靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。     

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测VEGFRNAi表达载体对VEGF蛋白表达的影响,MTT法检测转染VEGFRNAi表达载体对细胞生长的抑制作用。结果:成功构建VEGFRNAi真核表达载体;VEGFRNAi组VEGF蛋白的表达明显降低,显著低于空载体组和未转染的对照组;前列腺癌PC-3细胞24、48、72h的生长抑制率分别为23.5%、33.5%、40.8%。结论:VEGFRNAi可以抑制前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达和抑制细胞生长,为前列腺癌的生物治疗提供一定的实验基础。     

核干因子在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨核干因子(NS)基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:利用RT-PCR及免疫组化方法对前列腺癌、良性前列腺增生(BPH)及高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)组织中NS基因的表达进行检测,并探讨NS蛋白表达水平与前列腺癌患者临床指标的关系。结果:前列腺癌中NSmRNA表达水平显著高于BPH中的表达水平,NS蛋白在前列腺癌中的强阳性、阳性及弱阳性表达率分别为48.8%、36.6%及12.2%,在BPH中分别为4.0%、32.0%及56.0%,在HGPIN中分别为5.0%、25.0%及60.0%,在前列腺癌中的表达水平显著高于BPH及HGPIN中的水平,具有统计学意义(P<0.05)。NS基因表达水平与前列腺癌的分化程度呈负相关,细胞分化程度越差,NS基因表达水平越高。结论:前列腺癌中高表达NS基因,NS基因在前列腺癌的不良分化和恶性增殖中可能起着重要作用。     

人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的探讨人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用。方法通过血清药理学的方法，制备人参胡核汤高、中、低剂量及空白组的血清。各组与PC-3细胞作用48h、72h后，光镜观察细胞形态学改变；MTT法观察细胞增殖的抑制率；RT-PCR技术检测前列腺特异性抗原（PSA）表达。结果人参胡核汤含药血清各组作用48h、72h后，表现出不同程度的细胞皱缩，边缘毛糙，细胞核固缩或碎裂，细胞体积缩小；各组均可抑制PC-3细胞增殖；降低PSA表达水平。上述指标中，以人参胡核汤含药血清高剂量组作用48h的效果最为明显。结论人参胡核汤含药血清可使PC-3细胞的形态发生改变、抑制PC-3细胞增殖、降低PSA的表达。     

SLP-2对前列腺癌PC-3细胞增殖和早期凋亡的影响

目的探讨SLP-2（stomatin-like protein2）基因对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法合成和构建SLP-2沉默和过表达载体,用Lipofectamine TM2000分别转染5组人前列腺癌PC-3细胞：pcDNA3．1-SLP-2组,空质粒pcDNA3-1组,siRNA—SLP-2组,siRNA阴性对照组以及空白对照组。采用Q-PCR和Western-Blot分别检测PC-3细胞中SLP-2的mRNA和蛋白表达量;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测PC-3细胞增殖;采用细胞线粒体膜电位JC-1试剂盒检测PC-3细胞的早期凋亡情况。结果转染pcDNA3．1-SLP-2质粒和siRNA-SLP-2后PC-3细胞SLP．2基因mRNA表达水平分别为（324．884±16．508）和（0．195±0．016）,蛋白表达水平分别为（5．013±0．284）和（0．296±0．011）,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;转染pcDNA3-1-SLP-2基因48h、72h、96h后Pc。3细胞增殖吸光度值（OD值）分别为（0．714±0．007）、（1．103±0．018）、（1．348±0．018）,均显著高于空白对照组（P〈0．05）。采用siRNA沉默SLP．2基因48h、72h、96h后PC-3细胞增殖率分别为（0．571±0．004）、（0．875±0．010）、（1．044±0．008）,均显著低于空白对照组（P〈0．05）;细胞凋亡结果显示,转染pcDNA3．1-SLP．2和siRNA-SLP-2的PC-3细胞早期凋亡率分别为（2．433±0．577）和（9．197±0．602）,与空白对照组（4．993±0．710）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SLP-2可促进人前列腺癌PC-3细胞的增殖,并抑制细胞的早期凋亡。     

