抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb),并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断。方法:以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,经筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗IgGmAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernblot鉴定mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)。以纯化的mAb建立免疫荧光染色法,并用于肾小球肾炎的诊断。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人IgGmAb的细胞株,腹水效价为1×10-6,Ig亚类为IgG2a(κ),相对亲和力达到1×10-5,Westernblot显示在相对分子质量(Mr)为53×103处出现特异性的条带,说明mAb能与IgG的γ链特异性结合。免疫荧光染色的结果显示,IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达。结论:获得1株能特异性识别人IgG的mAb,可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断。     

抗人胃癌单克隆抗体的研究——Ⅱ.抗人胃癌单克隆抗体(GMG_1系列)的反应性鉴定

用国内胃癌细胞株GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了一系列抗人胃癌细胞的McAb。经IF和ABC染色法进行免疫组织化学鉴定,按其反应特性可分为三种类型:(1)只与靶细胞反应,基本上不与其它组织细胞反应。(2)不但与靶细胞反应也与所有正常及异常组织反应。(3)与靶细胞反应还与某些癌瘤等组织细胞反应,但与绝大多数正常组织细胞不反应。对于第三类抗体进行了吸收试验;证明经靶细胞吸收后反应强度明     

抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定

用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M~(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1～135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M~(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。     

抗人IgG单克隆抗体在IgG抗-HBc检测中的初步应用

本文对分泌高滴度抗人IgG的杂交瘤进行克隆化培养,获得了单克隆抗人IgG抗体。其中一株(HE_(15)D_3)经免疫扩散等试验证实为抗人IgGγ链特异性抗体。但抗人IgG的亚类特异性尚待鉴定。 用此株单克隆抗体包被聚苯乙烯板(ELIA抗体捕获法)检测了236例肝炎患者及40例健     

抗人IgG单克隆抗体的研究Ⅳ.酶标试剂的实际应用

<正> 我们在建立8株分泌抗人IgG单克隆抗体(以下简称McAb)的细胞,并对所得McA’进行了特异性、结合力和鼠Ig亚类等对比分析的基础上,选择其中三种由不同杂交瘤细胞诱生的小鼠腹水,经纯化和用辣根过氧化物酶标记,作为第二抗体试用,获得满意的结果,现简报如下。     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

按常规方法将O型人红细胞免疫的BaLb/C小鼠脾细胞和NS-1骨髓瘤细胞融合。两次克隆后,获得两株分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,H_4D_1和H_4E_(10)。细胞培养上清液经透析浓缩2～5倍,同小鼠Ig分型血清作免疫双扩散试验。结果     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

本研究利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与鸡IgG免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,建立了5个能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(鸡IgG-McAbs)的杂交瘤细胞株(C_(41)、C_(42)、C_(43)、C_(44)C_(45));染色体数分别平均为99、99、101、102和99。用琼脂双扩散试验(ID)、间接ELISA和ELISA双抗体夹心法等试验证明:杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体只与鸡IgG发生特异性反     

抗人血清载脂蛋白AⅡ单克隆抗体的制备及鉴定

载脂蛋白AⅡ(ApoAⅡ)为高密度脂蛋白(HDL)的重要成分之一,多数研究认为与动脉硬化、冠心病呈负相关,也有人认为不相关。这可能与免疫测定所用的特异性较价有关。因此,我们在国内首先制备了ApoⅡA的单抗,以期用于ApoAⅡ的测定和动脉硬化的诊断。     

抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。     

抗人BPI23单克隆抗体的制备和鉴定

目的 采用杂交瘤技术制备抗人BPI23单克隆抗体,并对其应用进行初步分析。方法 免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合;用间接ELISA法和Western - blot筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法亚克隆3次获得稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注入小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单抗并对抗体类型进行鉴定;用Western-blot分析抗体的特异性;用间接ELISA法测抗体效价;将分离纯化的正常人外周血中性粒细胞和单个核细胞制成涂片,用抗人BPI23单克隆抗体进行免疫染色。结果 获得3个（1B4、9C12和2H11）稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型分别为κ型IgM、κ型IgG1和κ型IgG1;抗体效价分别为1.28×105、1.28×105和4.1×106,纯化后抗体含量分别为0.208g/L、2.03g/L和3.88g/L;3种纯化抗体均能与本实验制备的人BPI23和市售人BPI55标准品特异性结合,而不能与小鼠BPI25和人LBP结合;在免疫组化实验中,1B4、9C12和2H11单抗均能与人中性粒细胞中的BPI特异性结合。结论 成功制备了人BPI23特异性单克隆抗体,为BPI检测试剂盒的研制奠定了基础。     

大鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目前抗人甲胎蛋白单克隆抗体(hAFPMcAb)均来自小鼠系统,主要应用于临床诊断和肝细胞癌的选择定位与导向治疗等方面。hAFP McAb的临床应用前景广阔,但国内开展尚不多。本文利用大鼠杂交瘤系统,并采用一种新的筛选方法,以建立分泌hAFP McAb的大鼠杂交瘤。 1 材料和方法 1.1 hAFP抗原 本室制备。     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

Ｆ蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量（Ｍｒ）为４４０００。正常人肝组织中大约含Ｆ蛋白２７４ｍｇ／ｇ〔１，２〕,而血清中仅含０．２ｍｇ／Ｌ,提示血清Ｆ蛋白作为判断肝损伤程度的可能性。为对Ｆ蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,１９９５年以来,我们先后制备了３株抗人Ｆ蛋白的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并进行了初步鉴定。１材料和方法１．１材料人Ｆ蛋白抗原的制备〔３〕：取肝外伤手术切除的新鲜肝组织５０ｇ,剪成约５ｍｍ３的组织碎块后,置于含有１ｇ／ＬＩＶ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ）…     

沙门氏菌单克隆抗体研究 Ⅱ.诊断用成套沙门氏菌单克隆抗体的鉴定

应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备了与沙门氏菌属诊断血清相对应的成套11种单克隆抗体诊断试剂,包括:抗O-2,4,7,9;抗H-a,b,c,d,i;抗Vi和抗A-F群“O”多价抗体。经711株已知菌种(包括沙门氏菌563株,非沙门氏茵148株)采用玻片凝集试验进行考核鉴定,结果证明:它们只选择性地与具有相应抗原的菌株出现快速而明显的凝集,而不与其它菌株发生交叉反应,其特异性和敏感性达到并超过目前的沙门氏茵诊断血清制检规程的要求。表明这组单克隆抗体完全可以取代以往用传统方法生产的家兔免疫诊断血清,用于沙门氏菌的初步鉴定。     

抗人肝癌单克隆抗体的制备初步鉴定和导向研究

本文以人肝癌细胞株SMMC-7721免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与鼠Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合筛选获得1株抗人肝癌单克隆抗体,SM-5(IgG1),分子量约150 000kD。 纯化的抗人肝癌单克隆抗体SM-5,与多种人肝癌细胞株SMMC-7721,7404,     

抗人γ干扰素的单克隆抗体——Ⅱ.具有中和活性的抗体

人γ干扰素(Hu IFN_γ)是一个分子量约17KD;由146个氨基酸组成的单一多肽。除具有诱导靶细胞的抗病毒状态外,还具有抗肿瘤及免疫调节作用。虽然,对Hu IFN_γ分子生物学特征已有大量研究,但其活性位点还不清楚。解决这一问题的途径之一是利用具有中和活性的单克隆抗体(McAb)。本文作者不但制备了具有中和活性的抗Hu IFN_γ McAb,而且用这些McAb建立了敏感的;可选择性测定具有生物学活性的HuIFNr的夹心ELISA方法。