人巨细胞病毒IE1核酸疫苗的免疫效果研究

[目的]用人巨细胞病毒(HCMV)IE1核酸疫苗pcDNA3.1(-)-IE1免疫BALB/c小鼠,初步研究其产生的体液免疫和细胞免疫应答水平。[方法]将pcDNA3.1(-)-IE1通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过PCR测定和免疫组化检测其在肌细胞中的表达,细胞因子测定、淋巴细胞转化实验检测免疫效果。[结果]PCR检测到与IE1大小一致的片段,免疫组化结果显示IE1基因在小鼠肌细胞中表达IE1目的蛋白。小鼠脾淋巴细胞经PHA刺激后,实验组IL-4、IL-2、IFN-γ含量以及淋巴细胞转化率显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]pcDNA3.1(-)-IE1核酸疫苗能在BALB/c小鼠肌细胞中稳定存在并能表达HCMV IE1蛋白,pcDNA3.1(-)-IE1核酸疫苗可诱导BALB/c小鼠脾细胞分泌IL-4、IL-2、IFN-r并刺激BALB/c小鼠脾细胞增殖。     

热休克转录因子1对肿瘤坏死因子α的转录调控作用及机制

目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录调控作用及机制。方法构建HSF1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1,TNF-α野生型启动子荧光素酶报告基因pGL3-TNFα-Y,TNF-α突变型启动子荧光素酶报告基因pGL3-TNFα-T。pcDNA3.1-HSF1转染巨噬细胞RAW264.7,半定量RT-PCR检测TNF-αmRNA的表达。pcDNA3.1-HSF1,TNF-α启动子荧光素酶报告基因转染RAW264.7,比较pGL3-TNFα-Y和pGL3-TNFα-T的相对萤光素酶活性。结果 HSF1下调RAW264.7 TNF-αmRNA的表达,pGL3-TNFα-T的相对荧光素酶值较pGL3-TNFα-Y明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论热休克转录因子1(HSF1)通过与肿瘤坏死因子α(TNF-α)启动子区HSE的结合下调RAW264.7 TNF-αmRNA的表达。     

潜伏活性的人可溶性TNFⅠ型受体融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的:采用基因工程技术,将转化生长因子β前体相关蛋白(LAP)通过基质金属蛋白酶(MMP)水解部位与人可溶性TNFⅠ型受体(hsTNFRⅠ)连接,构建pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白真核表达载体,获得LAP-MMP-hsTNFRⅠ融合蛋白。方法:将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3.1( ),得到pcDNA3.1/MMP重组体;将TGF-β1的LAP段和hsTNFRⅠ与MMP水解部位连接,获得pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ真核表达载体。测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR检测融合基因的表达。结果:酶切及测序结果证实pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ重组载体构建成功,转染后RT-PCR结果表明重组质粒在COS-7细胞中得到有效表达。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-hsTNFRⅠ,并获得融合基因的瞬时表达,为进一步研究融合蛋白在子宫内膜异位症中的靶向治疗奠定了实验基础。     

肠上皮细胞中性氨基酸载体B0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立

目的: 构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株. 方法: 提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coli DH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达. 结果: 从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因.酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞,可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系.氨基酸摄取实验证实,转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性. 结论: 重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达.     

HO-1真核表达质粒的构建及在肾小管上皮细胞中的表达

[目的]构建HO-1基因真核表达质粒,转染大鼠肾小管上皮细胞,检测其在细胞中的表达效果.[方法]从大鼠肾组织中提取总RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增大鼠HO-1基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1( )中,运用脂质体将重组质粒pcDNA 3.1( )-HO-1转染大鼠肾小管上皮细胞,通过RT-PCR和Western blot分析HO-1基因细胞转染及表达的效果. [结果]成功构建了HO-1基因真核表达重组质粒pcDNA 3.1( )-HO-1.RT-PCR及Western blot分析显示,HO-1基因能转染大鼠肾小管上度细胞并在细胞内有效表达. [结论]HO-1基因真核表达重组质粒pcDNA 3.1( )-HO-1的成功构建及其在肾小管上皮细胞中的有效表达为深入研究其生物学作用奠定了基础.     

