灵孢多糖对脂多糖诱导的原代多巴胺能神经元变性的保护作用

 【目的】观察灵孢多糖对脂多糖诱导的原代多巴胺能神经元变性的保护作用。【方法】建立原代中脑多巴胺能神经元与胶质细胞的共培养，随机分为6组：对照组、脂多糖组（20ng／mL）；单纯灵孢多糖组、脂多糖＋灵孢多糖（50，100，300μg／mL）3组。通过免疫组化检测酪氨酸羟化酶，OX-42的阳性细胞数，以RT-PCR检测TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达。【结果】灵孢多糖（100，300μg/mL）组的酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显多于脂多糖组，分别为（30．1±3．1，34．2±3．2，23．4±2．8）。脂多糖组激活的小胶质细胞体积增大，细胞数量增多（30．6±4．5），TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达增高，但经较大剂量灵孢多糖（100，300μg／mL）预处理后，小胶质细胞的激活被抑制，总的细胞数量显著减少（26．4±5．1，25．1±4．6），TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达量降低（P〈0．01）。【结论】灵孢多糖预处理对脂多糖诱导的原代中脑多巴胺能神经元变性具有保护作用，可能是由于灵孢多糖的预处理阻断了由脂多糖诱导的小胶质细胞的激活，从而减少了TNF-α mBNA和iNOS mRNA的表达。     

诱导型一氧化氮合酶在脂多糖诱导多巴胺能神经元变性时的变化研究

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达上调是否参与脂多糖(LPS)诱导的多巴胺(DA)能神经元变性。方法脑立体定位注射5μgLPS至大鼠脑黑质,观察不同时间点(6、12h,1、3、7d),iNOSmRNA及蛋白表达的动态变化;化学比色法检测黑质NO释放量以及iNOS活性改变。结果iNOSmRNA和蛋白的动态变化为6h开始出现增高,1d达高峰,3d开始下降,7d后基本消失。1d时iNOS阳性细胞数(45.30±4.63)显著高于PBS对照侧iNOS阳性细胞数(0.11±0.04)(P<0.01)、RT-PCR、Western印迹法显示1d组iNOSmRNA和iNOS蛋白表达明显多于正常对照组和PBS对照侧;同时发现iNOSmRNA和蛋白过度表达,并促进NO释放,iNOS活性升高。结论iNOS上调可能是LPS诱导DA能神经元变性机制中重要的因素之一。     

白藜芦醇对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

 目的 观察白藜芦醇(Res)对脂多糖（LPS）所致大鼠黑质多巴胺能（DA）神经元损伤的保护作用。方法 黑质内注射LPS制作帕金森病（PD）大鼠模型。应用Res对实验动物进行处理。通过行为学、酪氨酸羟化酶（TH）、核因子κB（NF-κB）等免疫组化及免疫印迹技术观察Res对DA能神经元损伤的作用。结果 对照组大鼠无行为学变化,PD组大鼠平均旋转圈数为（196.90±9.52）圈,Res组为（106.57±7.89）圈,差异有统计学意义（P<0.01）。TH免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质TH阳性神经元数量较多,胞体较大,突起明显;PD组神经元数量明显减少（P<0.01）,甚至消失,神经元胞体萎缩,突起亦不清晰。Res组TH阳性神经元数量与PD组相比明显增加（P<0.01）,神经元形态变化亦不明显。NF-κB免疫组化结果表明,对照组黑质仅见少数NF-κB阳性细胞,无明显核转位现象;PD组黑质NF-κB阳性细胞较多,胞质呈黄褐色,部分细胞核也着色,有明显核转位现象;与PD组相比,Res组NF-κB阳性细胞数明显减少（P<0.01）。小胶质细胞特异性抗体（OX-42）免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质小胶质细胞多呈静止的“分枝样”状态,PD组多为激活状态,呈典型的“阿米巴样”;Res组激活状态的小胶质细胞与PD组相比明显减少,形态介于静止和激活状态之间。Western blot分析结果显示,与对照组相比,PD组TH蛋白表达减少,NF-κB P65蛋白表达明显增高（P<0.01）;与PD组相比,Res组TH蛋白表达增加,NF-κB P65蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 Res可对LPS所致黑质DA能神经元损伤起防护作用,具有抗炎及神经保护作用。     

