细辛含药血清对SD大鼠DRG神经元INa的影响

[目的]探讨细辛含药血清对SD大鼠延髓背侧呼吸组(DRG)神经元钠通道电流(INa)的影响。[方法]①将30只SD大鼠随机分为空白血清组和含药血清组各15只,禁食12h后分别灌服细辛散剂药液和等体积的生理盐水,每日1次,连续8d。末次灌胃2h后眼眶采血。室温下静置30min后取上清液,2 500rpm离心25min,分离血清,置于56℃水浴30min灭活,过0.22μm微孔滤膜滤过除菌,分装,-20℃条件下保存备用。②SD大鼠,鼠龄1~3d,雌雄不限,采用膜片钳WCR,分别记录空白对照组、空白血清组和含药血清组大鼠DRG神经元INa的变化。[结果]空白血清组与空白对照组相比,无显著性差异(P>0.05),而细辛含药血清组与空白对照组、空白血清组相比均有非常显著性差异(P<0.01)。各组大鼠DRG神经元INa的生物特性无明显变化。[结论]细辛激活延髓DRG的吸气神经元(INs)可能是细辛抑制呼吸中枢的离子机制之一。     

细辛含药血清对SD大鼠DRG神经元IK的影响

目的探讨细辛含药血清对SD大鼠延髓背侧呼吸中枢(DRG)神经元延迟外向整流钾离子通道(IK)的影响。方法将30只SD大鼠随机分为空白血清组和含药血清组各15只,禁食12h后分别灌服细辛散剂药液和等体积的生理盐水,每日1次,连续8d。末次灌胃2h后眼眶采血。室温下静置30min后取上清液,2500r/min离心25min,分离血清,置于56℃水浴30min灭活,过0.22μm微孔滤膜滤过除菌,分装,-20℃条件下保存备用。鼠龄1-3d的SD大鼠,雌雄不限,采用膜片钳WCR,分别记录空白对照组、空白血清组和含药血清组大鼠DRG神经元IK的变化。结果空白血清组与空白对照组相比,无显著性差异(P>0.01),而细辛含药血清与空白对照组、空白血清组相比均有非常显著性差异(P<0.01)。各组大鼠DRG神经元IK的生物特性无明显变化。结论细辛对延髓DRG呼吸神经元延迟外向整流钾离子通道(IK)的激活作用可能是细辛抑制呼吸中枢的离子机制之一。     

膜片钳技术心肌细胞钠通道动力学研究

应用膜片钳全细胞法，研究豚鼠单个心室肌细胞的钠离子通道电流及其动力学特征。研究显示：ＩＮａ具有电压和时间依赖性，ＩＮａ在－５０ｍＶ激活，在＋４０ｍＶ反转。钠通道动力学包括稳态灭活曲线，使用依赖性阻滞及钠通道灭活后的恢复过程，对其特点的初步讨论表明，Ⅰ类抗心律失约物与受体亲和力，失活态钠通道受体解离的时间常数，以及其使灭活曲线向左移的电位不同，可以作为Ｉ类药物亚类的分类基础。     

细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

【目的】观察细辛和细辛配伍附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨其抗心律失常的作用机制。【方法】连续给药7 d后制备大鼠含药血清,采用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L型钙通道电流。【结果】细辛和细辛配伍附子含药血清均能增加大鼠心室肌L型钙通道电流,在0 m V钳制电压下,细辛含药血清使电流增加约(28.36±0.37)%,细辛配伍附子含药血清使电流增加(75.07±0.28)%。细辛含药血清使激活曲线、失活曲线左移,对恢复曲线无明显作用;细辛配伍附子含药血清使激活曲线、失活曲线左移,使失活后恢复时间延长。【结论】细辛配伍附子较单味细辛含药血清对心肌细胞L型钙通道的激活作用更强,表明药物配伍可增加疗效。     