肿瘤转移抑制基因KiSS-1的克隆与真核表达载体的构建

目的克隆不含信号肽的人肿瘤转移抑制基因KiSS-1,构建KiSS-1基因的真核表达载体并鉴定。方法从正常人膀胱组织中提取总RNA,经RT-PCR得到KiSS-1基因开放阅读框cDNA序列,将其克隆到真核表达栽体pcDNA3.1( ),构建真核表达质粒pcDNA3.1( )/KiSS-1。结果经基因序列分析及PCR和酶切鉴定,证实目的基因片段已成功插入载体pcDNA3.1( )且序列正确。结论重组质粒pcDNA3.1( )/KiSS-1构建成功,为下一步KiSS-1蛋白的表达和研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。     

TLR4抗体对姬松茸多糖作用巨噬细胞产生细胞因子的影响

目的研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子--α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法相同浓度ABPS及脂多糖(LPS,阳性对照)作用巨噬细胞RAW264.7 3 h、6 h、12 h、18 h和36 h;不同浓度ABPS及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h;TLR4抗体作用巨噬细胞RAW264.7 1 h后,更换含有ABPS和LPS的细胞培养液作用24h。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量。结果 ABPS作用巨噬细胞RWA264.7 24 h后,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β含量明显高于阴性对照,差异有统计学意义(P0.01),但显著低于LPS组。在一定浓度范围内,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量随ABPS浓度增大而增大,浓度为1000μg/ml时IL-1β、TNF-α、IFN-β含量达到最大。TLR4抗体处理的巨噬细胞RAW264.7经ABPS和LPS作用,IL-1β、TNF-α、IFN-β含量低于未处理组,差异有统计学意义(P0.01)。结论 TLR4抗体能够一定程度抑制ABPS作用巨噬细胞RAW264.7产生IL-1β、TNF-α、IFN-β,推测ABPS可能通过TLR4受体信号转导通路影响三种细胞因子的释放。     

大鼠转化生长因子β3基因的克隆及其转染肝星状细胞后的表达

目的:克隆大鼠转化生长因子β3(TGFβ3)基因并研究其转染肝星状细胞(HSC)后的表达情况。方法:采用逆转录—聚合酶链式应(RT-PCR)从大鼠成骨细胞中扩增出特异性片段,经酶切鉴定证实为大鼠TGFβ3cDNA,将此片段插入pcDNA3.1(+)表达载体,构建得到pcDNA3.1(+)-TGFβ3重组质粒。应用阳离子脂质体介导的基因转移技术将TGFβ3表达载体导入大鼠HSC,24 h、48 h、72 h后用荧光定量PCR法进行瞬时表达的检测。结果:重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGFβ3经限制性内切酶NheI、XbaI酶切,电泳后显示的TGFβ3目的片段和5.4 kb的pcDNA3.1(+)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3.1(+)-TGFβ3真核表达载体构建成功,转染48 h后,肝星状细胞的表达明显增高(P0.05)。结论:重组TGFβ3真核表达载体构建正确,并在转染大鼠HSC48 h后获得高效表达,为转基因治疗肝纤维化疾病提供理论依据。     

白藜芦醇对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇(Res)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)]基因表达的调节。方法分别用1mg/LLPS或25mmol/LRes+1mg/LLPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞,采用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测细胞中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA和蛋白的表达。结果LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量在刺激后6～12h明显高于正常对照组(P<0.001),而Res+LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组(P<0.005)。结论LPS可诱导巨噬细胞NF-κB活化,导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强,而Res能抑制NF-κB活化而调节TNF-α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

