体外培养自体黑素细胞移植治疗白癜风78例疗效观察

目的评价自体黑素细胞培养移植治疗白癜风的疗效和影响因素。方法临床选择稳定期白癜风患者78例,采用自体黑素细胞培养与移植治疗方法,记录疗效和并发症,分析可能影响因素。结果 78例患者总计189处皮损,98处皮损(51.85%)获得了90%以上的复色,53处皮损(28.04%)获得了50%~90%以上的复色,总有效率达到79.89%;节段型白癜风患者有效率为86.04%,优于局限型白癜风患者(83.54%)和泛发型白癜风患者(71.64%)的治疗效果;面颈部位的皮损治疗效果最佳(有效率87.80%),要优于躯干部(83.67%)和四肢部位(80.39%),手足部位治疗效果最差(有效率68.75%),黑素细胞分裂时间≤3.5 d的移植有效率明显高于3.5 d者(P0.05)。结论自体培养黑素细胞移植是治疗稳定期白癜风的一种有效方法,其疗效与白癜风的分型、皮损的部位和黑素细胞的生物活性有关。     

干细胞因子及其受体与白癜风

在皮肤表皮层，干细胞因子表达于角质形成细胞，其受体表达于黑素细胞，二者不但参与神经嵴细胞发育为黑素细胞进程中黑素细胞分化、增殖和迁移过程，而且在维持成熟黑素细胞正常功能中也发挥作用。阻断干细胞因子与其配体的结合可导致黑素细胞合成黑素功能受损，白癜风患者皮损中发现二者存在表达异常；因此，干细胞因子及其配体可能参与白癜风的发病过程。     

分段毛囊移植治疗毛发部位白癜风

【摘要】 目的 探讨分段毛囊移植治疗特殊部位白癜风的疗效。方法 2016年12月至2018年12月在杭州市第三人民医院皮肤科纳入10例19 ~ 28岁稳定期白癜风患者（男4例,女6例）,共26处白斑合并白发,其中18处为头皮,8处为眉部。采用毛囊单位提取法从枕部或耳后区域获取毛囊,并均分为上下两部分。患者每处白斑合并白发皮损分为2部分,上下两部分毛囊分别移植于白斑的不同区域。术后每4周随访1次,观察复色及毛发生长情况。结果 12周时,移植毛囊上部26处白斑中痊愈3处,显效5处,好转12处,无效6处,有效率30.8%（8/26）,且均未见毛发生长;移植毛囊下部的26处皮损中痊愈5例,显效7例,好转11例,无效3例,有效率46.2%（12/26）,8处皮损出现毛发生长。移植毛囊上部组与移植毛囊下部组有效率差异无统计学意义（χ2 = 1.30,P = 0.25）。结论 分段毛囊移植术适用于头皮和眉部白癜风合并白发的治疗。     

过氧化氢对培养白癜风黑素细胞超微结构的影响

目的 探讨白癜风黑素细胞对外源性氧化剂的敏感性及氧化应激在白癜风发病中的作用.方法 以0.5mmol/L过氧化氢分别处理4例白癜风患者外观正常皮肤及6例正常对照皮肤培养的黑素细胞,采用透射电镜观察细胞的形态学变化,并应用图像分析技术和形态计量学方法,测定线粒体、粗面内质网及黑素小体的超微结构变化.结果 0.5mmol/L过氧化氢对正常人黑素细胞形态学及主要细胞器超微结构无明显影响.过氧化氢处理后的白癜风黑素细胞线粒体、内质网分别与处理前及正常对照处理后比较,数量明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01).线粒体局部空化,内质网扩张.部分黑素小体体积显著增大,但黑素小体数量与过氧化氢处理前及正常对照处理后比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 过氧化氢可能通过破坏细胞的能量代谢和蛋白合成系统,使黑素细胞功能逐渐减退,促使白癜风的发生.     

