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1.
抗CD71人-鼠嵌合抗体的体外抗肿瘤效应研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 对抗CD71人-鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法 以表达CD71分子的3种人类肿瘤细胞(K562,CEM和SMMC-7721)为靶细胞,以正常人外周血单个核细胞(PBMC)为效应细胞,在效/靶细胞比为50:1的条件下,测定嵌合抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应(ADCC);以CEM和SMMC-7721为靶细胞,在有新鲜补体存在下,测定嵌合抗体的补体依赖性细胞毒效应(CDC)。结果 抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)能够通过识别CD71分子,并通过人抗体Fe段介导ADCC。在有新鲜补体存在下,介导CDC。结论 抗CD71人-鼠嵌合抗体对CD71^ 肿瘤细胞可介导ADCC和CDC。 相似文献
2.
目的:构建抗人乳腺癌单克隆抗体人鼠嵌合抗体,降低鼠源性抗体应用于人体的免疫排斥反应。方法:采用RT-PCR技术,从分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株CDI315B分离克隆抗体轻重链可变区基因,对其进行序列分析,将连接组建人鼠嵌合轻链和人鼠嵌合重链,然后分别将它们克隆到真核细胞表达载体pcDNA3。结果:构建的人鼠嵌合抗体基因克隆在真核细胞表达载体上。结论:人鼠嵌合抗体的构建为它的表达和临床应用打下基础。 相似文献
3.
目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构建含有重组基因的pIRES表达质粒pIRES/h2F5。转染293T细胞并用抗性药物G418选择培养。采用流式细胞术,检测瞬时转染细胞后嵌合抗体的表达情况。结果抗人CD28鼠人嵌合抗体得到表达并能与CD28分子特异性结合。结论抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建和瞬时表达是成功的,为后续构建稳定分泌抗人CD28鼠-人嵌合抗体的CHO基因转染细胞株奠定了基础。 相似文献
4.
用抗体工程法构建抗乙肝表面抗原(HBsAg)鼠/人嵌合抗体的嵌合基因,并在哺乳动物细胞中成功地表达。分离鼠McAb 2H1(抗HBsAg)轻、重链可变区基因,并连接到含有人轻链(Kappa)及重链(Gamma 1)恒定区基因的哺乳动物细胞表达载体中;用电穿孔法将嵌合基因导入小鼠SP2/0细胞,得到高效表达。2H1嵌合抗体能特异性地与HBsAg结合,并能有效地与亲代McAb竞争;与血源性多克隆乙肝免疫球蛋白(HBIG)比较,其具有特异性好、节约血源、价廉、质纯、无其他病毒,如HIV等污染制品的可能等优点,可用于阻断乙肝母婴传播及在意外感染时被动免疫。 相似文献
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目的 制备抗入CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交-杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定。方法 将抗入CD3单克隆抗体细胞株采用8-AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株,再通过FuGENE^TM6转染含neo基因质粒pCDaA3,制备成具有双标记杂交瘤αCD3 HAT^S G418^R亚系,与抗人IgMμ链单克隆抗体细胞株融合,通过ELISA法及流式细胞仪筛选,制备分泌BsAb的细胞株。结果 融合6次,共接种1080孔,共得5株抗CD3-抗IgM杂交-杂交瘤。经亚克隆后,其中2株体外连续传代培养2月仍保持良好的分泌BsAb功能。结论 采取细胞融合法可成功制备分泌BsAb的杂交-杂交瘤,其稳定性及效价与亲本杂交瘤相似。 相似文献
9.
目的:研究125I直接标记CEA人鼠嵌合抗体rch24的方法。方法:采用NBS(溴代琥珀酰亚胺)法进行碘标,并测定标记物的放射化学纯度、标记率和体外稳定性。结果:采用纸层析法测定的标记率和放射化学纯度分别为97.2%±0.4%和95.5%±0.2%;标记抗体体外4℃存放,放射化学纯度逐渐下降,14天后降为92.6%,35天后为89.3%。结论:标记物具有较高的放射化学纯度及稳定性,为体内治疗打下良好的基础。 相似文献
10.
目的 构建抗CD44抗体的单链抗体(anti-CD44-ScFv),为进一步应用基因工程抗体研究打下基础。方法 从分泌抗CD44单克隆抗体的杂交瘤细胞系HII44a中提取总RNA,经RT-PCR分离获得了轻、重链可变区(VL、VH)基因,用连接肽将其构建成具有VL-Linker-VH结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到分泌型蛋白表达载体PEV22b(+)中进行表达。结果 经测序表明,VH、VL及Linker的序列正确。ScFv在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的16%。能够特异性与CD44抗原结合。结论 成功构建抗CD44抗体单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础。 相似文献
11.
