三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7404、SMMC-7721 和肝癌裸鼠移植瘤模型的作用

砒霜主要成分为三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3) ,用于治疗急性早幼粒细胞白血病效果良好 ,且毒副作用较低[1] 。本研究旨在观察Ａｓ2 Ｏ3对人肝癌细胞株ＢＥＬ 740 4,ＳＭＭＣ 772 1和肝癌裸鼠移植瘤模型的影响 ,探讨Ａｓ2 Ｏ3对原发性肝癌的作用及其机制 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.药物和试剂 :0 .1%Ａｓ2 Ｏ3溶液购自哈尔滨医科大学第一附属医院 ;噻唑蓝 (ＭＴＴ)购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;细胞凋亡原位检测试剂盒为德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。小鼠抗增殖细胞核抗原多克隆抗体为美国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司产…     

三氧化二砷对膀胱癌细胞株BIU-87影响的研究

三氧化二砷 (As2 O3 )用于白血病的治疗疗效确定 ,目前亦有诱导实体肿瘤细胞凋亡的报道[1] 。我们采用免疫组化和流式细胞术观察As2 O3 对人膀胱癌细胞系BIU 87的诱导凋亡作用。现报告如下。材料与方法　膀胱癌细胞株BIU 87由北京大学泌尿外科研究所提供 ,As2 O3 由伊达药业有限公司提供。Bcl 2、Bax、p5 3抗体及免疫组化试剂盒购自迈新公司。将指数生长期BIU 87细胞随机分4组 ,A组为对照组 ,B组含 2 0 μg/ml丝裂霉素 (MMC) ,C组含 18.8μg/mlAs2 O3 ,D组含 37.6 μg/mlAs2 O3 。 2h后换 10 %培养液 3次。去除药物后第1、2、3…     

维生素K3对肝癌细胞株的生长抑制作用及其与三氧化二砷的联合效果

目的 探讨维生素K3(VK3)对肝癌细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷(As2O3)的联合效果.方法 体外培养人肝癌细胞株(HepG2),分别以VK3,As2O3以及二者联合孵育细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测对肝癌细胞的抑制率,Annexin-v/Pl双染色流式细胞技术检测凋亡细胞的百分数,用激光共聚焦显微镜,TUNEL观察细胞凋亡后的形态.结果 体外实验表明VK3能抑制HepG2细胞生长并呈剂量和时间依赖性(P=0.002),细胞死亡方式以凋亡为主;VK3与As2O3联合应用时,二者具有协同作用(P=0.005).结论 笔者的研究表明VK3能抑制肝癌细胞生长,并且与As2O3联合时有协同作用,降低了As2O3的副作用,为肝癌的治疗提供了广阔的前景.     

三氧化二砷抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的了解三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用。方法采用MTT法观察As2O3对HepG2细胞黏附能力的影响,以Transwell检测As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭能力的影响。结果As2O3作用后30、60、90、120min时的细胞黏附率较对照组均明显下降,不同时间组与对照组之间差异均有显著性（P〈0.05）;As2O3作用后游走及侵袭穿膜细胞数也较对照组明显下降（P〈0.01）。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力。     

三氧化二砷对肝癌细胞CD44v6、Ezrin基因表达的影响

目的 观察肝癌HepG2细胞转移相关基因CD44v6、Ezrin mRNA表达及三氧化二砷(As2O3)对其表达的影响.方法 以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HepG2细胞中CIM4v6、Ezrin基因mRNA的表达及As2O3作用后其表达水平的变化.结果 HepG2细胞CD44v6及Ezrin mRNA均有表达.CD44v6-mRNA表达水平为1.57±0.47;经0.25 mg/L As2O3作用4、6、8 d后其表达水平分别下降到0.95±0.25、0.90±0.24和0.63±0.19(P<0.05),下降水平呈时间依赖;Ezrin-mRNA表达水平为0.70±0.18,加入0.25 mg/L的As2O3 4、6、8 d后,表达水平分别为0.70±0.21、0.75±0.22和0.71±0.20,各时间段Ezrin-mRNA的表达水平无明显变化(P>0.05).结论 As2O3可显著下调HepG2细胞CD44v6-mRNA的表达,对Ezrin-mRNA的表达可能无直接调节作用.     