白癜风表皮黑素细胞超微结构及小眼畸形相关转录因子转录调控研究

目的 研究白癜风黑素细胞超微结构和小眼畸形相关转录因子 （MITF）及其转录调控的酪氨酸酶相关蛋白（TRP）与白癜风临床类型与病程的相关性。方法 选择不同病程的寻常型白癜风（VV）12例和节段型白癜风（SV）8例,分别取白斑区、白斑边缘正常肤色区和远离白斑正常肤色区的表皮片,经组织学确定其表皮的完整性。透射电镜观察10例患者（VV 6例,SV 4例）不同区表皮黑素细胞的超微结构特点。对所有20例远离白斑正常肤色区的表皮片黑素细胞进行培养,应用免疫印迹方法检测 MITF及其转录调控的酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）和酪氨酸酶相关蛋白2（TYRP2）的表达水平。结果 白癜风表皮黑素细胞超微结构病理改变：10例中7例白斑区表皮内未见黑素细胞,1例短病程和2例长病程VV分别可见少量黑素体显著减少或缺失的黑素细胞;白斑边缘正常肤色区,6例VV中,3例病程小于15个月者可见黑素细胞超微结构异常,而4例SV中仅1例异常;远离白斑正常肤色区,10例黑素细胞超微结构均正常。白癜风表皮黑素细胞MITF及其转录调控TRP的表达：VV的MITF表达下调与TYR、TYRP1、TYRP2的表达下调一致;SV存在MITF显著表达下调,而TYR、TYRP1、TYRP2几均正常表达。结论 VV和SV可能存在不同的表皮黑素细胞超微结构病理改变和MITF转录调控机制。     

自体黑素细胞移植治疗白癜风细胞接种量与疗效关系的研究

目的 研究自体黑素细胞移植治疗白癜风细胞接种量与疗效的关系。方法 共移植治疗632例稳定期白癜风患者,采用随机分组的方法分为4组,其中201例患者黑素细胞接种量为（3.0 ~ 4.9） × 104个/cm2,303例接种量为（5.0 ~ 7.9） × 104个/cm2,82例接种量为（8.0 ~ 9.9） × 104个/cm2和46例接种量为（10.0 ~ 12.0） × 104个/cm2。负压吸疱获取患者正常表皮片,Hu16培养基体外培养黑素细胞,经2 ～ 5代体外培养,受皮区应用超脉冲CO2激光磨削去表皮后,按照不同的黑素细胞密度进行移植。随访观察6、12和24个月患者色素恢复比率和色素匹配情况。结果 共治疗632例稳定期白癜风患者。随访6个月时,52.85%患者皮损复色面积超过90%,82.28%患者皮损复色面积超过50%,4个组间痊愈率和有效率差异无统计学意义（均P > 0.05）。随访6、12和24个月,黑素细胞接种量（5.0 ~ 7.9） × 104个/cm2组色素匹配良好率明显高于其他3组（均P < 0.05）。各组病例移植后6个月时与正常皮肤颜色色素匹配良好率均明显低于12和24个月时（均P < 0.05）;随访12个月与正常皮肤颜色色素匹配良好率与随访24个月差异均无统计学意义（均P > 0.05）。结论 自体纯培养黑素细胞移植是治疗稳定期白癜风的有效治疗手段,黑素细胞最优接种量为（5.0 ~ 7.9） × 104个/cm2,皮肤颜色色素匹配度随时间升高。 【关键词】 白癜风; 黑素细胞; 细胞移植; 细胞计数     

