IL-2与IFN-α联合激活的白血病缓解期骨髓对白血病细胞的净化作用

目的：体外研究白细胞介素Ⅱ(IL-2)和α-干扰素(IFN-α)联合激活对白血病缓解期骨髓自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性的影响，以及对白血病细胞(K562细胞)的净化作用，并观察其对正常造血的影响。方法：标准4h^51Cr释放实验测定激活的白血病缓解期骨髓的细胞毒作用；集落培养法和逆转录多聚酶链反应检测激活的白血病缓解期骨髓对K562细胞的净化作用。结果：IL-2和INF-α单用虽均能增强白血病缓解期骨髓的NK活性和诱导LAK细胞的产生，但两者联合激活的白血病缓解期骨髓的NK和LAK活性，明显优于IL-2和IFN-α的单用(P＜0．05)。在体外净化实验中两种细胞因子均能激活白血病缓解期骨髓细胞对K562细胞的净化作用，但两种联合作用最强，且bcr／abl融合基因检测为两者联合组33．33％(4／12)，Rt-pcR法，而IL-2作用次之为66．67％(8／12)，最后是IFN-α为91．67％(11／12)。两种细胞因子中以IFN-α单用对CFU-GM的抑制有一定影响(P＜0．01)，而IL-2和两者联合对激活骨髓的CFU-GM无明显影响。结论：IL-2能激活白血病缓解期骨髓的NK细胞的活性和诱导LAK细胞的产生，IFN-α能增强IL-2激活白血病缓解期骨髓对白血病细胞的净化作用。     

人外周血LAK细胞培养上清对粒单系及红系祖细胞体外增殖的影响

43刨人外周血LAK细胞对急性白血病细咆有较强的杀伤活性。其培养上清分別对11例正常人骨髓粒单系、红系祖细胞无抑制作用,甚至在适宜浓度(20％)下促进其体外增殖。提示LAK细胞输注对白血病病人的正常造血细胞无损伤。本实验结果为LAK细胞疗法治疗急性白血病提供了新的依据。     

人参皂甙R_g1协同诱生LAK细胞的抗瘤活性

用51Cr释放试验检测人参皂甙Rg1协同诱生LAK细胞对K_(562)细胞的杀伤活性。9例正常人PBL诱生的LAK细胞对K_(562)细胞的杀伤活性(30.86±16.58％)高于8例NK细胞(12.18±5.47％)。5～50μg/ml人参皂甙Rg1对LAK细胞活性皆有增强作用,尤以50μg/ml人参皂甙Rg1作用明显,其协同诱生LAK细胞的活性(56.43±12.18％)高于对照组(43.18±20.32％,P<0.05)。     

LAK细胞可溶性因子介导K_(562)细胞的损伤

采用~(51)Cr释放方法探讨LAK细胞可溶性因子介导的K_(562)细胞的损伤。15例中有12例LAK细胞培养上清介导的K_(562)细胞的损伤为10.96±5.15％。将LAK细胞洗去培养上清后与K_(562)细胞共育6小时,5例此种效靶细胞共育后的上清介导的Ks6z细胞的损伤为12.41±6.54％。结果表明,LAK细胞杀伤K_(562)细胞的作用至少一部分是由LAK细胞分泌的可溶性因子完成的。     

人参茎叶皂甙对LAK细胞抗肿瘤活性的正向调节作用

体外实验,79例正常人PBL诱生的LAK细胞分别对13例新鲜急性白血病细胞和K562细胞的杀伤活性,较7例未经IL—2激活的PBL对同样靶细胞的杀伤活性明显高。适宜浓度的人参茎叶皂甙可明显增强LAK细胞抗肿瘤活性。提示人参茎叶皂甙对辅助LAK细胞联合IL—2过继输入治疗恶性肿瘤有潜在的使用价值。     

18 急性白血病细胞转化水平的研究

作者用改良的CFU-Mix甲基纤维素半固体培养法对正常人、慢性粒细胞白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性粒细胞白血病(AML)患者的骨髓细胞进行了体外培养研究。结果:正常人集落产率显著高于非缓解期AML和ALL,低于CML。CML组显著高于AML和ALL组。正常人集簇产率低于CML,高于ALL和AML组。正常人培养物中一般均有CFU-Mix集落形成。AML的培养中的集落则多由白血病性细胞组成,细胞密集,扫描电镜下见细胞怪异,贴壁多突起。CML的CFU-Mix占13％,低于正常。FAB分     

短期培养和长期培养的自体LAK细胞的制备和应用研究

用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外经短期(3~5d)和长期培养(7~15d)后将自体LAK细胞回输给病人。结果显示:长期培养LAK细胞的扩增细胞数明显多于短期培养LAK细胞扩增数(P<0.005);两者在体外均能杀伤人髓样白血病K_562细胞,前者的平均杀伤活性为39.24±2.81%,后者的平均杀伤活性为35.99±1.31%,病人经自体LAK细胞治疗后,共症状和体征均有所改善。     

肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.     