尼古丁对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的：观察尼古丁（NIC）对脂多糖（LPS）诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法：60只大鼠随机分为4组,每组15只。LPS组（L组）、NIC组（N组）和NIC＋α7型烟碱乙酰胆碱受体（nAChR-α7）阻断剂α-银环蛇毒素组（α-BTX）（M组）分别腹腔注射PBS、NIC和NIC与α-BTX,连续4周,并于2周末一次性黑质内注射LPS。对照组（C组）均给予PBS。4周末进行阿朴吗啡诱导的旋转试验,并用免疫组化方法观测黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数量及离子钙结合蛋白1（Iba1）阳性细胞的形态。结果：4组大鼠旋转实验阳性率及30min内旋转圈数差异有统计学意义（χ2=10.179,P=0.006;F=54.681,P〈0.001）,TH免疫阳性神经元数差异有统计学意义（F=861.541,P〈0.001）。与N组相比,L组及M组旋转实验阳性率降低,旋转圈数减少（P〈0.05）,TH免疫阳性神经元数减少（P〈0.05）。N组Iba1阳性细胞多呈静止期的形态;L组与M组细胞形态相似,大多呈活化期的形态。结论：NIC可能通过nAChR-α7抑制小胶质细胞的活化,对LPS诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元起保护作用。     

脂多糖对大鼠多巴胺能神经元毒性作用的研究

目的　建立新的帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)动物模型 ,探讨其发病机制。方法　在大鼠脑黑质(substantianigra ,SN)内注射脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)后 ,按大鼠不同存活期用高效液相色谱 (HPLC)来测定脑内多巴胺 (Dopamine,DA)及其代谢产物的含量 ;用免疫组化法观察酪氨酸羟化酶 (Tyrosinehydroxylase ,TH)阳性神经细胞、小胶质细胞的形态及数量变化。结果　DA及其代谢产物的含量在LPS注射侧随时间不同有不同程度下降 ,于第 14天达到最低 (P <0 0 1) ;注射侧黑质TH阳性神经元可以达到全部消失 ,该处可见大量被激活并有形态改变的小胶质细胞。结论　LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元的损害     

脑源性神经营养因子在脑室注射脂多糖大鼠黑质多巴胺能神经元变性中的作用

目的观察脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠黑质多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康雄性SD大鼠48只,采用抽签法将大鼠随机分为LPS实验组和0.9%氯化钠注射液(NS)对照组,经大鼠右侧脑室一次性注射LPS20μL(1.25g/L)或0.9%氯化钠注射液20μL。给药后2周、4周、12周、24周用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察黑质多巴胺能神经元的变化,免疫组化及酶联免疫吸附实验(enzyme immunoassay system,ELISA)检测黑质纹状体系统BDNF表达的变化。结果①TH免疫组织化学染色结果显示,大鼠黑质多巴胺能神经元数目在LPS给药后期减少,24周时LPS实验组大鼠黑质TH阳性神经元数量为NS对照组的75.4%(P<0.01);②BDNF免疫组化结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质部位BDNF阳性细胞的表达较NS对照组高,而到12周和24周时其表达比NS对照组明显下降。ELISA检测结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质纹状体内BDNF表达是NS对照组的186.3%(P<0.01),而12周和24周时分别是NS对照组的42.3%(P<0.01)和61.0%(P<0.05)。结论脑室内注射LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元变性,这一病变过程呈慢性迟发性。该模型大鼠黑质TH阳性神经元变性丢失前即出现黑质纹状体系统BDNF表达减少,提示BDNF表达减少可能是黑质多巴胺能神经元变性丢失的原因之一。     