辐射诱导的小鼠肺泡上皮细胞死亡通过干扰素基因刺激因子通路促进RAW细胞M1型极化研究

目的:探讨细胞中重要的DNA感受器干扰素基因刺激因子(STING)在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)细胞活化中的作用。方法:收集⁶⁰Co γ射线照射后小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12)的培养上清,对RAW264.7细胞进行刺激,使用蛋白免疫印迹(Western Blot)检测刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测处理后RAW264.7细胞经典激活的巨噬细胞(M1)型和非经典激活的巨噬细胞(M2)型相关细胞因子的表达水平。结果:Western Blot检测结果显示,刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达水平显著上调;ELISA检测结果表明,刺激后RAW264.7细胞上清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)显著增加;脱氧核糖核酸酶I(DNase I)处理能够抑制RAW264.7细胞中STING通路的激活。ELISA检测结果表明,DNase I能够抑制RAW264.7细胞向M1型极化。结论:辐射诱导的MLE-12细胞死亡能够释放DNA,从而激活RAW264.7细胞中的环磷酸鸟苷-腺苷...     

通用型10-23脱氧核酶表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达

[目的]构建一种新型10-23脱氧核酶(Deoxyribozyme,DRz)的真核表达载体,并鉴定其在细胞内表达10-23DRz的能力. [方法]设计一条包含莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MLV-RT)引物结合序列、多克隆酶切位点及逆转录终止信号序列的寡脱氧核糖核苷酸ODN-PSL,并将其插入框架质粒pBUDCE4.1中PCMV的下游,获取重组质粒pBUD-PSL.通过二步亚克隆将MLV-RT的编码基因克隆至pBUD-PSL中另一启动子PEF-1α的下游,获取重组质粒pS-DE01.将pSDE01转染入巨噬细胞RAW264.7中,RT-PCR法鉴定MLV-RT的表达及逆转录酶活性.设计一taco基因特异性的10-23DRz-DZ1,并将其表达序列克隆入pSDE01中,获取重组表达载体pSDE01-DZ1.将pSDE01-DZ1转染入巨噬细胞RAW264.7中,分别经PCR和斑点杂交法检测DZ1在细胞内的表达. [结果]限制性内切酶酶切及测序结果显示pSDE01构建成功,将其转染入巨噬细胞RAW264.7后检测到了MLV-RT的表达,而且表达产物具有逆转录酶活性.pSDE01-DZ1转染入RAW264.7细胞后,经PCR和点杂交方法均检测到了DZ1的表达. [结论]成功构建了一种操作简便的通用型10-23DRz表达载体,该载体可在真核细胞内有效表达特异性10-23 DRz.     

转录因子Foxo1对RAW264.7细胞迁移产生的影响

目的观察Foxo1基因过表达对鼠源性单核巨噬细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2表达的影响,探讨转录因子Foxo1在早期心血管疾病识别及预防中的作用。方法实验分为未转染的对照组、Foxo1基因转染组及空质粒转染组,Foxo1基因转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-Foxo1真核表达载体瞬时转染至RAW264.7细胞中。空质粒转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-3.1质粒瞬时转染至RAW264.7细胞中。通过Western blot检测细胞中Foxo1的过表达情况。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞中MCP-1及CCR2的表达情况。采用transwell小室法检测各组细胞的迁移能力。结果 pc DNA-Foxo1重组质粒转染48 h后,RAW264.7细胞中Foxo1蛋白的表达量为(1.812±0.067),明显高于空质粒转染组的(1.092±0.088)和未转染组的(1.107±0.095),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1 mRNA表达量为(3.331±0.587),明显高于空质粒转染组的(1.125±0.114)和未转染组的(1.121±0.065),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1蛋白的表达量为(2.670±0.117),明显高于空质粒转染组的(1.128±0.107)和未转染组的(1.037±0.096),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中CCR2的mRNA的表达量为(2.099±0.331),明显高于空质粒转染组的(1.027±0.095)和未转染组的(1.018±0.177),差异均有统计学意义(均P0.05)。计数Transwell小室膜下表面细胞数,结果显示Foxo1基因转染组RAW264.7细胞穿过小室的数量为(39.670±2.333)个,明显高于未转染组的(22.000±2.309)个,差异有统计学意义(P0.05)。结论转录因子Foxo1过表达通过促进MCP-1及CCR2的表达从而增强RAW264.7细胞的迁移,参与巨噬细胞的炎症反应,推测Foxo1在心血管疾病早期识别及预防中具有重要作用。     