白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体超微结构的电镜观察

【摘要】 目的 探讨白癜风患者皮损边缘黑素细胞线粒体结构的变化。方法 在透射电镜下观察健康对照、进展期白癜风及稳定期白癜风患者皮损边缘黑素细胞形态,体视学方法测量线粒体体密度（Vv）、表面积密度（Sv）、数密度（Nv）等参数。结果 健康对照组黑素细胞可见大量黑素小体（28.57 ± 3.21）,以Ⅲ、Ⅳ期为主,线粒体规则分布在细胞内,结构正常、嵴密集,部分细胞胞质内可见自噬小体。进展期和稳定期白癜风黑素细胞内黑素小体数量减少,单位细胞内黑素小体数量分别为22 ± 6.16和17.43 ± 6.24,其中,Ⅲ期黑素小体显著减少,线粒体大小不一、形态多样,大部分线粒体明显肿胀,嵴模糊、排列紊乱甚至断裂,呈空泡状改变,未见线粒体自噬现象。线粒体形态结构定量研究显示,健康对照组Nv、Vv、Sv分别为（7.194 ± 1.434） μm－3、（4.8 ± 1.2）%、（2.42 ± 0.86） μm－1;进展期白癜风组Nv、Vv、Sv分别为（4.055 ± 0.906） μm－3、（7.4 ± 2.1）%、（3.58 ± 1.15） μm－1;稳定期白癜风组Nv、Vv、Sv分别为（5.311 ± 0.873） μm－3、（6.5 ± 1.4）%和（2.82 ± 0.94） μm－1,组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论 白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体受损,且进展期损伤程度大于稳定期。 【关键词】 白癜风; 黑素细胞; 线粒体; 显微镜检查,电子,透射     

白癜风免疫学研究进展

白癜风相关的免疫学研究已成为热点，包括表皮细胞因子表达的失衡和细胞因子网络对黑素细胞的调节；细胞免疫在白癜风发病机制中的作用及特异性T细胞受体识别抗原的分子和功能基础：白癜风的发病与其他自身免疫性疾病的关系；凋亡在黑素细胞破坏过程中的作用等。就白癜风相关的免疫学发病机制进展进行综述。     

细胞因子在白癜风发病机制中的作用

白癜风由于表皮黑素细胞的功能丧失而引起.细胞因子通过自分泌或旁分泌的方式影响黑素细胞的生物学特性.多种细胞因子及黑素细胞表面存在的细胞因子受体在黑素细胞的生长,分化、增殖、凋亡及其黑素产生及转运过程中起重要作用.促黑素细胞激素、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、干细胞因子、碱性成纤维细胞生长因子等促进黑素细胞的生长、分化、增殖,肿瘤坏死因子-α、白介素等抑制黑素细胞生长.     

人毛囊内无色素黑素细胞的原子力显微镜观察

目的用原子力显微镜观察人头发毛囊内无色素黑素细胞的表面结构。方法分离酶Ⅱ消化带毛囊的头皮，游离单个毛囊，以胰酶／EDTA消化之，获取细胞悬液，以添加黑素细胞生长物质的254培养基重悬细胞，常规培养。传第3代后接种到内置云母片的6孔培养板中，细胞贴附到云母片上后，固定．原子力显微镜常温常压下，触摸式扫描。结果毛囊无色素性黑素细胞多呈梭形，有2个突起，少数有3个树突。每个树突无明显的二级分枝，个别在树突侧缘有隆起。在一级树突的顶端可见丝状伪足。结论毛囊内无色素性黑素细胞形态不成熟，不能转运黑素颗粒到角质形成细胞，但它有黑素小体运动的物质基础——丝状伪足。     

茶多酚对CD8+T细胞杀伤白癜风患者黑素细胞的保护作用研究

目的 探讨茶多酚对CD8+T细胞杀伤白癜风患者黑素细胞的保护作用.方法 取白癜风患者白斑边缘处皮片组织,培养CD8+T淋巴细胞,细胞纯度用流式细胞仪进行鉴定,通过和黑素细胞共培养验证其针对黑素细胞的杀伤作用.将不同浓度茶多酚加入CD8+T细胞和黑素细胞共培养的体系,用流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡.结果 取白癜风皮损边缘表皮组织中成功培养CD8+T淋巴细胞,纯度达90％以上,高表达活化抗原CD137和CD69.CD8+T细胞和黑素细胞共培养后,可明显诱导黑素细胞凋亡.200 μg/ml和400 μg/ml浓度茶多酚处理均可以降低黑素细胞的凋亡率.结论 白癜风皮损边缘组织来源的CD8+T细胞对白癜风患者黑素细胞有明显杀伤作用.茶多酚对抗CD8+T细胞杀伤黑素细胞,从而对黑素细胞有一定的保护作用.     

