雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

三氧化二砷逆转肺癌细胞株耐药的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）与肺腺癌细胞株HTB-56、相应耐药细胞株HTB-56／DDP共孵育有无诱导细胞凋亡以及逆转耐药作用。方法：采用人肺腺癌细胞株HTB-56、HTB-56／DDP作为实验细胞，以As2O3和顺铂（DDP）作干预，用MTT法检测As2O3单独和与DDP共孵育后细胞的生长抑制率得半数抑制浓度得出抗药倍数；以电镜观察干预后细胞凋亡情况。结果：不同浓度As2O3作用相同时间或相同浓度作用不同时间对HTB-56、HTB-56／DDP的细胞抑制率有明显差异（P〈0．05）；HTB-56／DDP细胞株与HTB-56细胞株相比，对顺铂的抗性倍数为14．65倍；而与As2O3共孵育对DDP的抗药倍数则为6．35，逆转倍数约为3．5，As2O3对其有增敏及逆转耐药作用和诱导细胞凋亡。结论：As2O3有明显抗肿瘤作用，能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性，对逆转耐药有一定的作用。     

加温与α—干扰素、维拉帕米联合对乳腺癌耐药逆转作用的研究

目的：研究42．5℃高温与α－干扰素、维拉帕米联合对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用。方法：MTT法检测各实验组细胞存活率，计算IC50、耐药倍数和逆转倍数；RT－PCR测定细胞内多药耐药MDR1基因及GST－π基因表达；流式细胞术定量检测细胞表面P170的表达。结果：α－干扰素与维拉帕米联合应用使耐阿霉素（ADM）的IC50降低为0．32μmol/L，优于单用维拉帕米（1．23μmol/L）、α－干扰素（2．29μmol/L），而加温至42．5℃与α－干扰素、维拉帕米联合效果更佳，ADM的IC50由16．6μmol/L降至0．02μmol/L；H－E染色观察细胞形态学无明显变化；各实验组RT－PCR测定仍有MDR1和GST－π的基因表达；但P170表达均有大幅度下降。结论：单独用α－干扰素、维拉帕米、加温至42．5℃均可达到部分逆转耐药的作用，三联合使用能完全逆转乳腺癌耐药细胞（MCF－7／ADR）对ADM的耐药。     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

姜黄素对白血病耐药细胞HL-60/ADR 的抑制及抗肿瘤作用的研究

目的 研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60／ADR的抑制作用。并且与抗癌药物阿霉素对HL-60／ADR细胞的体外杀伤作用进行了比较。方法 应用MTT法检测姜黄素对细胞的毒作用及杀伤作用，用荧光分光光度法进行细胞内阿霉素蓄积测定。结果 姜黄素明显抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，24、48和72h的IC50分别为8.94、5．21和3．82μg／mL。姜黄素与阿霉素合用，在HL60／ADR细胞中均有增敏作用。结论 姜黄素可抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，与阿霉素之间无交叉耐药。     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

异搏定对非p-gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用

目的 :观察异搏定 (verapamil ,Ver)对非p -gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用。方法 :使用二甲氧唑黄比色法 (XTT法 )检测药物敏感性 ,观察Ver对鬼臼乙叉甙 (etoposide ,VP16)的增敏及耐药逆转作用。结果 :单独Ver对HL 60和HL 60 /Adr细胞株的IC50 分别为 2 6.13mg·L-1和 3 9.0 0mg·L-1,单独VP 16对HL 60细胞的IC50 为 2 47.17μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,VP16对HL 60细胞的IC50 值下降为原来的 1/1.73 ;单独VP 16对HL -60 /Adr细胞的IC50 为872 .97μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,IC50 下降至 2 0 8.45 μg·L-1,为原来的 1/4.19,与VP16对HL 60敏感株的IC50 接近。结论 :Ver对非p gp高表达细胞株具有增敏及耐药逆转作用     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