熊果酸对肝癌细胞株Bel-7404转移及侵袭能力的影响

目的 观察熊果酸(UA)对肝癌细胞株Bel-7404细胞转移侵袭能力及相关基因基质金属蛋白酶(MMP)-2、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 选用3个组:A组(UA 50 μmol/L)、B组(顺铂10mg/L)和C组(DMEM空白对照)对Bel-7404细胞进行处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测细胞中MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白的表达水平.结果 对Bel-7404细胞作用48 h后,A、B两组细胞的迁移速率(35.2±8.7)、(30.5±8.6)μm/h及侵袭穿膜细胞数(21.2±5.3)、(20.2±5.7)个、MMP-2 mRNA 0.24±0.06、0.23±0.05及蛋白0.21±0.01、0.24±0.04表达水平均较C组(75.6±8.7)μm/h、(54.8±7.8)个、0.46±0.11、0.42±0.06明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01),而TIMP-2 mRNA0.87±0.05、0.83±0.06及蛋白0.98±0.06、0.95±0.09表达水平均比C组0.31±0.02、0.59±0.02高,差异均有统计学意义(P<0.01);A、B两组间细胞的迁移速率、侵袭穿膜细胞数、MMP-2和TIMP-2 mRNA及蛋白表达水平的比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 UA可抑制肝癌Bel-7404细胞株的迁移侵袭,其机制可能与MMP-2表达下调而TIMP-2表达上调有关.UA 50 μmol/L对Bel-7404细胞迁移侵袭能力的抑制作用与顺铂10 mg/L具有相同的效果及机制.     

装载miRNA-451a的外泌体对肝癌细胞株增殖的影响研究

目的 探讨装载miRNA451a的外泌体对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721增殖的影响。方法 正常肝组织上皮细胞株HL-7702来源的外泌体,通过与胆固醇基修饰的miRNA-451a模拟物直接孵育构建外泌体451a复合体。将构建的exo-miRNA-451a复合体、等量miRNA-451a模拟物、等量PBS分别接种于96孔板中处于对数生长期的HPG2和SMMC-7721细胞,作为实验组、对照组和空白对照组。采用激光共聚焦显微镜观察exo-miRNA-451a复合体进入细胞内的情况;CCK8法检测HPG2和SMMC-7721细胞增殖。结果 构建的外泌体miRNA-451a复合体分别与HepG2和SMMC-7721细胞,共培养3h时,在共聚焦显微镜下,有PKH67标记的外泌体和Cy3标记的miRNA-451a在HepG2和SMMC-7721细胞中共定位,并且在随后的6h、12h观察时逐渐增多。CCK-8实验提示当外泌体451a复合体和miR-451a模拟物分别与肝癌细胞株共孵育6h, OD值差异不明显;共孵育12h实验组OD值低于对照组,共培养48h实验组OD值显著低于对照组。结论 ...     

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721[Ca2＋]i的影响

目的观察不同浓度三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及细胞内Ca2 的影响,探讨其在肝癌化疗中的可能机制。方法MTT法测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞的抑制作用;Fura2-AM标记细胞内Ca2 ,荧光分析仪测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响。结果As2O3在0.5～2.0μg/ml的浓度范围内对肝癌SMMC-7721细胞的生长具有抑制趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);As2O3在0.5,1.0μg/ml浓度时,对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);当As2O3浓度为2.0μg/ml,作用时间为48h,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),而作用时间至72h,细胞内Ca2 又恢复至正常水平(P>0.05)。结论As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 的影响不仅与浓度有关而且与作用时间有关。     

MT1M基因对肝癌细胞株Hep-G_2细胞周期及信号通路的影响

目的 :研究MT1M基因对肝癌细胞Hep G2 细胞周期的影响及可能参与的信号通路。　方法 :构建表达MT1M基因的真核质粒 ,转染Hep G2 肝癌细胞株 ,流式细胞术检测该基因对细胞周期的影响 ,通过双荧光素酶报告系统检测该基因对细胞信号通路的影响。　结果 :MT1M基因可诱导Hep G2 细胞停滞在G2 期的细胞增加 ,同时能促进NF κB的转录活化。　结论 :MT1M基因可以影响Hep G2 细胞的细胞周期并活化NF κB的信号通路。     

三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用及其机制。方法用流式细胞仪检测As2O3联合5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素作用下胆囊癌细胞凋亡情况。用Westernblot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和PARP的表达。结果在As2O3的协同作用下，5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素对胆囊癌GBC细胞的诱导凋亡作用得到增强；蛋白水平的检测表明Caspase-3和PARP的剪切上升，而Bcl-2的蛋白表达下降。结论As2O3具备对胆囊癌细胞化疗增敏潜能，并主要通过改变Caspase-3、PARP及Bcl-2等的表达来实现。     

三氧化二砷对恶性肿瘤的治疗作用

砷剂入药,古已有之,最早的正式记载见于<本草纲目>.1931年,Forkier用亚砷酸钾治疗慢性粒细胞白血病(CML)获得成功.自1971年始,我国学者用砷剂治疗白血病,1992年开展单一三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒白血病(APL)以来,砷剂在抗癌机理和临床治疗中取得重大突破,逐渐深入到各系统恶性肿瘤的治疗研究中,显示了广阔的抗癌前景.     