三氧化二砷对前列腺癌细胞株PC-3生长影响的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC 3生长的影响及其机制。　方法 :通过光学显微镜观察As2 O3 处理前后培养的PC 3细胞生长和形态的变化 ,采用MTT法了解不同浓度As2 O3 作用后PC 3细胞的生长抑制曲线 ,应用流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染法分析不同浓度As2 O3 处理的PC 3细胞的凋亡情况。　结果 :As2 O3 作用后 ,PC 3细胞形状变圆 ,体积变小 ,胞质透亮度下降 ,部分细胞脱落悬浮于培养基中。在7.81 2 5、1 5 .6 2 5、31 .2 5 0、6 2 .5 0 0、1 2 5、2 5 0、5 0 0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8h和 72h后 ,MTT法检测细胞生长抑制率分别为(0 .0 6± 0 .99)、(1 5 .0 1± 1 .1 2 )、(2 9.2 1± 1 .31 )、(34.32± 1 .1 4 )、(4 0 .5 1± 1 .81 )、(6 9.39± 1 .74 )、(73.1 9± 2 .4 1 ) %和(0 .0 4± 1 .5 1 )、(1 6 .1 9± 1 .0 4 )、(4 3.6 1± 1 .1 2 )、(5 6 .6 6± 1 .2 3)、(73.1 3± 2 .6 1 )、(85 .2 2± 1 .74 )、(91 .4 1± 2 .81 ) %。用流式细胞仪检测经过 0 (对照组 )和 0 .1、1 .0、3.0、5 .0、2 0 .0、5 0 .0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8、72h后的PC 3细胞 ,凋亡率分别为 0 .87%、5 .33%、8.94 %、9.6 6 %、1 2 .5 6 %、4 5 .5 9%、6 9.0 9%和 0 .1 3%、1 3.4 9%、     

NF-κB抑制剂对前列腺癌PC-3细胞STAT3核转位的影响

目的:观察IL-6刺激后的前列腺癌PC-3细胞STAT3和NF-κB的表达情况;验证NF-κB抑制剂咖啡酸苯乙基酯(CAPE)对PC-3细胞IL-6和STAT3表达的影响。方法:20 ng/ml IL-6分别作用于PC-3细胞0、5、10、20、30、45 min后,Western印迹和实时荧光定量PCR检测STAT3和NF-κB蛋白和mRNA水平的表达差异;流式细胞技术检测细胞周期。采用TNF-α或TNF-α联合CAPE作用于PC-3细胞,收集培养液上清,ELISA检测IL-6的表达;同时用Western印迹检测p-STAT3的表达。结果:IL-6刺激PC-3细胞后,p-STAT3蛋白的表达明显上调,细胞增殖指数明显增高。TNF-α作用于PC-3细胞后,培养液中IL-6的表达上调,同时p-STAT3蛋白的表达亦上调(P<0.05)。CAPE联合TNF-α作用于PC-3细胞后,培养液中IL-6的表达及p-STAT3蛋白的表达均明显低于TNF-α作用后的表达水平(P<0.05)。结论:CAPE能抑制TNF-α引起的IL-6的分泌,从而抑制IL-6引起的STAT3核转位;通过CAPE抑制NF-κB表达,继而影响STAT3等相关细胞信号传导途径,可能成为前列腺癌治疗的一条新途径。     

p27^kipl高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭转移的影响

目的探讨外源性人p27kip1的高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人p27kip1基因的腺病毒(Ad-p27kip1)体外转染人前列腺癌PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测目的基因不同水平的表达,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测PC-3转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化.以Ad-X-gal病毒作为对照.结果 RT-PCR、Western印迹法检测转染Ad-p27kip1后PC-3细胞的p27kip1-mRNA(320bp)、p27蛋白(27×103)表达阳性,转染后对PC-3细胞的生长有抑制作用,出现明显的G0-G1期阻滞,早期细胞凋亡率有所增加,与对照组比较差异有显著性,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制.结论重组腺病毒介导的人p27kip1基因在体外对前列腺癌细胞系PC-3的细胞增殖和侵袭力有明显抑制作用,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具.     

