激素耐药型与激素敏感型肾病综合征儿童尿液双向电泳图谱分析

目的建立激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)儿童与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)儿童尿液全蛋白双向凝胶电泳(2-DE)图谱,分析差异的蛋白质位点,为研究原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素耐药的机制提供依据。方法病例来源于湘雅二医院儿科住院部,收集时间为2005-01-2005-10,入选的INS患儿依据中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的诊断标准,分为3组,每组5例。利用2-DE技术分离SRNS与SSNS(治疗前、后)儿童尿液总蛋白质,Image Master 2D V3.01分析软件进行凝胶图像分析。结果获得了图像清晰、分辨率高的SRNS组、SSNS(治疗前)与SSNS(治疗后)组儿童尿液2-DE图谱,3组点数分别为(206±8)个、(204±5)个、(55±5)个;SRNS组与SSNS组(治疗前)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点66个;SRNS组与SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点33个。结论该研究成功建立了分辨率高且重复性较好的SRNS与SSNS儿童尿液全蛋白的2-DE图谱;通过组间尿液2-DE图谱分析,发现了一些可能与INS激素耐药或敏感有关的蛋白质位点,为进一步运用蛋白质组学技术寻找与INS激素耐药抑或激素敏感相关的蛋白质打下了基础。     

儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

目的：筛选和鉴定激素耐药型（SRNS）与激素敏感型原发性肾病综合征（SSNS）尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与肾病综合征激素耐药和激素敏感相关的蛋白质。方法：SSNS治疗前后病例、SRNS、正常对照各5例,提取尿液全蛋白,采用双向凝胶电泳建立全蛋白凝胶图谱;银染后用Image Master 2D V3.01软件分析差异表达蛋白质点,利用MALDI-TOF-MS分析获得肽质量指纹图谱,通过Mascot软件进入NCBI数据库,鉴定出差异表达蛋白质。结果：SRNS组与SSNS治疗前组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点66个,其中仅出现于SRNS组24个、SSNS治疗前组27个;SSNS治疗后组与正常对照组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点75个,其中仅出现于SSNS治疗后组11个。对18个差异蛋白质点进行分析,鉴定出α1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、带异类电荷糖蛋白复合体等9类差异表达的蛋白质。结论：成功鉴定了SRNS和SSNS的尿液中存在9类差异表达的蛋白质,部分蛋白可能是SRNS或SSNS的标志物。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：341-345］     

儿童传染性单核细胞增多症血浆蛋白质组学分析

目的 通过对比分析传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis, IM)患儿与同龄健康儿童(对照组)的血浆蛋白质组图谱的差异表达,初步探索IM 特异表达或异常表达的血浆“分子标志物”以协助临床诊断。方法 采用双向电泳技术(2-DE)结合质谱技术对IM 患儿与对照组的血浆全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果 比较蛋白质组学分析发现IM 患儿组与对照组比较具有明显差异表达蛋白质共有7 个:血色素结合蛋白(Hpx)、VitD3 结合蛋白(DBP)、胎球蛋白A(fetuin A)、C- 反应蛋白(CRP)、载脂蛋白A(Apo A)、结合珠蛋白(HPT)、甲状腺运载蛋白(TTR),其中, HPT 表达量较对照组明显升高,其余蛋白的表达量均较对照组明显降低。结论 IM 患儿与对照组比较存在明显差异表达的蛋白质,这些差异蛋白表达量的改变均与肝脏的急性损伤有关,提示儿童IM 常伴有肝脏的急性损伤。若对这些差异表达的蛋白进一步分析,可望能够找到为IM 临床诊断和治疗提供一定参考价值的血浆特异性标志物。     

脑红蛋白在小儿脑挫裂伤病理过程中变化的初步研究

目的：初步探讨脑红蛋白（neuroglobin, Ngb）在小儿脑挫裂伤病理生理过程中的作用。方法：采用二维凝胶电泳技术分离3例行脑室肿瘤切除患儿的正常额叶皮层组织和8例脑挫裂伤患儿额叶皮层组织总蛋白质,PDquest图像分析软件识别差异蛋白质点,电喷雾串联质谱鉴定差异蛋白;免疫组化检测差异蛋白Ngb在正常脑组织和脑挫裂伤患儿的脑组织中的表达。并采用酶联免疫法检测10例正常儿童和15例脑挫裂伤患儿血清中Ngb的表达变化。结果：建立了正常儿童和脑挫裂伤患儿脑组织的二维凝胶电泳图谱,识别了6个差异蛋白质点,并鉴定了5种差异蛋白。免疫组化结果显示,Ngb在脑挫裂伤患儿额叶皮层组织中的表达水平高于正常对照组额叶皮层组织（P<0.05）。酶联免疫法检测结果表明,脑挫裂伤后6 h、12 h、18 h、24 h及48 h 血清Ngb表达高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：Ngb可能在小儿脑挫裂伤病理生理过程中发挥了重要作用。     

