益气化瘀方及拆方对椎间盘软骨细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的影响

目的探讨益气化瘀方及拆方对椎间盘软骨细胞凋亡状态下Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的调控作用。方法用酶消化法培养大鼠椎间盘软骨细胞,抗Fas抗体诱导凋亡,通过益气化瘀方及拆方益气方、化瘀方药理血清干预,免疫组化法(SP)检测分析大鼠椎盘软骨细胞不同状态下Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达情况。结果相对正常对照组,凋亡模型组的I型胶原表达明显,而II型胶原轻度表达,有显著差异(P<0.01)。相对凋亡模型组,益气化瘀方、益气方和化瘀方均能上调II型胶原的表达,下调I型胶原表达,3种中药组与诱导凋亡组相比有显著差异(P<0.01)。结论益气化瘀方及拆方可以调控凋亡大鼠椎间盘软骨细胞内I、II型胶原表达。     

益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响

目的：益气化瘀补肾法对爱变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响。方法：健康成年新西兰大白兔42只,随机分均分为益气化瘀补肾组,益气化瘀组,补肾组,消炎组,模型对照组,正常对照组。建立颈椎闰椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析,结果：正常对照组髓核组中II型胶原m RNA表达的量显著高于模型对照组和湖炎痛治疗组（P＜0．01）,与益气化瘀化,补肾组相比较也有显著差异（P＜0．05）,益气化阏补肾法与举气化瘀法,单纯补肾法比较有显显著差异（P＜0．05）,与消炎痛组,模型组比较有非常显著差异（P＜0．01）,益气化瘀法,补肾法对髓核组织中II型胶原mRNAR的表达有一定的增强作用,结论：颈椎病家兔椎间盘的II型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀化法可以上调II型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

益气化瘀补肾方纯化工艺研究

目的确定益气化瘀补肾方的最佳纯化工艺。方法选择3种醇沉浓度（50%,60%,70%）、4种壳聚糖含量（0.01%,0.05%,0.1%,0.2%）和高速离心法做比较,以黄芪甲苷含量、淫羊藿苷含量、小鼠耳郭肿胀率、小鼠热板疼痛抑制率为指标,通过药物化学和药效学的综合评价,优选最佳纯化工艺。结果最佳纯化方法为水提醇沉法,加入乙醇使含醇量达70%。结论最佳纯化工艺合理、可行。     

益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法健康成年新西兰大白兔42只,随机平均分为益气化瘀补肾组、益气化瘀组、补肾组、消炎组、模型对照组、正常对照组。建立颈椎病椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析。结果正常对照组髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA表达的量显著高于模型对照组和消炎痛治疗组（P<0.01）,与益气化瘀组、补肾组相比较也有显著差异(P<0.05);益气化瘀补肾法与益气化瘀法、单纯补肾法比较有较显著差异(P<0.05),与消炎痛组、模型组比较有非常显著差异(P<0.01);益气化瘀法、补肾法对髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA的表达有一定的增强作用。结论颈椎病家兔椎间盘的Ⅱ型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀补肾法可以上调Ⅱ型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

益气化瘀补肾法对颈椎病动物椎间盘病理变化与Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘病理变化及髓核Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法 :把健康成年新西兰大白兔随机分为益气化瘀补肾组、消炎痛组、模型对照组和正常对照组 ,运用静力平衡失调颈椎病动物模型 ,造成动物椎间盘的退变 ,然后分别喂以相应药物或医用淀粉胶囊 ,观察24周后 ,取颈6/7椎间盘 ,用HE染色法观测椎间盘组织病理变化 ,用生物素标记原位杂交法观测椎间盘髓核组织内细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达 ,并运用图像分析仪对其进行数据转换 ,采用SPSS统计软件分析。结果 :益气化瘀补肾法对退变椎间盘病理变化的影响不显著 ,但对椎间盘髓核组织内Ⅱ型胶原mRNA表达的影响有显著作用。结论 :益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘髓核组织胶原的形成过程的环节有正面影响。     

电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶活动的影响

目的:观察电针大椎穴对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞外基质(ECM)及胞内Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)、V型胶原(COL-V)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的影响,探讨电针治疗颈椎间盘退变的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和莫比可组,每组7只。建立动静力失衡性颈椎间盘退变大鼠模型。电针组取大椎穴,每次治疗30min,每天1次,14d为1个疗程,疗程之间间隔2d,共治疗2个疗程;莫比可组给予莫比可片每日0.75mg/kg灌胃治疗,共治30d。采用免疫组化法检测椎间盘中ECM、COL-Ⅱ、COL-V、MMP-13、TIMP-1的表达。结果:模型组ECM、COL-Ⅱ较假手术组明显减少(P<0.01),COL-V、MMP-13较假手术组明显增多(P<0.01,P<0.05);电针组、莫比可组ECM、COL-Ⅱ较模型组增多(P<0.01),COL-V、MMP-13较模型组减少(P<0.01,P<0.05);各组TIMP-1均无明显变化(P>0.05)。结论:电针大椎穴治疗颈椎间盘退变的机制可能与调控椎间盘细胞外基质系统有关。     