用杂交瘤技术建立三株分泌抗甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所获三种单克隆抗体经兔抗小鼠IgG亚类、IgM及IgA血清鉴定表明,两种为IgG_1,一种为IgA;三种含单克隆抗体小鼠腹水的滴度(ELISA法)均为51200以上;以竞争性固相抗体结合试验测定它们对抗原决定簇的特异性差异,结果发现三种单克隆抗体的抗原结合部位是不同的,但对抗原的结合有一定的相互竞争抑制现象。 相似文献
12.
目的:HER2/neu过度表达见于多种恶性肿瘤.作为肿瘤抗原,p185erbB2是一个理想的肿瘤治疗靶点.本实验在既往工作基础上,构建嵌合型抗p185erB2单克隆抗体(单抗)的真核表达载体,并在CHO-dhfr-细胞中表达,从而降低鼠源性抗体的免疫原性,为进一步的应用研究奠定基础.方法:RT-PCR扩增p185erbB2单抗1-2的轻、重链可变区基因,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中,脂质体转染CHO-dhfr-细胞.经RT-PCR、间接ELISA、Western blot检测人-鼠嵌合抗体的表达水平,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定.此外,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185erbB2的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用.结果:用RT-PCR、间接ELISA、Western blot方法证明人-鼠嵌合抗体在CHO-dhfr-细胞中表达;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185erbB2的细胞反应阳性,与低表达p185erbB2的细胞反应阴性;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185erbB2分子特异性结合;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185erbB2的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用.结论:CHO-dhfr-细胞表达的人-鼠嵌合抗体可与p185erbB2特异性结合,并可抑制高表达p185erbB2的肿瘤细胞生长,表明抗人p185erbB2人-鼠嵌合抗体具有肿瘤生物治疗的潜在应用价值. 相似文献
13.
Guanxin Shen Huifen Zhu Xiaolin Wang Yue Zhang Zhigang Zhu Shuo Wang 《华中科技大学学报(医学英德文版)》1999,19(1):6-9
Summary The effects of chimeric anti-CD4 human/murine chimeric antibody and murine anti-CD4 monoclonal antibody (McAb) on the proliferation
induced by anti-CD3 McAb, phytohemagglutinin (PHA), IL-2, and allogeneic cells were studied. The results showed that chimeric
anti-CD4 antibody and murine anti-CD4 McAb could inhibit the proliferation induced by the above inducers and the inhibitory
effects were related to the dosage of the antibodies.
This project was supported by a grant from the National Sciences Foundation of China (Serial No. 39370628). 相似文献
14.
目的研究抗人CD4DID2结构域多克隆抗体对HIV-1的抑制作用。方法经overlappingPCR构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3.1-mhD1D2m和pcDNA3.1-mhD2m,利用pcDNA3.1/V5-His—TOPO质粒载体的通用引物双向测序,测序结果用vectorNTI8.0软件与预期序列作比对,并通过假病毒感染实验检测其介导病毒感染能力,实验数据采用SPSS11.5统计学软件进行χ^2检验。pcDNA3.1-mhDID2m和pcD—NA3.1-mhD2m经DNA免疫BALB/c小鼠,所获多抗血清经假病毒中和实验检测其抗HIV-1中和能力,经FACS检测其与CD4抗原结合能力。结果所构建人鼠嵌合型CD4质粒pcDNA3.1-mhD1D2m能够介导HIV-1假病毒感染。质粒pcDNA3.1-mhD1D2m免疫小鼠8周后所获得的多抗血清稀释100倍后,对HIV-1毒株抑制率为76%~95%。质粒pcDNA3.1-mhD2m免疫小鼠所获得的多抗血清则无明显的中和作用。FACS检测显示mhD1D2m多抗血清与TZM-b1细胞表面的CD4可以特异性结合。结论抗人CD4D1D2结构域多克隆抗体对H1V-1具有较强的抑制作用,为AIDS治疗和疫苗研发提供实验依据。 相似文献
15.
目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。 相似文献
16.