塞来昔布对脂多糖所致PD大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的 观察塞来昔布(CB)对脂多糖(LPS)所致大鼠黑质多巴胺能(DA)神经元损伤的保护作用.方法 黑质内注射LPS制作帕金森病(PD)大鼠模型.应用CB对实验动物进行处理.采用行为学、酪氨酸羟化酶(TH)、环氧化酶-2(COX-2)等免疫组化及免疫印迹技术观察CB的神经保护作用.结果 对照组大鼠无行为变化,PD组大鼠平均旋转圈数为196.90±9.52,CB组为109.30±9.38,差异非常显著(P＜0.01).TH免疫组化表明,对照组TH阳性神经元数量较多,胞体较大,突起明显;PD组神经元数量明显减少或消失(P＜0.01),神经元胞体萎缩,突起不清晰;CB组TH阳性神经元数与PD组相比明显增加(P＜0.01),神经元形态变化亦不明显.COX-2免疫组化表明,对照纽黑质偶见COX-2阳性细胞,PD组见大量COX-2阳性细胞;CB组COX-2阳性细胞数与PD组相比明显减少(P＜0.01).小胶质细胞特异性抗体(OX-42)免疫组化表明,对照组小胶质细胞多呈静止的"分枝样"状态;PD组多为激活状态,呈典型的"阿米巴样";CB组激活状态的小胶质细胞与PD组相比明显减少,形态为高度分枝状态.Western blotting分析结果相同.结论 CB可防护LPS所致黑质DA能神经元损伤,具有神经保护作用.     

氨基胍对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的保护作用

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）特异性抑制剂氨基胍（AG）对帕金森病模型小鼠黑质内多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察和免疫印迹法,观察PD小鼠模型的行为学表现,及腹侧中脑（包括VTA和SN）iNOS、酪氨酸羟化酶（TH）表达水平的变化。并观察给予iNOS抑制剂AG后对上述变化的影响。结果：与对照小鼠相比,PD小鼠出现PD典型的行为学表现,腹侧中脑TH含量下降约77%,同时i-NOS含量大幅度升高。经iNOS抑制剂AG处理的PD小鼠行为表现明显减轻,腹侧中脑TH含量仅下降约41%,腹侧中脑iNOS含量也较模型组明显为低。结论：iNOS的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关;AG可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用。     

神经营养因子对体外培养多巴胺能神经元营养作用比较研究

目的：比较5种神经营养因子对体外培养多巴胺能（DA）神经元营养作用差别。方法：在培养孕14－16d大鼠胚胎黑质神经元中加入5种神经营养因子（NTF）。采用免疫组化染色及计算机图像的分析系统对培养细胞进行观察。结果：脑源性神经营养因子（BDNF）、血小板源性生长因子（PDGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)能促进中脑DA神经元发育,提高神经元及长突起神经元存活率。BDNF在整个培养期都有较强营养作用,PDGF在早期、bFGF在中期有轻度作用,神经生长因子（NGF）和白细胞介素－6（IL－6）则无作用。结论：体外DA神经元培养过程中,BDNF有较强的神经营养作用,PDGF和bFGF次之,NGF和IL－6无作用。     

刺五加多糖对H202诱导海马细胞凋亡的保护作用

目的 研究刺五加多糖（Acanthopanax senticosus polysaccharide，ASPS）对大鼠海马细胞的抗凋亡作用，并探讨其机制。方法 运用海马神经细胞原代培养技术，采用H202诱导建立细胞凋亡模型。观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞活性；免疫组化法检测细胞中Bax与Bcl-2的蛋白表达。结果形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻；ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01），ASPS组Bcl-2表达量较高而Pax表达量较低。结论ASPS能够提高海马神经细胞的抗凋亡能力，并具有一定的浓度依赖性。     