心律平对心肌细胞钠钙通道的抑制效应

目的 研究抗心律失常药物心律平对通道电流的作用。 方法 运用细胞内微电极、电压箝和膜片箝技术从细胞动作电位、跨膜离子流和单通道三个水平研究心律平的作用。 结果 心律平对钠流、钙流有明确的抑制作用，减少晚钠通道电流爆发型模式的出现，并能抑制早期后除极的平台期振荡。 结论 心律平对心肌细胞钠通道和钙通道有明确抑制效应，为心律平应用于室上性和室性心律失常的治疗提供理论依据。     

单个心肌细胞钠通道电流动力学特点及其意义初步探讨

应用全细胞斑片钳技术记录酶学方法分离的豚鼠单个心室肌细胞离子通道电流。通过改变计算机内ＰＣＬａｍｐ软件包（７．７１版本，美国Ａｘｏｎ公司）中有关参数，设置钠通道电流（ＩＮａ）及ＩＮａ动力学研究的脉冲刺激方案。研究显示，ＩＮａ表现电压和时间依赖性，本实验条件下所引起的ＩＮａ能稳定地用于观钠通道灭活特性，使用依赖性阻滞以及通道灭活后恢复过程等动力学研究。本文对钠通道有关动力学特征及其意义作了初步探讨。     

次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白 mRNA表达的影响

目的 观察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞钠(Na)通道SCN5A亚基、钠钙交换蛋白(NCX)mRNA表达的影响.方法 体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定Na通道SCN5A及NCX mRNA表达.结果 HA作用15 min时,60和120 μmol/L HA均能增加心肌细胞膜Na通道SCN5A及NCX 的mRNA表达量(P<0.05);动态观察HA对心肌细胞上述基因表达的影响,60 μmol/L HA对心肌细胞作用15及60 min可引发Na通道SCN5A及NCX mRNA的表达量增多(P<0.05).结论 次乌头碱(≥60 μmol/L)可通过增加心肌细胞膜Na通道SCN5A、NCX mRNA表达,激活L-Ca通道,参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程,在乌头碱类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生.     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞钠通道电流的影响

目的 研究过氧化氢(H2O2)对单个大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)的影响.方法 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钠通道电流,观察1 mmol/L H2O2引起单个大鼠心室肌细胞INa改变.结果 在1 mmol/L H2O2作用下,大鼠心室肌细胞INa峰值电流密度从(19.95±4.58)pA/pF减少至(15.19±4.15)pA/pF(n=8,P＜0.05),电流-电压曲线上移,翻转电位左移,但对激活电位、峰电位无明显影响;H2O2对INa稳态激活曲线无明显改变,V0 5从(-64.54±0.16)mV左移至(-66.28±0.32)mV(n=8,P＞0.05),对其稳态失活曲线无明显改变,V0 5从(-91.46±0.17)mV左移至(-94.52±0.25)mV(n=8,P＞0.05);H2O2对INa失活后再激活曲线有明显改变,对照组τ为(6.43±1.04)ms,H2O2组τ为(8.31±1.48)ms(n=6,P＜0.05).结论 过氧化氢可以减少大鼠心肌细胞INa,且使其复活明显减慢.     

二十二碳六烯酸对大鼠心肌细胞通道的影响

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠心室肌细胞动作电位(AP)及钠通道电流(INa)的影响。阐述DHA抗心律失常的机制。方法:采用酶消化法获得大鼠心室肌细胞,用膜片钳技术分别记录0、20、40、60、80、100和120μmol/L DHA对大鼠心室肌细胞AP复极25%、50%和90%时程(APD25、APD50和APD90),对AP最大上升速率(Vmax)、幅值(APA)、超射值(OS)及INa的影响。结果:①不同浓度DHA对APD25、APD50和APD90呈浓度依赖性延长(P<0.05,n=20),对Vmax、APA和OS的影响无显著性差异(P>0.05,n=20)。②不同浓度DHA对INa呈浓度依赖性阻滞、I-V曲线上移、稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长,对稳态激活曲线无影响。在指令电压-30 mV时,上述浓度DHA对INa阻滞分别为(1.51±1.32)%、(21.13±4.62)%、(51.61±5.73)%、(67.62±6.52)%、(73.49±7.59)%和(79.95±7.62)%(P<0.05,n=20),DHA对INa的半效作用浓度(EC50)为(47.91±1.57)mol/L。结论:DHA对APD的延长及对钠通道的抑制作用可能是其抗心律失常机制之一。     