rIL—2、TNF—α、IFN—γ对抗CD3—抗胶质瘤双特异性抗体的协同细胞毒作用

目的：观察细胞因子rIL-2、TNF－α、IFN－γ对抗CD3－抗胶质瘤双特异性抗体（双抗）的协同作用,进一步提高双抗对人脑胶质瘤的治疗作用。方法：以人脑胶质瘤细胞株SHG－44为靶细胞,健康人或胶质瘤患的外周血单个核细胞（PBMC）为效应细胞,以18h ^3H-TdR掺入释放法测定细胞毒活性,采用单比实验和联合作用等对比分析方法,分析各细胞因子（rIL-2、TNF－α、IFN－γ)对双抗诱导的细胞毒性作用的影响。结果：rIL-2、TNF－α、IFN－γ均可协同提高双抗对人脑胶质瘤的细胞毒作用（P＜0．05）。来源于恶性胶质瘤患的效应细胞活性较正常人低,rIL-2与双抗可协同增强其活性。结论：细胞因子rIL-2、TNF－α、IFN－γ可协同提高双抗对效应细胞的活化,充分激活效应细胞,增强抗肿瘤免疫能力。     

五味子乙素对MRP介导的肿瘤多药耐药逆转作用的研究

目的探讨五味子乙素（SchB）对表达MRP1的肿瘤耐药细胞株的逆转耐药作用及相关机制。方法噻唑蓝（MTT）法测定不同浓度SchB对柔红霉素（DNR）抑制HL60／ADR生长及同一浓度SchB对不同化疗药物抑制HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞生长的影响；流式细胞仪检测SchB作用前后，HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞内化疗药物DNR和MRP1特异性底物CFDA积聚的变化。结果4～25μM Sch B作用范围内浓度依赖性下降，逆转倍数显著上升；SchB可有效降低HL60／ADR、HL60／MRP对DNR、长春新碱（VCR）和VP16的IC50，逆转倍数2倍到20倍不等；SchB能够增加DNR和MRP1特异性底物CFDA在细胞内的积聚。结论SchB对同一细胞MDR的逆转与浓度相关，在一定浓度范围内，依浓度增加而增加；SchB可以逆转不同化疗药物对MRP1介导的耐药，其逆转机制与增加化疗药物的积聚能力有关。     

全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)分别与紫杉醇(Taxol)、阿霉素(ADR)单独或联合孵育HL-60细胞株能否增强凋亡诱导作用,并进一步研究bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因在此过程中的作用。方法:1用台盼兰拒染法观察细胞生长活力;2在光镜和电镜下观察细胞形态变化;3用流式细胞仪(FCM)检测药物孵育前后细胞凋亡率(AP)的变化;4用RT-PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因及其家族bax、bcl-x基因的表达水平。结果:1ATRA能增强Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用;2ATRA能增强HL-60细胞对Taxol和ADR诱导的细胞凋亡;3在ATRA与Taxol、ADR联合诱导的HL-60细胞凋亡中,bcl-2、bcl-xl基因表达下降,bax、bcl-xs基因表达增加。结论:ATRA能增加Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用,bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因参与了ATRA与Taxol、ADR联合诱导细胞凋亡的调控。     

Potentiation of arsenic trioxide-induced apoptosis by retinoic acid in retinoic acid sensitive and resistant HL-60 myeloid leukemia cells

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As(2)O(3)) on non-APL acute myeloid leukemia (AML) cells and the interreactive effect between retinoic acid (RA) and As(2)O(3).Methods RA-sensitive (S) and RA-resistant (R) HL-60 non-APL AML cells were used as an in vitro model. Cell number and trypan blue were used to observe cell growth and survival. Apoptosis was determined by morphological changes, using a DNA laddering assay, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) fragment end labeling assay and a flow cytometry assay. Results As(2)O(3) induced apoptosis in both HL-60S and HL-60R cells, As(2)O(3)-induced apoptosis was both time- and concentration-dependent in a therapeutically-achievable As(2)O(3) range (0.25-4.0 μmol/L). Both all-trans retinoic acid (ATRA) and 9-cis retinoic acid (9cRA) potentiated As(2)O(3)-induced apoptosis, as measured by quantitative TdT fragment end labeling and flow cytometry assays in both HL-60S and HL-60R cells (P<0 .05, for all RA+As(2)O(3) combinations vs As(2)O(3) alone in both sublines). Conclusions As(2)O(3) may inhibit the growth of non-APL AML cells by promoting programmed cell death. RA can potentiate As(2)O(3)-induced apoptosis even in RA-resistant HL-60 cells in which the classical ATRA response pathway is repressed owing to a homozygous inactivating mutation in the retinoic acid receptor α. As[2]O[3] can have clinical activity in non-APL cases of AML and the enhanced activity might result from the combined As(2)O(3)-RA therapy.     