热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析细胞形态 ,Hoechst332 5 8染色分析核形态 ,琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段 ,Westernblotting检测HSP70 表达。【结果】小脑颗粒神经元在去极化条件 (2 5mmol/LKCl)下生长良好 ,复极化 (5mmol/LKCl )后 2 0h ,相差显微镜下神经元胞体缩小 ,突起断裂。Hoechst 332 5 8染色见核固缩和凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡的典型生化特征—DNA梯状条带。预先对小脑颗粒神经元进行热刺激处理 (4 4℃ )不同时间 (6 0min ,90min)再复极化 ,神经元凋亡数明显减少 ,且随热处理时间延长 ,保护作用增强。Westernblotting结果 :随热刺激 (4 4℃ )处理时间延长 ,HSP70 表达量逐渐增加。【结论】热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用。这一保护作用可能涉及HSP70 。     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

刺五加多糖对H202诱导海马细胞凋亡的保护作用

目的 研究刺五加多糖（Acanthopanax senticosus polysaccharide，ASPS）对大鼠海马细胞的抗凋亡作用，并探讨其机制。方法 运用海马神经细胞原代培养技术，采用H202诱导建立细胞凋亡模型。观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞活性；免疫组化法检测细胞中Bax与Bcl-2的蛋白表达。结果形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻；ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01），ASPS组Bcl-2表达量较高而Pax表达量较低。结论ASPS能够提高海马神经细胞的抗凋亡能力，并具有一定的浓度依赖性。     

灵芝多糖肽和小分子灵芝多糖肽抗肿瘤作用和免疫调节作用比较

目的 比较灵芝多糖肽（GLPP）和小分子灵芝多糖肽（GL-LPP3）离体抗肿瘤作用及对免疫调节作用.方法 以GLPP和GL LPP3作用于肿瘤细胞株（SW480、MCF-7、K562细胞）,以5 Fu作对照,24、48 h后收集细胞,考察其对肿瘤细胞的抑制率.建立混合淋巴细胞培养体系,以环孢素A为对照,用MTT法测定24,48,72 h细胞活性,观察GLPP和GL-1PP3对免疫的调整作用. 结果 GLPP和GLLPP3对肿瘤细胞株SW480、MCF-7、K562存活率无抑制作用;GLPP和GL-LPP3可增强淋巴细胞免疫作用. 结论 GLPP和GL-LPP3体外不能直接抑制或杀伤肿瘤细胞,可增强T淋巴细胞免疫功能.     

超声-微波协同萃取灵芝多糖最佳工艺研究

目的 获得超声-微波协同萃取灵芝多糖最佳工艺.方法 以苯酚-硫酸法测定灵芝多糖的含量,用正交试验考察灵芝多糖的最佳提取工艺.结果 灵芝多糖的最佳提取工艺是提取温度75℃、料液比1:10、浸提时间30min,在此条件下灵芝多糖的提取率为0.95%.结论 利用超声-微波协同萃取灵芝多糖省时,提取率高,该方法为提取灵芝多糖提供了新途径.     

灵芝多糖抗肿瘤免疫机制的研究进展

灵芝多糖因其免疫调节功能、抑制肿瘤生长且无不良反应等特点,被认为是通过调节机体免疫功能达到抗肿瘤目的的一味良好的药物。其抗肿瘤作用可能通过抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡、抑制肿瘤血管新生、调节机体免疫等途径实现,其中调节细胞因子、机体固有免疫系统、T/B淋巴细胞及黏膜免疫系统等的免疫机制可能是其发挥抗肿瘤作用的主要机制。     

灵芝多糖对小鼠糖耐量的影响

目的 :探讨灵芝多糖对正常和糖尿病小鼠糖耐量的影响。方法 :采用腹腔注射四氧嘧啶 (2 0 0 mg· kg- 1 )诱导小鼠造成糖尿病模型 ,分别观察单次给予 0 .5 g·kg- 1、1.5 g· kg- 1灵芝多糖后 ,正常和糖尿病小鼠糖耐量的改变。结果 :灵芝多糖 0 .5 g· kg- 1仅能显著降低糖尿病小鼠餐后 1h和 2 h血糖 ,而灵芝多糖 1.5 g·kg- 1对正常和糖尿病小鼠餐后 1h和 2 h血糖均有显著降低作用。结论 :灵芝多糖能改善正常和四氧嘧啶糖尿病小鼠糖耐量。