蜂胶黄酮类提取物对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的　研究蜂胶的聚酰胺柱分离组分C对Fe2 + /半胱氨酸氧化损伤的体外原代培养乳鼠心肌细胞的保护作用。方法　用 10 0 0 μmol/L的Fe2 + 和 5 0 0 μmol/L的半胱氨酸造成心肌细胞的损伤。加入蜂胶组分C (PropolisC)作为保护剂 ,用槲皮素作为阳性对照药。作用 2 4h后 ,用全自动生化分析仪测定培养介质中LDH的含量 ,用MDA和SOD试剂盒测定细胞中的MDA和SOD含量。结果　Fe2 + /半胱氨酸能明显造成心肌细胞氧化性损伤 ,使LDH释放量和MDA生成量增加、SOD活力下降。加入蜂胶组分C和槲皮素预处理后 ,在低剂量时(2 5 μg/ml)即能使培养介质中LDH量和细胞中MDA量下降 ,并能对SOD产生保护作用 (P <0 0 1) ,该作用呈现良好的量效关系。结论　蜂胶组分C可以减轻活性氧自由基对生物膜的破坏和对SOD的损伤 ,表明蜂胶组分C具有抗氧化作用     

间歇性低氧及运动对大鼠红细胞膜Na^＋．K^＋．ATP酶和Ca^2＋ -Mg^2＋ -ATP酶活性的影响

【目的】观察低氧和训练对红细胞膜Na^＋．K^＋．ATP酶和Ca^2＋ -Mg^2＋-ATP酶活性的影响。【方法】雄性Wistar大鼠分为常氧对照组、常氧运动组、低氧对照组、低氧运动组。分别对常氧运动、低氧运动组进行游泳训练,对低氧对照、低氧运动组进行低氧刺激。用导管法测血压和心率,用比色法测红细胞膜Na^＋K^＋-ATP酶Ca^2＋ -Mg^2＋ - ATP酶活性。【结果】（1）与常氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组的体重降低（P〈0．01）;与低氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组体重也降低（P〈0．01）。（2）4组大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压及心率的差别均不显著。（5）与常氧对照组比较,低氧对照组和低氧运动组的№^＋ -K^＋ - ATP酶活性降低（P〈0．01,P〈0．05）。（4）与常氧对照组比较,低氧对照组的Ca^2＋ -Mg^2＋ -．ATP酶活性降低（P〈0．01）;与常氧运动组比较,低氧运动组的Ca^2＋ Mg^2＋ -ATP酶活性降低（P〈0．01）。【结论】低氧刺激会降低大鼠红细胞膜Na^＋-K^＋-ATP酶和Ca^2＋ -Mg^2＋ -ATP酶活性;常氧运动则提高Ca^2＋- Mg^2＋ -ATP酶活性。结果提示,间歇性低氧运动对大鼠红细胞膜的Na^＋-K^＋ -ATP酶和Ca^2＋ -Mg^2＋ -ATP酶活性具有一定的保护作用。     