目的:利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体?方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链可变区序列(Vκ),通过overlap PCR将Fab094的Fd段和linker-C-DDD基因重组为Fd-DDD,将其和Vκ分别克隆到真核表达载体中,共转染293Free style细胞,表达纯化该抗体?应用SDS-PAGE?Western blot?ELISA?免疫共沉淀?亲和力测定及免疫荧光试验检测该抗体的免疫学特性,用荧光抗体病毒中和试验检测其中和活性?结果:成功构建了全人源抗狂犬病毒二价抗体Fab094-DDD的真核表达载体,获得的二价Fab094-DDD抗体与抗原保持着较好的亲和力,能特异性结合狂犬病毒,中和效价为213.2 U/mg?结论:成功制备了抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体,具有较高的中和活性,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础,对于其他疾病双表位人源特异性抗体的制备也具有借鉴作用? 相似文献
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长春新碱载药红细胞制备及其生物学特性研究 总被引:9,自引:2,他引:7
目的:探讨红细胞作为长春新碱(vincristine, VCR)载体的可行性及其载药参数和生物学特性,为其应用提供实验依据.方法:改良低渗预膨胀法制备VCR载体红细胞,高效液相色谱法分析载体红细胞内、外液VCR含量,自动血液分析仪测定红细胞生理指标,考察红细胞VCR载药量、载药率和载体细胞回收率等参数.采用4℃保存定时提取上清液比较VCR含量并观测上清液溶血情况、渗透脆性检测,以显微镜观察等方法考察载体红细胞的载药释放、贮存稳定、渗透脆性和形态等生物学特性.结果:预膨胀红细胞与VCR的0.6%盐水溶液作用后,单位数量(1×109/ml)红细胞载药量最高,达49.59 μg;预膨胀红细胞与上述VCR溶液作用20 min后载药达到稳定;VCR浓度在50~2 000 μg/ml范围内时,单位数量红细胞的载药量(y, μg)可按y=0.098 2 x-2.465 8计算,线性相关系数r =0.996 1.红细胞总载药率为(61.42±3.69)%,载体红细胞回收率为(90.61±4.95)%.载体红细胞渗透脆性减低,形态无明显变化,体积略有增大与载药量成正比(r =0.988 0),药物释放缓慢,4 h连续释放率(11.35±1.65)%,可稳定贮存5 d.结论:红细胞可作为VCR载药,载药参数良好,生物学特性无明显改变. 相似文献
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Guan T Chen XL Wei YJ Lai Y Xie LY Liu ZY Zhang XM Liu HQ Zhang JJ Xie XY Liu SL 《四川大学学报(医学版)》2012,43(1):15-18
目的建立体外培养人羊水来源CD117阳性干细胞的方法,初步探讨CD117阳性干细胞的特性。方法通过孕中期羊膜腔穿刺获得86例羊水标本。采用CD117磁珠分选表达CD117抗原的羊水干细胞。对经过反复冻存的CD117阳性干细胞进行核型分析。分别经成脂诱导和成骨诱导分化,再分别使用油红O染色、茜素红染色。结果从61例标本中成功分离培养出CD117阳性细胞,经核型分析显示其染色体核型正常。CD117阳性细胞经成骨和成脂诱导后,茜素红和油红O染色阳性,说明可以向脂肪细胞和成骨细胞分化。结论基于本研究,孕中期羊水CD117阳性细胞的分选成功率为70.93%。CD117阳性细胞在体外培养中保持形态和遗传学的稳定。在特殊培养条件下,人源羊水CD117阳性干细胞在体外,可以诱导分化成为脂肪细胞和成骨细胞,可能应用于细胞移植和再生医学。 相似文献
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MonoclonalantibodiesagainstCD4molecule(anti-CD4McAb)ofhumanTlymphocyteshavebeensuccessfullyusedforthetreatmentofautoimmunediseasesandpreventionoforgantransplantationrejectioninhuman[1'Zj.However,murinemonoclonalantibodies(Ahs)haveimmunogenicityonhumanandproduceneutralizinghumananti-mouseantibodies(HAMA).ToreducetheimmunogenicityofmurineMcAbinhuman,chimericAhshavebeenproduced,inwhichtheVregionsofthemouseantibodywiththedesiredspecificityarecombinedwithhumanCregions["4j.Inthisstudy,anti-C… 相似文献
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小鼠乳腺癌细胞系高肺转移亚系(Ca761-P93)的筛选及其生物学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
本文在原有工作的基础上,对具有血道与淋巴道双向转移特性的小鼠乳腺癌Ca761-86细胞系进行了高转移潜能癌细胞亚系的筛选,使其自发肺转移率由未筛选时的20%稳定地提高到100%,定名为Ca761-P93,并对其生物学特性进行了研究,为肿瘤血道转移的实验研究提供了一个较好的高肺转移模型。 相似文献