叶酸缺乏对肝细胞和肝癌细胞生长影响的实验研究

目的:探索叶酸缺乏状态对人肝癌细胞株BEL7402、肝细胞株L02生长状况的影响。方法:将BEL7402、L02分别置于正常培养液和叶酸缺乏培养液中培养30d,利用细胞计数和流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡状态。结果:L02在叶酸缺乏状态下凋亡率增加,生长旺盛,表现为细胞总数增多,G0、G1期细胞比例下降。BEL7402在叶酸缺乏状态下生长正常,细胞总数、细胞周期比例和凋亡率未受影响。结论:叶酸缺乏状态刺激人肝细胞株L02生长旺盛、凋亡率增加,而对人肝癌细胞株BEL7402则作用不明显。叶酸缺乏可使L02细胞凋亡率明显增加,若凋亡机制未能清除那些不发生G1期阻滞的细胞,则可能发生癌变。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术,观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并且具有时间和剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

三氧化二砷抗肝癌作用及其肾毒性作用的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）抗肝癌作用及其对肾脏的毒副作用并探讨其作用机制。方法：二乙基亚硝胺灌胃制备大鼠肝癌模型。以As2O3或顺铂注射于大鼠腹腔，第7、14、28天获取肝癌结节，光、电镜下观察肝癌细胞形态学变化，流式细胞仪检测凋亡及细胞动力学变化。第28天获取肾脏，光镜下观察肾脏组织形态学变化，免疫组织化学SP法检测bcl-2、增殖细胞核抗原（PCNA）表达变化。结果：As2O3诱导大鼠肝癌细胞凋亡，出现典型形态学改变；引起肝癌细胞凋亡率上开，中剂量组（1mg/kg体重）显著上升，明显高于顺铂组（P＝0．000）。顺铂组大鼠肾脏（4／7）镜下出现肾小管上皮细胞浊肿、变性，集合管内蛋白管型出现，而砷剂组无明显改变（P＝0．013）；砷剂组肾上管上皮细胞bcl-2表达增加（P＝0．005），PCNA标记指数无明显改变，顺铂组PCNA LI明显升高（P＝0．001）。结论：As2O3可诱导大鼠肝癌细胞凋亡，且优于顺铂；与顺铂相比，无明显肾毒性。     

三氧化二砷对前列腺癌细胞株PC-3生长影响的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC 3生长的影响及其机制。　方法 :通过光学显微镜观察As2 O3 处理前后培养的PC 3细胞生长和形态的变化 ,采用MTT法了解不同浓度As2 O3 作用后PC 3细胞的生长抑制曲线 ,应用流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染法分析不同浓度As2 O3 处理的PC 3细胞的凋亡情况。　结果 :As2 O3 作用后 ,PC 3细胞形状变圆 ,体积变小 ,胞质透亮度下降 ,部分细胞脱落悬浮于培养基中。在7.81 2 5、1 5 .6 2 5、31 .2 5 0、6 2 .5 0 0、1 2 5、2 5 0、5 0 0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8h和 72h后 ,MTT法检测细胞生长抑制率分别为(0 .0 6± 0 .99)、(1 5 .0 1± 1 .1 2 )、(2 9.2 1± 1 .31 )、(34.32± 1 .1 4 )、(4 0 .5 1± 1 .81 )、(6 9.39± 1 .74 )、(73.1 9± 2 .4 1 ) %和(0 .0 4± 1 .5 1 )、(1 6 .1 9± 1 .0 4 )、(4 3.6 1± 1 .1 2 )、(5 6 .6 6± 1 .2 3)、(73.1 3± 2 .6 1 )、(85 .2 2± 1 .74 )、(91 .4 1± 2 .81 ) %。用流式细胞仪检测经过 0 (对照组 )和 0 .1、1 .0、3.0、5 .0、2 0 .0、5 0 .0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8、72h后的PC 3细胞 ,凋亡率分别为 0 .87%、5 .33%、8.94 %、9.6 6 %、1 2 .5 6 %、4 5 .5 9%、6 9.0 9%和 0 .1 3%、1 3.4 9%、     

白藜芦醇抑制肝癌细胞侵袭能力的研究

白藜芦醇（resveratrol）是一种从葡萄、虎杖等植物中提取出的一种天然药物，具有保护心肌细胞、改善微循环等众多生理功能。近年来又发现其抗肿瘤的功能，且对于肝癌细胞，白藜芦醇有着明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用，我们从肿瘤细胞黏附、运动及侵袭三个方面探讨白藜芦醇对不同肝癌细胞株侵袭能力的影响。     