缺血再灌注小鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的改变

目的观察缺血再灌注损伤对小鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流的直接影响,探讨缺血再灌注损伤中Ca2+超载的机制。方法采用全细胞打孔膜片钳技术,观察缺血再灌注损伤对急性分离的小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流(INa/Ca)的影响。细胞外灌流代谢抑制剂(5 mmol/L氰化钠和10 mmol/L脱氧葡萄糖)模拟化学性心肌细胞缺血状态。结果缺血8m in明显抑制了小鼠心室肌细胞钠钙交换蛋白内向和外向电流〔在-100 mV,电流从(-0.04±0.01)nA减小到0 nA;在+50mV,电流从(0.25±0.08)nA减小到(0.11±0.03)nA〕。而随后的再灌注则导致钠钙交换蛋白电流迅速而明显的增大,尤以外向电流增大更加显著〔在+50 mV,电流从(0.25±0.08)nA增大到(0.49±0.12)nA〕。结论缺血再灌注直接影响小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白的功能及状态,使Na+/Ca2+交换蛋白的反向转运功能明显增强,这种改变可能是导致缺血再灌注损伤中Ca2+超载的关键因素。     

单个心肌细胞钠通道电流动力学特点及其意义初步探讨

应用全细胞斑片钳技术记录酶学方法分离的豚鼠单个心室肌细胞离子通道电流。通过改变计算机内ＰＣｌａｍｐ软件包（７．７１版本，美国Ａｘｏｎ公司）中有关参数，设置钠通道电流（Ｉｎａ）及ＩＮａ动力学研究的脉冲刺激方案。研究显示，ＩＮａ表现电压和时间依赖性，本实验条件下所引导的ＩＮａ能稳定地用于对钠通道灭活特性，使用依赖性阻滞以及通道灭活后恢复过程等动力学研究。本文对钠通道有关动力学特征及其意义作了初步探讨。     

反向钠钙交换体在大鼠心脏钙预处理中的作用

目的探讨钙预处理时反向钠钙交换体对抗钙矛盾损伤的作用及机制。方法25只SD大鼠随机等分为5组：正常对照（Control）组、钙矛盾（Ca PD）组、钙预处理（CPC）组、反向钠钙交换体抑制剂（KB-R7943）＋CPC组和KB-R7943＋Ca PD组。采用离体大鼠心脏Langendorff逆行灌注模型,观察各组心脏冠状动脉流量（CF）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压变化速率（dp/dt）及冠状动脉循环流出液心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度的变化,HE染色观察各组心脏组织形态。结果与Ca PD组相比,CPC组CF、LVDP、dp/dt均显著提高（P〈0.001）,冠状动脉循环流出液中cTnI水平显著降低（P〈0.001）。而钙预处理过程中加入反向钠钙交换体抑制剂KB-R7943,其心肌保护作用均被明显减弱（P〈0.05）。结论钙预处理能够有效对抗钙矛盾对心肌造成的损伤,其机制涉及钙预处理时钠钙交换体反向交换活性的上调。     

内皮素—1对大鼠心肌细胞正性肌力作用的研究

目的探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠心肌细胞正性肌力作用的细胞内机制.方法将离子敏感性荧光指示剂indo-1和SNARF-1载入大鼠心室肌细胞内,荧光显微镜法同时测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)、pH(pHi)和细胞长度.结果在17例大鼠心肌细胞中,只有8例对灌注ET-1表现出明显的细胞缩短反应,即正性肌力作用,占47%,另9例对灌注ET-1没有反应.ET-1100nmol/L可使细胞缩短的幅度增加至给药前的(202.85±28.13)%,P＜0.01;[Ca2+]i瞬间变化的幅度增加至给药前的(132.06±10.93)%,P＜0.05;pHi与对照组相比轻度增加.结论ET-1可直接作用于大鼠心室肌细胞引起正性肌力作用,其作用机制是增加了[Ca2+]i瞬间变化,而不是明显增加了PHi.     

葛根素对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究葛根素(Pue)处理后对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制.方法 原代培养新生大鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,分为缺氧/复氧对照组和缺氧/复氧 葛根素保护组(葛根素浓度分别为1、0.1、0.01g/L).观察各组心肌细胞形态结构及超微结构的变化,测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)含量和一氧化氮(NO)分泌量,以及Pue对上述指标的影响.流式细胞仪计数各组细胞凋亡率.结果 Pue可明显提高SOD和LDH活性,降低MDA含量,减少NO分泌量,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);电镜下治疗组心肌细胞结构接近正常;流式细胞仪计数治疗组细胞凋亡率明显低于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 葛根素处理对体外培养心肌细胞模拟缺氧/复氧损伤模型有明显的保护作用,其保护机制可能与葛根素稳定心肌细胞膜和减轻氧自由基损伤,并且抑制缺氧/复氧损伤中的心肌细胞凋亡有关.     