人乳腺珠蛋白基因疫苗的构建及其免疫原性研究

目的:构建人乳腺珠蛋白(hMAM)基因重组质粒pcDNA3.1-hMAM,并观察重组质粒在COS-7细胞中的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法:利用PCR方法扩增hMAM基因,酶切测序后克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建真核表达载体pcDNA3.1-hMAM。将重组载体脂质体转染法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法和ELISA检测目的基因的表达。结果:成功扩增hMAM基因,酶切测序表明,重组质粒含有hMAM基因,在COS-7细胞中可检测到hMAM表达。结论:hMAM基因疫苗构建成功,为进一步进行DNA肿瘤疫苗研究提供了实验依据。     

奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因的克隆、真核表达与鉴定

目的克隆奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因,构建稳定的真核重组表达载体,并在HELA细胞中表达。方法根据淋球菌PIA基因序列,利用Primer Premier5.0生物学软件设计一对特异性扩增引物,以淋球菌国际标准株基因组DNA为模板,PCR扩增除掉信号肽后PIA基因开放读码框（ORF）,将其插入真核表达载体pcDNA3.1（＋）,构建含目的基因的pcDNA3.1（＋）/PIA重组质粒,PCR及酶切鉴定重组载体,脂质体转染HELA细胞,以间接免疫荧光法检测PIA基因在HELA细胞中的表达。结果成功构建了pcDNA3.1（＋）/PIA重组质粒;pcDNA3.1（＋）/PIA能在HELA细胞中高效表达PIA蛋白。结论重组质粒pcDNA3.1（＋）/PIA构建成功并在HELA细胞中高效表达了PIA蛋白,为该蛋白的抗原性及功能学研究奠定了基础。     

全长型人Smac基因真核表达载体构建及表达

目的 构建全长型(full length,FL)人Smac基因(hSmac)真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人宫颈癌细胞株Hela中扩增到Smac CDs基因片段,构建重组真核表达载体peDNA3.1 -FL hSmae.PCR、酶切鉴定重组质粒正确后,通过脂质体介导将其和作为阴性对照的空载体pcDNA3.1 分别转染人肝癌细胞株(SMMC-7721).同时转染含EGFP的质粒pcDNA3.1 -EGFP.利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率.采用RT-PCR、western blot法检测外源基因Smac的表达.结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人Smac基因克隆成功.且鉴定证实真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac构建成功.流式细胞术检测到转染效率高达48%,荧光显微镜下也可见非常明亮的绿色荧光.无论是在mRNA水平还是蛋白水平上,转染后的细胞中外源基因Smac表达均明显增加.结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中明显表达,为研究Smac基因在细胞凋亡过程中的调控作用.以及探讨以Smac基因为基础的肿瘤基因治疗策略提代基础依据.     

端粒和端粒酶相互作用蛋白在真核细胞中的表达

目的从人肝癌细胞系HepG2中获得PinX1基因,构建真核表达载体,转染Hek293细胞。方法采用RT-PCR技术从HepG2中扩增PinX1,克隆入真核表达载体pcDNA3,重组质粒转染Hek293细胞,免疫组化法检测蛋白的表达。结果RT-PCR方法扩增获得PinX1基因,构建真核表达载体pcDNA3-PinXl-vsv重组质粒转染Hek293细胞,免疫组化检测结果表明在细胞核内有PinX1表达。结论成功获得PinX1基因,构建的重组载体可在Hek293细胞内表达,为探索PinX1在端粒、端粒酶调控中的作用机制奠定基础。     