益气化瘀补肾方纯化工艺研究

目的:确定益气化瘀补肾方的最佳纯化工艺。方法:以黄芪甲苷含量、淫羊藿苷含量、小鼠耳廓肿胀率、小鼠热板疼痛抑制率为指标,通过药化学和药效学的综合评价,优选最佳纯化工艺。结果:最佳纯化方法为水提醇沉法,加入乙醇使含醇量达70%。结论:最佳纯化工艺合理、可行。     

中药益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

研究中药益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响。取健康10周龄SD大鼠70只,体重(200±50)g,雌雄各半,随机分为空白组(E)、芬必得组(D)、中药低剂量组(C)、中药中剂量组(B)、中药高剂量组(A),每组14只。定时、定量胃饲,4天后分别处死取血清,相同条件下制备益气化瘀方含药血清和对照血清,取体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞进行实验研究,采用RT-PCR法。结果显示,各含药血清组培养的软骨细胞均具有分泌MMP-3、TIMP-1功能,但不具有诱导其异常分泌MMP-3、TIMP-1功能。益气化瘀方组较对照组及芬必得组有下调MMP-3的分泌或表达,上调TIMP-1的分泌或表达。     

扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响

目的探讨扶正化瘀胶囊治疗心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法 24只大鼠随机分为模型组、扶正化瘀组、卡托普利组、假手术组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠心肌梗死模型。造模后扶正化瘀组给予扶正化瘀胶囊0.4 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组均给予等体积的去离子水灌胃,各组均每日1次,连续8周。采用天狼星红染色检测心肌胶原分数(CVF),免疫组化、实时荧光定量PCR法分别检测Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白及mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,扶正化瘀胶囊组、卡托普利组CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与卡托普利组比较,扶正化瘀组CVF、TIMP-1蛋白表达升高,TIMP-1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论扶正化瘀胶囊能改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其机制可能与调控MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白和mRNA表达及MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1有关。     

益气补肾方对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的 探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响.方法 将胃癌SGC-7901细胞接种于RPMI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml 7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复3次,37℃、5％CO2培养箱孵育48h.采用MTT法检测不同浓度益气补肾方对SGC-7901细胞增殖的抑制率;采用RT-PCR法检测其对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的基因表达活性的影响. 结果 不同浓度的益气补肾方对SGC-7901细胞都有一定的抑制作用,以16mg/ml和32mg/ml浓度抑瘤作用较好,抑制率分别为53.17％和56.47％;MMP-2 mRNA在32mg/ml组同空白对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05),并且16mg/ml组也能下调MMP-2 mRNA的表达,但差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 益气补肾方能明显抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力,且以32mg/ml浓度最好.     

补肾调经方、逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠组织蛋白酶-L mRNA的影响

目的 探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L（cathepsin-L,Cat L） mRNA的影响。     

补肾活血方对肾小球硬化大鼠细胞外基质状态的影响

目的 探讨补肾活血方对肾小球硬化大鼠细胞外基质状态的影响及作用机制。 方法 采用单侧肾切除加注射阿霉素造模法,将实验动物随机分为正常组、模型组、中药补肾活血方组（中药组）、西药福辛普利钠对照组（西药组）,每组11只。分别灌胃给药及生理盐水8周后,观察大鼠24 h尿蛋白及肾功能,采用免疫组化法检测肾组织中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、组织蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达,ELISA检测血浆和肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）的含量。 结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白明显增多,肾功能下降;肾组织中TIMP-1表达增加,MMP-1表达下降,半定量结果显示模型组与正常组比较差异有统计学意义（P <0.05）;中药组和西药组均能降低肾组织TIMP-1含量,提高MMP-1含量,与模型组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。与正常组比较,模型组大鼠血和肾组织的TGF-β1含量明显升高（P <0.01）,中药组血和肾组织的TGF-β1含量较模型组低,但差异无统计学意义     

补肾序贯方结合软坚化瘀方对子宫内膜异位症大鼠基质金属蛋白酶-2蛋白表达的影响

目的 观察补肾序贯方结合软坚化瘀方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)大鼠异位内膜基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）的调节作用,探讨子宫内膜异位症的发病机制与治疗机制。     

