CD74-ROS1-L1951R点突变质粒的构建与鉴定

目的通过重叠延伸PCR技术构建CD74-ROS1-L1951R点突变质粒。方法根据CD74-ROS1融合基因序列和真核表达质粒p CM V-C-Flag上的多克隆位点设计引物,利用重叠延伸PCR技术对CD74-ROS1融合基因进行基因定点突变得到CD74-ROS1-L1951R点突变融合基因,随后将其酶切定向连入真核表达质粒p CMV-C-Flag启动子下游,构建p CMV-C-Flag-CD74-ROS1-L1951R重组质粒。重组质粒经菌落PCR、双酶切鉴定和测序,鉴定目的基因是否插入p CM V-CFlag质粒及定点突变是否成功。结果通过双酶切鉴定和测序结果显示,质粒的方向及序列正确,阅读框正确无误,表明CD74-ROS1-L1951R基因成功插入p CMV-C-Flag质粒,且CD74-ROS1-L1951R基因定点突变正确。结论成功构建了p CM V-C-Flag-CD74-ROS1-L1951R真核表达重组质粒,为研究CD74-ROS1点突变导致的耐药机制奠定了基础,可用于后续研究。     

医学检验与临床相结合是发展的重要趋势

医学检验是现代科学实验技术与生物医学相结合,并有多种学科交叉的医学应用技术学科,随着医学科学和高技术的飞速发展,分子生物学及计算机在检验学科中的广泛应用,临床检验技术日益提高,大型检验科室管理和科研能力也得到质的飞跃,为疾病的诊断、疗效、病程监测和预后判断提供更为科学的检测手段,为临床及科研提供更为准确的实验数据与价值信息.     

古核嗜热菌组蛋白基因多点突变的新方法

嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低，限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术，在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进，参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表，设计了一对含有5个精氨酸突变密码子的单链DNA，全长为115nt，在3‘端有20nt互补序列。将单链DNA在94℃，45℃复性，使其互补结合，72℃进行延伸反应，得到含有突变位点的组蛋白基因；再以此基因为模板设计相应的一对引物进行PCR扩增反应，得到大量组蛋白突变基因。该研究为一些序列已知，片段较小基因的多态突变提供了一种简单、易行的方法。     

基因突变或多态性与血栓形成研究进展

血栓栓塞性疾病（Ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ，ＴＥＤ） ,是遗传性和获得性危险因素共同作用的结果。目前 ,在许多国家 ,ＴＥＤ仍然是一种高发生率及高死亡率的疾病。分子生物学技术的发展 ,为从基因水平研究血栓形成提供了技术支持。近年来 ,许多学者开始进一步研究遗传基因突变或多态性与血栓形成的关系 ,现将近年主要研究进展分述如下。一、凝血因子Ｖ（ＦＶ）基因突变与多态性１．活化的蛋白Ｃ（ＡｃｔｉｖａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＣ，ＡＰＣ）系统及活化的蛋白Ｃ抵抗（ＡｃｔｉｖａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎＣＲｅｓｉｓ…     

c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21~（ras）表达的序列特异性

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性．     

检验医学的发展前景、趋势及潜在瓶颈

现代医学中,检验医学在对患者的诊断工作中起着至关重要的作用,为临床医学提供一些重要的客观诊断依据．在一些疾病中甚至有决定性的意义。本文对近年来医学检验发展的现状、医学检验发展的前景以及目前检验医学潜在的瓶颈做一简要阐述。     

检验设备管理体会

<正>随着机械电子技术、计算机技术和医学生物技术等现代科技的发展,检验医学技术在近50年来,特别是近20年来取得了突飞猛进的发展。目前血液学检验、临床生化临检验、临床免疫学检验、微生物检验及分子生物学检验大部分已实现半自动化或全自动化,特别是近几年来PCR技术、流式细胞技术等的广泛应用,检验设备进入了一个新的发展阶段。     