TIMP1基因对人结肠癌HCT-8细胞增殖影响的研究

目的采用体外试验探讨基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因对人结肠癌(HCT-8)细胞增殖的影响。方法构建TIMP1基因的真核表达载体和RNA干扰质粒(pcDNA3.1-TIMP1-K、TIMP1 RNAi、pcDNA3.1和空白对照),将TIMP1基因真核表达质粒和RNA干扰质粒分别瞬时转染入HCT-8细胞48～72 h后,采用Real Time PCR方法检测TIMP1基因在HCT-8细胞中基因转录表达水平,并用Western blot方法检测TIMP1基因在HCT-8细胞中蛋白表达水平,采用MTT试验检测TIMP1基因过表达和干扰后对HCT-8细胞增殖的影响。结果成功构建了TIMP1真核表达质粒和RNA干扰质粒。与空白对照比较,质粒pcDNA3.1-TIMP1-K在HCT-8细胞中mRNA和蛋白的相对表达含量较高,质粒TIMP1 RNAi的mRNA和蛋白表达含量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。构建过表达质粒(pcDNA3.1-TIMP1-K)转染HCT-8细胞后,与空白对照相比,第1～4天HCT-8细胞的活性无显著变化(P>0.05),第5～7天TIMP1基因过表达能够促进HCT-8细胞的增殖活性(P<0.05);构建干扰质粒(TIMP1 RNAi)转染HCT-8细胞后,与空白对照相比,第1～4天HCT-8细胞生长无显著变化(P>0.05),第5～7天TIMP1基因过表达能够抑制HCT-8细胞增殖(P<0.05)。结论 TIMP1基因过表达后能够促进人结肠癌细胞的增殖,在一定条件下还能够抑制人结肠癌细胞的增殖。     

HPV16 E_2蛋白对巨噬细胞的影响

目的研究人乳头状瘤病毒16 (HPV16) E_2蛋白对巨噬细胞的影响。方法构建真核表达pEGFP-C1/DBD、pEGFP-C1/HPV16 E_2及pEGFP-C1/TAD载体,观察HeLa细胞、巨噬细胞内HPV16 E_2与DBD、TAD表达、定位,检测HeLa细胞培养上清液内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,应用流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡率。结果GFP组、GFP-E_2组的细胞核、细胞质中均存在绿色荧光,GFP-DBD组仅细胞核中存在绿色荧光,GFP-TAD组仅细胞质中存在绿色荧光。巨噬细胞内融合蛋白的绿色荧光分布位置和HeLa细胞相同。GFP组、GFP-DBD组细胞培养上清液内TNF-α、IL-1β水平与空白对照组比较差异均无统计学意义(均P0.05);GFP-E_2组、GFP-TAD组细胞培养上清液内TNF-β、IL-1β水平显著高于空白对照组和GFP组(均P0.05);GFP-TAD组细胞培养上清液内TNF-α水平高于GFP-E_2组(P0.05)。GFP组、GFP-DBD组巨噬细胞凋亡率均略低于空白对照组,但差异均无统计学意义(均P0.05);GFP-E_2、GFP-TAD组巨噬细胞凋亡率高于空白对照组和GFP组(均P0.05);GFP-TAD组巨噬细胞凋亡率高于GFP-E_2组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HeLa细胞、巨噬细胞内均能检出HPV16 E_2与TAD、DBD、GFP融合蛋白的真核表达载体,其中GFP-TAD主要分布在细胞质内,GFP-DBD主要分布在细胞核内;同时,HPV16 E_2与TAD高表达能使巨噬细胞释放TNF-β、IL-1上调,进而对巨噬细胞凋亡进行有效诱导。     

人乳腺珠蛋白基因真核表达载体的构建及其表达

[目的]构建人乳腺珠蛋白(hMAM)基因的真核表达载体pcDNA3.1-hMAM,并观察重组载体在COS-7细胞中的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础.[方法]利用PCR方法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建真核表达载体pcDNA3.1-hMAM.将重组载体用脂质体转染法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法检测目的基因的表达.[结果]成功扩增hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM基因,在COS-7细胞中可检测到hMAM表达.[结论]hMAM基因的真核表达载体构建成功,为进一步进行DNA肿瘤疫苗研究提供了实验依据.