复方祛毒药中药含药血清对AML-CR患者BMNC来源DC诱导作用的影响

目的:研究复方祛毒中药对急性髓细胞白血病完全缓解期( AML - CR)患者骨髓单个核细胞(BMNC)来源树突状细胞(dendritic cells,DC)的影响.方法:分离培养AML - CR患者的BMNC,用不同浓度复方祛毒中药含药血清与之进行体外培养,倒置显微镜下观察诱导转化的DC形态学特征,流式细胞术检测DC表面分子CD86、CD1a、HLA - DR的表达.以诱导转化的DC分别与异体T细胞、自体T细胞共同培养,以激发T细胞,MTT法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人白血病细胞株K562的杀伤作用.结果:复方祛毒药中药含药血清与AML - CR患者BMNC培养能促进BMNC分化为形态特征典型的DC,高表达成熟DC的特异性标记(CD - 86、CD - 1a和HLA - DR),并激发T细胞杀伤K562细胞.结论:复方祛毒中药对AML - CR患者BMNC来源DC具有明显的促进作用.     

LAK细胞对白血病多药耐药细胞的杀伤作用

目的:研究淋巴因子激活的杀伤(LAK) 细胞对白血病多药耐药细胞的杀伤效应。方法:采用改良的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测LAK细胞对白血病多药耐药细胞株K562/VCR的杀伤率,并与敏感株K562 相比较。结果:LAK 细胞对K562/VCR 细胞的杀伤率明显高于对K562 细胞的杀伤率,并且当效靶比为40∶1 时,这种杀伤率最高。结论:LAK细胞在体外对白血病多药耐药细胞株具有显著的杀伤作用,提示临床上用LAK细胞治疗多药耐药的白血病是可行的     

Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究

目的观察Wnt5a在髓细胞白血病中的表达以及外源性Wnt5a对K562细胞生长的影响。方法RT-PCR检测5例急性髓细胞白血病、6例慢性髓细胞白血病外周血或骨髓标本及白血病细胞系中Wnt5a的表达。用AdWnt5a和AdG-FP腺病毒转染CHO细胞制备的条件培养液分别处理K562细胞1～5d,采用细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态等方法观察Wnt5a对K562细胞生长影响。结果6例慢性髓细胞白血病均未表达Wnt5a,5例急性髓细胞白血病中4例不表达或弱表达,仅1例完全缓解的病人高表达Wnt5a。K562、HL-60细胞中Wnt5a也不表达,Jurkat细胞高表达。以GFP条件培养液处理细胞为对照,Wnt5a条件培养液处理K562细胞生长明显受到抑制,但未影响细胞的存活率。与对照相比细胞形态上出现了分化的表型。结论Wnt5a在急慢性髓细胞白血病外周血或骨髓中以及髓系白血病细胞株中均表达缺失或降低,并且外源性的Wnt5a可抑制K562细胞生长并有诱导其分化的现象,提示Wnt5a的表达下调可能与髓细胞白血病的发生有关。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

Clonal growth of human acute leukemia cells in serum-free methylcellulose medium

Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｓｅｍｉｓｏｌｉｄｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｅｐｒｅｓ－ｅｎｃｅｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｓｅｒｕｍ．Ｓｅｒｕｍｉｓａｍｉｘ－ｔｕｒｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｉｏ－ｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ［１］,ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏ…     

STI571 combined with vincristine greatly suppressed the tumor formation of multidrug-resistant K562 cells in a human-nude mice xenograft model

Multidrug resistance (MDR), often associated with decreased intracellular drug accumulation in patient's tumor cells resulting from enhanced drug efflux,1 is a major obstacle to successful chemo- therapy in leukemia. It is related to the overexpression of a membrane protein, P- glycoprotein (P-170), thereby reducing drug cytotoxicity. For example, Philadelphia-chromo- some-positive (Ph+) chronic myelogenous leukemia (CML) is often resistant to chemotherapy in advanced phases because of the…     

Notch1过表达对K562细胞增殖及其周期的影响

目的 研究外源性Notch1过表达对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖和细胞周期的影响.方法 用脂质体将携带Notch1胞内段(ICN1)的质粒转染入K562细胞,倒置相差显微镜观察转染前后K562细胞形态学变化,RT-PCR 和Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖,...     

胎儿胸腺淋巴细胞诱导的LAK细胞的实验研究

我们利用胎儿胸腺淋巴细胞作为IAK细胞的前身细胞,制备成Th-LAK细胞,进行了实验研究。结果表明:1.Th-LAK细胞对离体癌细胞有直接杀伤作用。2.用~(125)I同位素释放法测定Th-LAK细胞对靶细胞(K562)具有杀伤活性。3.Th-LAK细胞对裸鼠移植瘤具有一定抑制作用。说明Th-LAK细胞对肿瘤具有杀伤作用和抑制作用。     

白血病细胞在无血清体系中增生能力的探讨

采用无血清甲基纤维素半固体培养方法,对白血病细胞系和原代白血病细胞进行一次集落培养,将形成的集落细胞重新悬浮,进行二次集落培养、计数。结果白血病细胞系的二次植入效率为３１．３０％,原代髓系白血病细胞的二次植入效率为２２．６６％。提示白血病细胞存在具有高增殖能力的干细胞性细胞群;原代白血病细胞的再增殖能力低于白血病细胞系。