益气化瘀中药对子宫内膜异位症内膜间质细胞VEGF表达的影响

目的：研究益气化瘀中药对子宫内膜异位症内膜间质细胞血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：采用血清药理学方法,分正常血清、消瘀汤低、中、高浓度及达那唑血清五组,作用于EMs内膜间质细胞,West-ernBlot法观察间质细胞血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：VEGFR2蛋白表达在消瘀汤各浓度组及达那唑血清组均明显下调,说明中西医治疗EMs均有疗效,尤其是消瘀汤高浓度组。结论：益气化瘀中药治疗EMs机制之一可能是通过减少VEGF生成,阻断异位内膜血管的生成,降低异位内膜的侵袭和种植能力,从而达到抑制病灶形成和生长。     

补肾益气活血方含药血清对兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响

目的观察补肾益气活血方对体外培养兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响。方法体外分离、培养兔膝骨关节软骨细胞,检测细胞增殖和软骨细胞bFGF-mRNA原位表达。结果补肾益气活血方高、中、低剂量组细胞增殖均优于对照组(P<0.05),软骨细胞bFGF-mRNA表达均显著高于对照组(P<0.01)。结论补肾益气活血方能促进关节炎软骨细胞bFGF-mRNA表达,加强软骨细胞增殖。     

补肾化瘀祛痰方治疗多囊卵巢综合征的临床研究

目的了解补肾化瘀祛痰方治疗多囊卵巢综合征的临床疗效及可能的作用机制。方法以补肾化瘀祛痰中药为主的水煎内服方及外敷方（必要时联合西药二甲双胍）治疗多囊卵巢综合征46例,连续治疗6个月为1个疗程;观察治疗前后临床症状和体征（肥胖、多毛、痤疮及黑棘皮症评分）、血清激素水平及胰岛素释放试验的变化情况。结果治疗后患者多毛、痤疮、黑棘皮症评分值及肥胖评分值与治疗前比较均明显下降（P〈0．01,P〈0．05）;血清睾酮（T）水平较治疗前显著降低（P〈0．05）;胰岛素试验中空腹胰岛素值与治疗前比较下降（P〈0．01）,糖负荷后30min、60min胰岛素值及胰岛素曲线下面积（IAUC）与治疗前比较亦有明显下降（P〈0．05）。结论以补肾化瘀祛痰方可以显著改善多囊卵巢综合征患者的症状和体征,改善患者的卵巢功能。     

补肾益气化浊通络法对糖尿病肾病小鼠肾脏细胞外基质的影响

目的:探讨补肾益气化浊通络法对2型糖尿病肾病db/db小鼠肾脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法:以具有补肾益气化浊通络作用的科研协定方糖肾康(Tangshenkang,TSK)为研究药物,将100只12周龄SPF级雄性db/db小鼠随机分为5组,模型组,罗格列酮组,糖肾康低、中、高剂量组(4.6,13.8,41.4 g·kg-1),另将20只SPF级SD大鼠设为空白组。各组连续灌胃12周后采血,并留取肾脏组织。全自动生化仪检测甘油三酯(triglycerides,TG),总胆固醇(total cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C),血清胱抑素-C(serum cystatin-C,Cys-C),肌酐清除率(creatinine clearance rate,CCr);免疫组化法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN),层粘连蛋白(laminin,LN),胶原(collagen,Col),α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA),转换生长因子(transforming growth factor,TGF)-β和T细胞群集分化抗原8+(cluster of differentiation 8+,CD8+)。结果:治疗后,TSK中、高剂量小鼠体质量明显降低(P0.01);在第8周,TSK各剂量组小鼠的随机血糖均明显降低,TSK高剂量组降糖效果持续(P0.05,P0.01);TSK中、高剂量组TG,TC,LDL-C,Cys-C均明显下降,CCr,HDL-C上升(P0.05,P0.01);TSK各剂量组ECM(FN,LN,ColⅢ和ColⅣ),α-SMA,TGF-β和CD8+显著降低(P0.05,P0.01),且呈剂量依赖性。结论:TSK通过减少α-SMA,TGF-β和CD8+在DN小鼠肾脏的表达,降低DN小鼠体质量,改善血脂代谢及肾功能,降低肾脏组织ECM沉积,减轻了肾小球硬化和肾间质纤维化程度,这可能是补肾益气化浊通络法治疗DN的机制之一。     