As2O3对组织因子、纤溶酶原激活物抑制剂-1和-2表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)在诱导NB4、HL-60和THP-1 白血病细胞凋亡过程中对细胞内组织因子(TF)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)-1和-2 表达的影响.方法使用不同浓度的As2O3处理NB4、HL-60和THP-1 细胞,以生长曲线观察As2O3对细胞体外增殖的影响,并以琼脂糖电泳及流式细胞术观察细胞凋亡情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测经As2O3处理后细胞内TF、PA I-1 和-2抗原含量的变化.结果① 1 μmol/L和8 μmol/L的As2O3分别作用NB4和HL-60细胞24 h后,细胞均出现典型的凋亡;而THP-1细胞在8 μmol/L As2O 3作用24 h后未出现细胞凋亡.② 1 μmol/L As2O3下调NB4细胞内TF抗原含量,与对照组相比差异显著(P<0.01),且TF抗原水平的降低呈As2O3剂量依赖性;而2 μmol/L As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中,细胞内PAI-1抗原含量增加(P<0.0 5).③ 8 μmol/L As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内TF抗原含量增加(P <0.01),但细胞内PAI-2抗原含量降低(P<0.05).④ THP-1细胞在8 μmol/L As 2 O 3处理24 h后,细胞内TF和PAI-2抗原含量均增加(P<0.05和P<0.01). 结论 As2O3对NB4、HL-60和THP-1细胞内的TF、PAI-1和PAI-2的表达有不同的影响.     

蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

氧自由基对内皮祖细胞的损伤及槲皮素的保护作用

目的研究氧自由基对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的损伤及槲皮素(quercetin,Que)的保护作用。方法分离并诱导分化人脐血EPCs,随机分为对照组、过氧化氢(H2O2)组:加入500μmol/L的H2O2建立氧化应激损伤EPCs模型、Que干预组:先分别加入浓度为60μmol/L、90μmol/L、120μmol/L的Que预处理30min后,后加500μmol/L H2O2共同培养。培养24h及48h后使用WST-1法观察EPCs增殖情况。结果与空白对照组比较,60～90μmol/L的Que可以促进EPCs增殖,120μmol/L的Que则表现出抑制EPCs增殖的作用,与培养24h比,在48h对EPCs的抑制作用较为明显。差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,H2O2组EPCs增殖能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。加入60～120μmol/L的Que处理后,损伤后EPCs的细胞增殖能力得到明显改善,且具有明显的时间和浓度依赖性,与H2O2组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论氧化应激损害内皮祖细胞的增殖能力,而槲皮素有显著的改善作用。     

三氧化二砷对HL-60细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

目的: 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)对HL-60细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达的影响。方法: 以HL-60细胞为对象,加入0.0、2.5、5.0、7.5 μmol/L As₂O₃干预48 h。RT-PCR检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果: HL-60细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达随着As₂O₃浓度的增加而减少,5.0和7.5 μmol/L As₂O₃组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。As₂O₃呈剂量依赖性抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达,As₂O₃各组与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论: As₂O₃可抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9的表达,这一效应可能是As₂O₃治疗白血病的分子机制之一。     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系

目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.     

槲皮素对人内皮祖细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的研究氧自由基对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的损伤及槲皮素(quercetin,Que)的保护作用,并探讨可能机制。方法①分离内皮祖细胞并诱导其分化,随机分为:空白对照组;60～120μmol/L Que组;H2O2组;60～120μmol/L Que+H2O2组。②WST-1观察细胞增殖情况;③应用免疫细胞化学染色法观察p-JNK蛋白;④流式细胞术分析细胞凋亡改变。结果①低浓度的Que可以促进EPCs的增殖,而高浓度的Que则表现为抑制其增殖(P<0.05);②Que在60～120μmol/L范围内呈浓度依耐性降低H2O2诱导的EPCs凋亡率(P<0.01);③Que能抑制加入JNK激动剂后EPCs凋亡率的增加(P<0.05)。结论Que可促进H2O2诱导的EPCs的增殖,并通过阻断JNK信号通路抑制其凋亡。Que具有拮抗氧化应激条件下EPCs损伤的潜在作用。