PTEN和p27Kip1共表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的　通过腺病毒介导转染前列腺癌PC 3细胞 ,探讨人 10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物 (PTEN)和p2 7Kip1对肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的影响及二者的协同作用。方法　构建携带人PTEN和p2 7Kip1基因的腺病毒载体 ,体外转染PC 3细胞 ,通过RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达。采用细胞生长试验、流式细胞仪检测PC 3转染前后细胞增殖、细胞周期和早期凋亡率的变化。结果　病毒滴度Ad PTEN为 1 8× 10 7pfu ml、Ad p2 7Kip1为 1 2× 10 9pfu ml,RT PCR检测有PTEN mRNA(46 2bp)和p2 7Kip1 mRNA (32 0bp) ,Westernblot检测有PTEN蛋白 (6 0KD)和P2 7蛋白 (2 7KD)特异表达 ,可明显抑制PC 3细胞的增殖 ,诱导细胞凋亡 ,联合基因治疗组与单基因组相比差异有显著意义。结论　成功构建携带人PTEN和p2 7Kip1的重组腺病毒载体 ,在前列腺癌细胞株PC 3得到了稳定、特异的高表达 ,联合基因疗法有望成为治疗前列腺癌的有效方法。     

靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的:研究中药成分靛玉红对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:采用MTT方法研究靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用,采用Western印迹检测细胞周期蛋白cyclin D1及c-myc表达,采用流式细胞术检测细胞周期。结果:靛玉红降低前列腺癌细胞的存活率呈浓度依赖性,当浓度为5μmol/L时,可降低存活率至52.2%,当浓度为10μmol/L时,PC-3细胞存活率降至13.6%。靛玉红浓度为5μmol/L时可明显抑制PC-3细胞的细胞周期,结果显示G0/G1期PC-3细胞增多,而与此同时S期和G2/M期细胞减少。此外,靛玉红可以抑制细胞周期进展关键调控蛋白cyclin D1,以及与之相关Wnt信号通路的下游基因c-myc的表达。结论:靛玉红可以抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能与其抑制细胞周期以及抑制Wnt信号通路有关。     

葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。方法:经预试选用不同浓度(100、200、300μg/ml)的GSE分别作用PC-3细胞24、48、72h,以原代培养的1～3日龄SD大鼠肾细胞作为正常对照;采用四唑氮蓝(MTT)显色法检测GSE对PC-3细胞和SD大鼠肾细胞的生长抑制作用。结果:GSE以浓度和时间依赖性方式抑制PC-3细胞生长(P<0.01),对原代培养SD大鼠肾细胞生长仅有轻度抑制作用。结论:GSE可抑制前列腺癌PC-3细胞生长,有可能成为治疗前列腺癌的一种新药物。     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）对非雄激素敏感的前列腺癌PC-3细胞株的凋亡诱导作用及分子机制。方法：以体外培养的PC-3细胞为研究对象,采用含不同浓度的VES培养液作用于细胞。采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞增殖活性;采用Wright—Giemsa染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并测定Fas蛋白表达水平;采用酶联免疫法检测转化生长因子口（TGF-β）的表达水平的变化。结果：VES可显著抑制PC-3细胞的生长及增殖,光镜下可见到PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变。FCM细胞周期分析显示G2／M期细胞增加而s期细胞明显减少,Fas蛋白和TGF-β表达明显上调。结论：VES可诱导前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Fas、TGF-β的表达有关。     

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。     

The multikinase inhibitor sorafenib induces caspase-dependent apoptosis in PC-3 prostate cancer cells