Experimental approaches to assess melanocytes mosaicism in segmental vitiligo

Vitiligo is an autoimmune disease of the skin that results in localized or disseminated white macules. One common feature of several existing classification protocols is the distribution of the disease into two main subtypes, non-segmental vitiligo (NSV) and segmental vitiligo (SV). SV is characterized by depigmentation spreading within one or more skin segments while NSV is widespread. Several clinical-epidemiological observations suggest that SV has distinct autoimmune pathophysiology compared to NSV. Furthermore, the clinical distribution pattern of SV lesions closely resembles other melanocyte mosaicism diseases. These observations led us to hypothesize that SV is caused by a localized autoimmune reaction targeting epidermal mosaicism melanocytes. Here, we proposed examples of experimental approaches to assess mosaicism in SV patients.     

黑素细胞及相关细胞群参与白癜风发病的研究进展

【摘要】 白癜风发病机制复杂,黑素细胞缺失是核心。目前认为除黑素细胞自身缺陷外,表皮和真皮细胞群的功能异常及其与黑素细胞的交互作用对白癜风的发病同样重要,充分而准确地了解不同病期白癜风皮肤全层细胞、组织的病理生理状态,对认识和治疗白癜风有重要作用。本文旨在综述黑素细胞及相关细胞群在白癜风发病中作用的研究进展。     

自体表皮细胞悬液移植治疗白癜风影响因素

自体表皮细胞悬液移植是一种将自体表皮细胞不经培养直接移植至白斑区从而达到治疗白癜风的方法,具有简便、省时、易于操作等优点.为提高移植的疗效,近年来研究者在改良细胞悬液的制备方法、改进移植技术、寻找最佳的悬液移植浓度等方面进行不断的探索.未来研究的重点在于如何更加有效地提高细胞悬液中细胞数目及细胞活力、增大移植治疗的面积以提高治疗有效率.     

HMB-45抗原在毛囊黑素细胞中的表达

用单克隆抗体ＨＭＢ－４５，以ＡＰＡＡＰ法对２０份头皮活检标本的９８个毛囊组织进行染色。其中２０个毛囊为生长早期，６３个为成熟生长期，７个为退行期和８个是休止期。结果，５２个成熟生长期及２０个生长早期毛囊的黑素细胞与单克隆抗体ＨＭＢ－４５显著结合。所有退行期、休止期及工１１个成熟生长期毛囊未被染色。结果提示；ＨＭＢ－４５在毛囊中的表达随毛发生过周期而变化，且与黑素细胞功能活性状态有关。     

Treatment of recalcitrant vitiligo by autologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting in the west of Iran

BackgroundVitiligo is a common disease with a high burden, and its recalcitrant type is unresponsive to current medical treatments. Autologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting, which is a simple and experience-based procedure, has been suggested for the treatment of vitiligo.ObjectiveTo assess autologous non-cultured and trypsinised melanocyte grafting in recalcitrant vitiligo.MethodsThis clinical trial was done on 28 patients (20 females and 8 males). After demarcation and preparation of both donor and recipient sites, both sites were shaved by a curette. The materials harvested from the donor site were trypsinized and centrifuged. The resulting suspension was mixed with hyaluronic acid gel and was spread over the shaved recipient area.ResultsTwenty-eight patients with a total of 108 lesions and a mean age of 25.93 ± 7.11 years were included in the present study. Generalized vitiligo (57.1%) was the most common clinical type and the face and neck regions (38%) were the most frequent treated sites. Good to excellent repigmentation was seen in the face and neck, trunk, upper extremity, and genitals in 31 (57.4%), 11 (20.4%), 9 (16.7%) and 3 (5.5%) patients, respectively. Face and neck showed significantly better results (p < 0.05).Study limitationsLow sample size and single-center study.ConclusionAutologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting is a safe method with satisfactory outcomes in recalcitrant vitiligo. Appropriate training of physicians and proper use of specialists’ experiences can be effective in increasing the improvement rate.     