作用于SMN2的脊髓性肌萎缩治疗药物研究进展

脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy, SMA)是一种严重的遗传性神经肌肉疾病,由于其存活运动神经元1 (survival motor neuron, SMN1)基因缺失或突变导致其编码的SMN蛋白水平降低,引起α神经元的缺失和进行性肌肉萎缩,导致运动功能的丧失和寿命的缩短。研究发现,促进SMN2基因中外显子7的包含,可产生具有完全功能的SMN蛋白,改善疾病的症状。迄今为止,包含基因治疗药物onasemnogene abeparvovec在内,只有3种用于SMA的治疗药物上市。本文简要介绍了反义寡核苷酸药物诺西那生钠(nusinersen)和小分子化学药物利司扑兰(risdiplam),并综述了处于临床及临床前研究阶段的以SMN2为靶点的小分子化学药物和反义寡核苷酸药物的研究进展。     

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展，抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究，利用基因重组、转基因及反义核酸等技术，在细胞水平或通过动物实验阶段的研究，基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本对转基因干扰素、DNA疫苗(DNA免疫)、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸(反基因寡核苷酸)、核酶有关抗乙型肝炎病毒基因治疗的研究进行综述。     

网络资源在医学分子生物学教学中的辅助作用

医学分子生物学是从分子水平研究人体在正常和疾病状态下生命活动及其规律的一门科学。作为一门课程，医学分子生物学涵盖了医学各专业学生必须学习的分子生物学基础知识，以及分子生物学在医学领域中形成的专门研究领域及相关知识。这些基础知识将为医学各学科专业知识的学习、为将来了解各学科领域的研究进展奠定坚实的基础。由于该课程理论抽象、分子代谢过程复杂、信号通路繁多，并且与众多学科有紧密联系和交叉，一直以来都是医学生学习的难点课程之一。     

人α1—干扰素基因真核表达载体的构建及其活性

选用与ＨｕＩＦＮ－α１基因及其信号肽相应的引物，采用ＰＣＲ技术，从中国人血白细胞染色体中分离带有信号肽ＩＦＮ－α１基因片段，分别克隆到质粒Ｍ１３ｍｐ１９和Ｍ１３ｍｐ１８中通过序列分析进行鉴定。然后克隆家蚕多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）载体ＰＢＦ５的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ之间，用合成的相应寡核苷酸片段为引物进行双链测序，鉴定为阳性重组转移     

医院检验工作中面临的矛盾及处理的对策

随着医学技术的不断发展,检验科的专业范围不断扩展,内部分工越来越细,且各成体系,给管理带来了许多矛盾。现结合检验工作中的一些实际情况,就检验科中所存在的矛盾加以分析,并提出了相应的解决措施。1必须正确认识医学检验的地位和作用现代医学技术的发展推动医学检验不断更新,医学检验所处的地位和作用越来越被临床所重视。它可对疾病的诊断及疗效的监测,预后判断等提供可靠的依据,在临床医学中起着不可替代的作用。     

用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体及其功能的研究

目的 用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL—39基因突变体，并比较研究FALL—39及其突变肽的功能。方法 采用PCR体外定点突变技术(PCR—SDM)，设计一对方向相反的引物，其中一个引物引入一个突变点，应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行含FALL—39肽的PGEXAlT质粒的PCR扩增，使FALL—39第24位密码于由CAG变为AAG，将扩增片段自身连接后克隆人工程菌JMl09中表达其突变肽(FALL—39—lys24)，纯化后与FALL—39进行抗菌活性比较。结果 DNA测序结果表明在预期位点发生突变，突变后FALL—39——lys24抗菌活性增强，在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加，较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加。结论 用高保真的Polybest DNA多聚酶进行PCR定点突变技术简单、有效，获得一个FALL—39—lys24突变子；其表达分子的抗菌活性明显增强，对红细胞的溶解作用在抗菌剂量时未见明显增加，较大剂量时略有增加，这些结果提示在FALL—39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性，但必须注意避免溶血的副作用。     