补肾解毒活血方与益气补血方预防化疗后骨髓抑制的比较研究

目的:比较补肾解毒活血方与益气补血方预防环磷酰胺(CTX)引起骨髓抑制小鼠造血功能的效果及作用机制,为临床合理配伍提供依据.方法:清洁级昆明种小鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、补肾解毒活血组和益气补血组,中药组分别给予25.55,17.47 g?kg-1 ?d-1中药灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水,每日灌胃1次,连续给药10d,第8天时采用腹腔注入环磷酰胺(100 mg?kg-1?d-1),连续造模3d.各组随机抽取10只,在第7天(造模前1d)及造模完成后的第1,3,5,7,10天做外周血象检测,剩余10只于造模后第1天进行骨髓有核细胞计数(BMNC)、粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E和BFU-E)集落形成单位、细胞凋亡检测及血清粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)检测.结果:各组小鼠白细胞和血小板数分别于造模后第1天和第5天降至最低,并分别于第5天和第10天基本恢复至正常,但益气补血组下降程度较模型组轻(P＜0.01),而补肾解毒活血组恢复明显早于模型组和益气补血组(P＜0.05);造模后模型组BMNC,CFU-GM及BFU-E显著下降(P＜0.01),且两中药组均明显高于模型组(P＜0.01),其中BFU-E以补肾解毒活血组为优(P＜0.05);造模后小鼠骨髓细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),约是正常组的14.7倍,两中药组骨髓细胞凋亡率均明显低于模型组(P＜0.01);造模后GM-CSF较正常组显著降低(P＜0.01),但两中药组GM-CSF明显高于模型组(P＜0.05).各组血清EPO水平较正常组没有明显差异.结论:预防给予益气补血药或补肾活血解毒药均可以加快化疗后骨髓抑制白细胞的恢复,尤以益气补血方为优;益气补血方减轻血小板下降程度更好,补肾活血解毒方促使血小板恢复更佳.预防给予两组中药均可减轻小鼠环磷酰胺造成的BMNC和CFU-GM下降程度,从而有利于白细胞的恢复;两组中药不是通过提高血清促红细胞生成素的水平,而是通过减轻环磷酰胺造成的BFU-E的减少,达到保护红系造血的效果,以补肾解毒活血方为优.预防应用补肾解毒活血药与益气补血药可以明显降低环磷酰胺引起的骨髓细胞凋亡,似以益气补血组为佳.     

益气化瘀方调控颈椎间盘细胞基因表达谱的研究

目的：分析正常、退变SD大鼠颈椎间盘基因表达水平的变化，研究益气化瘀方对大鼠退变颈椎间盘基因表达谱的调节作用。方法：建立动、静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型，分别从正常、退变和益气化瘀方组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA，经反转录后分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得动物椎间盘cDNA的探针，再与512点cDNA基因表达谱芯片杂交，激光扫描仪扫描并进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果：模型组与对照组比较，共筛选出18条表达有差异的基因，11条基因表达量明显下降(ratio＜0．4)，7条基因表达量明显上升(ratio＞2．5)。益气化瘀方与模型组比较，共筛选出22条表达有差异的基因，益气化瘀方上调18条基因(ratio＞2．5)，下调4条基因(ratio＜0．4)。其中在上述检测中表达最明显的是信号传导类基因，益气化瘀方能够上调多数细胞信号传导类基因(如PTK等)。结论：初步筛选出大鼠迟变椎间盘中相关基因，与已报道基因在颈椎间盘退变的表达模式类似，说明大鼠椎间盘退变受到各种基因的调控，初步阐明了颈椎病在基因水平上的发病机理。益气化瘀方参与了椎间盘细胞内相关基因的调控，参与椎间盘细胞内外的信号传导过程，从基因表达角度解释了中药治疗颈椎病的药效机理，丰富了中医气血理论。     

补肾益气活血方对宫内生长迟缓胎鼠肝脏C-Jun和C-Fos表达的影响

目的:探讨补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)胎鼠肝脏 C-Jun 和 C-Fos 表达的影响。方法:利用被动吸烟法建立 IUGR 大鼠模型,将动物分成正常组、IUGR 组、IUGR 中药治疗组(中药组)、IUGR 左旋精氨酸治疗组(精氨酸组),采用 Western-blot 方法检测各组肝脏 C-Jun 和 C-Fos 蛋白表达水平。结果:正常组胎鼠肝脏 C-Jun 有一定量表达,C-Fos 有少量表达;IUGR 组 C-Jun与 C-Fos 表达较正常组明显增强(P<0.05);中药组和精氨酸组 C-Jun 和 C-Fos 表达水平较 IUGR 组明显降低(P<0.05),且与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:IUGR 的发生与 C-Jun 和 C-Fos 表达改变有关,中药补肾益气活血方可能通过影响 C-Jun 和 C-Fos 表达而调节其他相关基因转录从而防治 IUGR。