雷帕霉素对大鼠移植心脏血管病变的作用

目的研究雷帕霉素在大鼠移植心脏血管病变中的作用。方法建立大鼠腹腔心脏移植模型。异系移植以近交系Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,随机分为雷帕霉素组(以雷帕霉素每天1.25 mg/kg灌胃)和环孢霉素组(以环孢霉素A每天10 mg/kg灌胃),于移植后90天留取移植心脏待检;同系移植组以Wistar大鼠作供、受体,行心脏移植未行抗免疫排斥治疗。假手术组为仅做腹部开关手术的Wistar大鼠。采用HE、Van Gie-son染色分析移植心脏血管狭窄的情况。结果假手术组心肌无炎性细胞浸润,冠状血管无狭窄。同系移植心脏无明显炎性细胞浸润,血管内膜稍增厚,管腔无狭窄。环孢霉素组可见冠状动脉管腔明显狭窄,血管壁及心肌内均可见大量炎性细胞浸润,心肌变性坏死,心肌纤维化。雷帕霉素组冠状血管狭窄程度及炎性细胞浸润情况明显减轻,与环孢霉素组比较差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素具有预防大鼠心脏移植物血管病变的作用。     

细胞外信号调节激酶对心肌细胞钠氢交换体调控的作用

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）对心肌细胞钠氢交换体（NHE）的调控作用。方法：用氯化铵诱导乳鼠心肌细胞内酸化,用荧光指示剂（BCECF／AM）法测定细胞内pH值,钠氢交换体的活性用酸化后每分钟pH值的变化率（dpHi／dt）表示,观察使用ERK特异性抑制剂U0126后对NHE活性的影响;用Western blotting检测心肌细胞ERK蛋白的磷酸化水平。结果：用ERK的选择性抑制剂U0126（3μmol／L）预孵育5min,与模型组比较,U0126组可以使钠氢交换的活性下降49．46％（P〈0．05）;与模型组比较。ERK的磷酸化水平降低66．5％（P〈0．05）。结论：细胞内酸化激活NHE和ERK的过程中,NHE的激活受到ERK的调控。     

哇巴因特异性调节Na^＋/K^ATP酶表达的实验研究

目的探讨哇巴因特异性调节Na＋/K＋-ATP酶表达的作用机制。方法用相同的实验条件作用于人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）、人乳腺癌细胞株（MCF-7）和肝癌细胞株（HepG2）后,用western blot、免疫荧光r、eal-time PCR等方法观察哇巴因对细胞膜表面Na＋/K＋-ATP酶的调节作用。结果将哇巴因作用于HKCs、MCF-7和HepG2后,通过和Na＋/K＋-ATP酶受体结合,刺激Na＋/K＋-ATP酶的内吞作用,同时加速了酶的降解。另一方面,哇巴因能够特异性地调节细胞Na＋/K＋-ATP酶的表达。用相同的实验条件作用于HKCs、MCF-7和HepG2后,两种肿瘤细胞株的Na＋/K＋-ATP酶细胞量减少,而HKCs的Na＋/K＋-ATP酶反而增加。用PCR方法研究哇巴因对Na＋/K＋-ATP酶的转录是否有影响,根据实验结果可以判断,哇巴因通过特异性调节Na＋/K＋-ATP酶转录水平从而达到特异性调节Na＋/K＋-ATP酶表达的作用。结论根据Na＋/K＋-ATP酶表达的变化可以判断哇巴因对细胞生长的调节作用,Na＋/K＋-ATP酶可能成为癌症治疗的新靶点。