人类EGFR基因突变体质控品的建立

目的:构建了29种人类EGFR基因突变体质控品,为人类EGFR基因突变检测试剂盒的性能评价提供了可靠的质控物质。方法:根据人类EGFR全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物,通过PCR介导的定点突变技术引入突变位点、PCR产物与克隆载体连接,转化感受态细菌,筛选阳性克隆等,建立了包含不同人类EGFR基因突变体的质控品。结果:对29种人类EGFR基因突变体质控品进行序列测定,并将测序结果进行BLAST比对,结果表明成功建立了人类EGFR基因突变体质控品。结论:本研究建立的EGFR基因突变体质控品涵盖了EGFR基因的29种突变位点,覆盖了目前最常见的EGFR基因突变类型,能够用于评价国内大多数EGFR基因突变检测试剂盒。     

分子流行病学在中医药研究中的应用前瞻

流行病学作为医学研究中的一门方法学已经得到了广泛的承认和应用。分子流行病学区别于既往流行病学的关键就在于“分子生物学”的运用。它利用分子生物学原理和技术 ,从分子乃至基因水平上研究医学事件在人群和环境中的分布及其决定因素和调控手段 ,研究层次进入了人类未及涉猎的全新领域 ,研究深度达到了最先进的分子基因水平。分子流行病学研究内容主要包括 :疾病病因的研究、发病机制的研究、疾病易感性的研究、疾病流行规律及防治措施的研究等四个方面[1] 。Foxman和Riley以肺结核和泌尿道感染为例 ,评价了分子生物学技术扩大应用范围…     

血液流变学检测及临床应用价值

血液流变学是研究血液及其有形成分的流动性、变形性和聚集性的变化规律及其在医学中应用的科学[1],目前已广泛用于基础医学、临床医学及预防医学中,对疾病的诊断、病因及发病机制<英文作者单位>=的探讨、医学方案的制订以及在亚健康状态的识别和治疗药物研究等方面有重要作用.现对血液流变学检测及临床应用价值进行综述.     

检验医学在社区卫生服务中的应用

目的：探讨检验医学技术在社区卫生服务中应用的可行性。方法：采用问卷调查方式对18家社区卫生服务中心的200名医护人员和950名社区患者和居民进行调查。结果：96．2％的医护人员认为在社区开展常规检验项目有利于疾病的早期诊断及提高医生的治疗水平;96．7％的社区患者和居民认为在社区开展常规检验能方便群众就医。结论：检验医学技术在社区卫生服务中的应用是受到社区医护人员、患者和居民的普遍认可的,检验医学技术用于社区卫生服务是可行的。     

免疫学快速检验技术的应用与进展

免疫学检验是指将免疫学方法应用于医学领域，通过抗原和抗体的反应原理，利用各种标记和示踪技术来检测和分析人体的免疫功能和疾病的一门学科。传统血清试验技术操作步骤繁琐，耗时较长，易受干扰而出现误判。人们不断改进血清试验，并将分子生物学等各种科学理论和技术应用到免疫学检验中来，使免疫学快速检验技术得到了极大的发展。     

河北省疾病预防控制中心——医学病毒学

河北省疾病预防控制中心医学病毒学科于2001年被确定为省级医学重点学科,2009年被确定为省级继续医学教学基地。目前学科有专业技术人员21名,其中,主任医（技）师13名,博士1名,硕士14名,涉及流行病学、医学病毒学、医学检验、免疫学、分子生物学等专业。拥有河北医科大学和河北联合大学硕士研究生导师5名。     

临床分子生物学检验技术实验课程教学改革探讨

本文主要分析目前临床分子生物学检验技术实验课程教学的特点及存在的问题,并通过探讨完善实验室条件、增加实验课学时及丰富实验内容、增强师资队伍建设、引入文献阅读,培养科研思维、提高学生学习兴趣,增加重视度和改进实验考核方法等实验教学改革措施,旨在从根本上提高实验课程的教学效果,使学生不仅能学得会,更能学得懂,为其以后临床检验工作或继续学习深造奠定基础,进而为社会培养医学检验高素质实用型人才。