The present study investigated the effects of the multikinase inhibitor sorafenib on androgen-independent can- cer cells viability and intracellular signaling. Human androgen-independent PC-3 prostate cancer cells were treated with sorafenib. At concentration that suppresses extracellular signal-regulated kinase phosphorylation, sorafenib treatment reduced the mitochondrial transmembrane potential. Sorafenib also down-modulated the levels of mye- loid cell leukemia 1, survivin and cellular inhibitor of apoptosis protein 2. Sorafenib induced caspase-3 cleavage and the mitochondrial release of cytochrome c. However, no nuclear translocation of apoptosis inducing factor was detected after treatment and the pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK had an obvious protective effect against the drug. In conclusion, sorafenib induces apoptosis through a caspase-dependent mechanism with down-regulated antiapoptotic proteins in androgen-independent prostate cancer cells in vitro.     

参附注射液对前列腺癌PC-3细胞凋亡诱导的影响

目的:研究参附注射液(SF)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及可能机制。方法:实验设立对照组和SF 50、100、200μl/ml组,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测p53 mRNA表达。结果:与对照组比较,作用24、48、72 h后,SF 50、100、200μl/ml组PC-3细胞存活率显著减少(P均0.05)。SF各组24 h存活率分别为(93.76±2.63)%、(81.21±1.80)%、(18.01±3.84)%;48 h存活率分别为(94.67±1.11)%、(78.33±2.89)%、(10.34±1.44)%;72 h存活率分别为(91.30±0.47)%、(36.67±1.56)%、(1.33±0.32)%,呈浓度和时间依赖性。作用48 h后,p53 mRNA表达明显升高(P0.05)。结论:SF可以诱导PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与p53表达增高相关。     

多肽K237对PC-3M细胞增殖及bax、bcl-2 mRNA表达的影响

目的:研究多肽K237对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用,及其可能的作用机制。方法:将培养的PC-3M细胞分为4组:实验组(分别以50、100、200μmol/L的多肽K237处理48h)和对照组(K237浓度为0μmol/L),采用MTT法观察多肽K237对前列腺癌PC-3M细胞增殖的影响,用RT-PCR法检测bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果:不同浓度的多肽K237处理48h后,PC-3M细胞形状变圆,体积变小,胞质透亮度下降,部分细胞脱落悬浮于培养液中。在50、100、200μmol/L的多肽K237作用48h后,MTT法检测的细胞生长抑制率分别为(12.6±0.95)%、(17.8±0.99)%、(27.2±1.12)%。RT-PCR结果显示:50、100、200μmol/L实验组和对照组的bax/β-actin值分别为0.919±0.071、0.971±0.083、0.992±0.102,(0.889±0.06),bcl-2/β-actin值分别为0.896±0.085、0.791±0.084、0.764±0.702,0.922±0.097,3组中上述两项指标均较对照组有明显变化(P均<0.01),其中,baxmRNA表达水平上调,而bcl-2mRNA表达水平下调,上述作用呈现剂量效应关系。结论:多肽K237可能通过影响bax、bcl-2mRNA的表达来诱导PC-3M细胞凋亡,从而抑制前列腺癌细胞的增殖。     

Patterns of metastasis by the human prostate cancer cell line PC-3 in athymic nude mice

Cells from the PC-3 human prostate cancer cell line were evaluated in athymic nude mice in order to determine the influence of size of the primary tumor and site inoculation on the incidence and pattern of metastasis. At autopsy, all organs, including the skeleton, were evaluated for metastasis. Subcutaneous injections resulted in metastases to the draining axillary lymph node and lungs (56% and 13%, respectively), and were correlated with size of the primary tumor. Tail vein injection resulted in a high incidence of lung metastasis, while injection into the peritoneal space, spleen, and seminal vesicles resulted in intraabdominal tumor growth, liver metastasis, and large tumors within the seminal vesicles, respectively. Skeletal metastases were not observed in any of the animals studied. We conclude that injection of PC-3 cells into various sites results in different patterns of metastasis, but may not constitute an entirely suitable animal model of human prostate cancer due to the lack of metastasis to the skeleton.