Integral hair lipid in human hair follicle

Integral hair lipid (IHL) is bound to the keratinized cell surface to make an environmentally resistant lipid envelope. It is mainly positioned on the hair cuticle and inner root sheath. IHL in the hair follicle may regard as hair barrier to be similar to the epidermal lipid layer functioning as skin barrier. Major constituents of IHL are fatty acid, phytosphingosine, ceramide in decreasing order. Minor constituents of IHL are cholesterol, cholesterol sulfate and cholesterol oleate. Cuticle or cortical cell surface in hair are abundant in fatty acids unlike the keratinized area of epidermis or sebaceous gland, and about 30-40% of such fatty acids are composed of 18-methyl-eicosanoic acid which is known to be bound to proteins by ester or thioester bond. Various factors including moisture, solvent, oxidative damage during bleaching or permanent waving affect IHL. Photochemical changes also can occur in IHL as well as in hair protein and hair pigment. Lipid metabolism is thought to play an essential role in lipid envelope of hair, but also involvement in hair development and function.     

Expressional changes in the intracellular melanogenesis pathways and their possible role in the pathogenesis of vitiligo

BACKGROUND: Main pathway in human melanocytes through which signal from the melanocortin system reaches the melanogenesis enzymes is cAMP/PKA pathway and it is modulated by Wnt and MAPK pathways. In our previous study we established significant increase of melanocortin receptor expression in unaffected skin of vitiligo patients compared to healthy subjects. OBJECTIVE: The aim of this study was to assess the gene expression profile of the intracellular signalling pathways linking melanocortin system with enzymes involved in melanogenesis. METHODS: Using QRT-PCR method, mRNA expression levels of eight genes related to signal transduction from the melanocortin system to melanogenesis enzymes was measured in lesional and non-lesional skin of vitiligo patients and in the skin of healthy control subjects. Following genes were analyzed in the study: MITF, CREB1, p38, USF1, PIK3CB (PI3K), RPS6KB1, LEF1 and BCL2. RESULTS: The mRNA levels of MITF, LEF1, p38, PIK3CB and RPS6KB1 were decreased in lesional skin of vitiligo patients compared to skin of healthy control subjects. We also found increased expression of USF1 and BCL2 in non-lesional skin of vitiligo patients compared to skin of healthy control subjects. mRNA levels of MITF and BCL2 were decreased in lesional skin of vitiligo patients compared to non-lesional skin of vitiligo patients. CONCLUSIONS: Present study indicates increased expression of the genes of the intracellular melanogenesis pathway in the non-lesional skin of vitiligo patients. This finding suggests activation of melanogenesis pathway in the non-lesional skin of vitiligo.     

自噬在白癜风发生发展中的作用

自噬是细胞的中枢性机制,运送细胞器和细胞质到溶酶体中降解,使分子成分再循环.白癜风是一种获得性色素脱失性皮肤病,以皮损内黑素细胞丢失或功能障碍为特征.白癜风对患者的生活质量造成很大影响,目前其发病机制尚未明确.经研究发现,抗紫外线相关基因的多态性、角质形成细胞中黑素小体的自噬降解、自噬途径和氧化应激的协同作用、微管相关蛋白轻链3调控小眼畸形相关转录因子表达等机制,影响白癜风的发生发展.最近的研究表明,维生素D可以诱导多种细胞类型自噬,目前广泛用于白癜风局部治疗的维生素D衍生物卡泊三醇,也能诱导黑素细胞自噬.因此自噬与白癜风关系的研究有望给白癜风的治疗提供新思路.