三氧化二砷对裸鼠人乳腺癌移植瘤的作用及机制

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌移植瘤的作用及其机制.方法 建立BALB/C-nu/nu裸鼠ER阴性MDA-MB-435s人乳腺癌移植瘤模型,分别以不同浓度的AS2O3、顺铂和0.9%氯化钠注射液(NS)腹腔内注射,观察移植瘤的瘤重及抑瘤率.并用免疫组化检测乳腺癌石蜡标本中PTEN和Casepase7的表达.结果 AS2O3高剂量组、AS2O3低剂量组、顺铂组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为48.68%、32.80%、66.67%.用药后移植瘤组织巾PTEN和Casepase-7蛋白阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 AS2O3能明显抑制乳腺癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过上凋PTEN和Caspase-7的表达(P＜0.05),促进细胞的凋亡来抑制人乳腺癌细胞的生长.     

三氧化二砷对人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)的作用

目的 探讨三氧化二砷(AS2O3)对肝母细胞瘤细胞系(HepG2)生物学行为、核基质及其相关蛋白肝细胞核因子4(HNF4)之影响。方法 1μmoL/LAs2Os处理HepG2细胞5d．倒置显微镜观察细胞形态；提取并纯化核基质蛋白，应用双向电泳分析核基质蛋白的改变；蛋白杂交(Western)分析HNF4的表达。结果 与未处理对照组相比，1 μmol／LAs2zO2可诱导HepG2细胞分化，改变HepG2细胞核基质蛋白的分布，下调HNF4在核基质蛋白中的表达。结论 低浓度AS2O3，可诱导HepG2细胞分化的过程并改变核基质蛋白的分布。核基质相关蛋白HNF4是AS2O3发挥其抗癌作用的靶蛋白。     

三氧化二砷抗膀胱癌作用机制的实验研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对膀胱癌T24细胞株生长、Caspase-3基因表达以及裸鼠移植瘤体积及质量变化的影响. 方法 以不同浓度的As2O3加入对数生长期的T24细胞并设立对照组,分别培养24、48、72 h,噻唑盐比色法检测膀胱癌细胞生长抑制情况,荧光染色观察细胞核形态变化,流式细胞术检测As2O3对细胞凋亡率的影响,蛋白质印迹法检测As2O3对Caspase-3蛋白表达的影响;将对数生长期T24细胞接种于30只裸鼠背部皮下,3周成瘤后随机分为As2O3腹腔注射组、皮下注射组及对照组,用药2周后处死裸鼠测量药物作用前后裸鼠瘤体积及质量变化. 结果 随着As2O3浓度增加及时间延长,T24细胞生长抑制率由(25.8±1.1)%增加至(86.6±1.6)%,其中各实验组与对照组比较、实验组各时间段比较、各实验组与前一组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);随着As2O3作用时间延长,荧光显微镜下可见细胞核内荧光增强,细胞核呈新月形改变等凋亡形态学变化; T24细胞凋亡率由29.6%增加至60.6%;Caspase-3表达分别为对照组的1.15、1.98及2.76倍,差异具有统计学意义(P＜0.05);As2O3腹腔注射组及皮下注射组鼠瘤体积分别为(2612.9±77.7)及(1908.2±102.3)mm3,瘤重分别为(2.0±0.9)及(0.7±0.7)g,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),皮下注射组与腹腔注射组间差异亦有统计学意义(P＜0.05). 结论 As2O3对膀胱癌T24细胞生长和裸鼠移植瘤均有抑制作用,其抗癌机制可能与增加Caspase-3蛋白表达有关.     

他克莫司在体外对肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15增殖的影响

目的：研究他克莫司（tacrolimus ,FK506）在体外对肝癌肿瘤株HepG2和乙肝相关肝癌株HepG2.2.15增殖的影响。方法：体外培养肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15,采用MTT法、流式细胞技术,分别检测细胞增殖、细胞周期、CyclinA。结果：FK506可以显著抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖,其抑制增殖作用随剂量增加而增强;FK506诱导细胞产生G0/G1期阻滞,这种抑制作用有浓度依赖性;FK506对周期蛋白CyclinA表达的影响呈浓度负相关性,FK506浓度越高,周期蛋白CyclinA表达越少。结论：FK506可以抑制肝癌细胞HepG2和乙肝相关肝癌细胞HepG2.2.15的增殖,这种作用可能与诱导细胞周期阻滞有关。