细菌性脑膜炎患儿脑脊液中兴奋性氨基酸的变化及意义

目的观察细菌性脑膜炎患儿脑脊液(CSF)中兴奋性氨基酸、谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)含量的变化,探讨其在细菌性脑膜炎病理生理过程中的作用和临床意义。方法将符合诊断依据的细菌性脑膜炎患儿分为重度组和轻度组。所有患儿于入院当天应用抗生素治疗前做腰穿留取CSF进行常规、生化及细菌学检查。结果(1)细菌性脑膜炎患儿CSF中Glu、Asp含量高于对照组患儿。(2)重度组CSF中Glu、Asp含量高于轻度组。(3)抗生素治疗21d后,兴奋性氨基酸浓度有24例降低,有8例维持较高水平,临床症状较差。(4)细菌性脑膜炎患儿CSF中Glu、Asp含量与CSF中蛋白质浓度呈正相关,与葡萄糖浓度呈负相关。结论细菌性脑膜炎患儿脑脊液中Glu、Asp含量较对照组明显升高,测定CSF中兴奋性氨基酸浓度对细菌性脑膜炎病情严重程度及预后的判断具有指导意义。     

小儿神经母细胞瘤蛋白质组的初步探索

目的 应用蛋白质组学方法筛选与小儿神经母细胞瘤(NB)相关的差异表达蛋白质.方法 收集2011年7～ 12月解放军总医院小儿外科经穿刺活检病理证实为Ⅳ期NB的标本3例及其化疗后术后切除肿瘤标本3例,患儿平均年龄3.17岁.对化疗前后NB组织全蛋白进行二维凝胶电泳,应用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱进行蛋白质斑点鉴定和生物信息学分析.结果 成功建立了组织化疗前后双向电泳图谱,应用图像分析软件发现化疗后有7个差异表达明显的蛋白质斑点,其中有2个蛋白质表达上调,分别为Nm23蛋白和神经多肽h3;5个蛋白质表达下调,分别为癌蛋白18、热休克蛋白27、线粒体烯酰脂辅酶A、过氧化物酶1和过氧化物酶3.结论 应用二维凝胶电泳和超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱能鉴定小儿NB化疗前后的差异表达蛋白.     

儿童原发性肾病综合征尿蛋白质组样品预处理方法的研究

目的：优化儿童原发性肾病综合征尿蛋白质组样品的预处理方法。方法：取原发性肾病综合征儿童尿液，采用称量、SDS-PAGE及双向电泳（2-DE）等方法比较不同pH、冷丙酮沉淀不同时间等条件下所得到的蛋白质，优化蛋白提取的条件。结果：pH 2.7条件下所得到的蛋白种类最多；冷丙酮沉淀0.5 h获得的蛋白量明显少于1 h及2 h的蛋白量（P<0.05），而冷丙酮沉淀 1 h 和2 h获得的蛋白量没有显著性差异。pH 2.7条件下冷丙酮沉淀1 h为样品预处理的最佳条件，可获得满意的2-DE分离效果。结论：pH 2.7条件下，冷丙酮沉淀1 h为尿蛋白质组样品预处理的最佳条件。     

急性淋巴细胞白血病患儿血清蛋白质指纹图谱模型建立及应用评价

目的 应用SELDI-TOF-MS技术构建ALL患儿、对照组AML患儿及正常儿童血清蛋白质指纹图谱,寻找血清差异表达蛋白并建立初步模型,分析其在ALL诊断中作用.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测98例血清标本(ALL 46例,AML 32例,正常儿童20例)的蛋白质质谱,并...     

血前降钙素在儿童细菌性脑膜炎诊断中的应用价值探讨

目的　证实血前降钙素在小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑炎鉴别诊断中的作用。方法　应用双位点夹心化学免疫荧光法对 6 7例中枢神经系统感染患儿的血浆前降钙素水平进行测定 ,并比较血清C反应蛋白 ,脑脊液白细胞数、蛋白含量对感染病因辅助诊断的价值。结果　 4 5例急性细菌性脑膜炎患儿血浆前降钙素水平明显升高 (4 6 4～ 74 5 0 μg/L) ,2 2例病毒性脑炎的血前降钙素水平仅有轻度升高 (0 10～ 1 2 2 μg/L) ,P <0 0 0 0 1。而血清C反应蛋白 ,脑脊液白细胞数及蛋白含量在急性细菌性脑膜炎及病毒性脑炎中有重叠。结论　血前降钙素是鉴别儿童急性细菌性脑膜炎及病毒性脑炎的有效指标     

新生儿化脓性脑膜炎的临床特点与早期诊断

目的探讨新生儿化脓性脑膜炎的临床特点与早期诊断方法。方法选择2010年3月-2011年12月就诊于本院新生儿科疑似化脓性脑膜炎患儿100例,均于本院应用抗生素前行腰椎穿刺术,留取脑脊液(CSF)标本行常规、生化检测及培养,同时留取CSF 1 mL行PCR检测16 S rRNA。结果临床诊断为化脓性脑膜炎者40例,其中发热36例(90%),惊厥29例(72.5%),呼吸暂停5例(12.5%),前囟饱满23例(57.5%)。临床诊断为化脓性脑膜炎40例患儿,其CSF PCR检测均为阳性。CSF培养阳性5例,该5例CSF参数异常,PCR检测均呈阳性。PCR检测16 S rRNA阳性58例,PCR阳性率明显高于CSF培养、CSF参数(χ2=65.09,P=0.00;χ2=6.48,P=0.01)。结论新生儿化脓性脑膜炎临床特点不典型,CSF检查存在一定局限性,CSF培养阳性率低,结合PCR检测能提高阳性率。     

Cerebrospinal Fluid C-Reactive Protein in the Laboratory Diagnosis of Bacterial Meningitis

ABSTRACT. Samples of cerebrospinal fluid from 112 cases of suspected meningitis were tested for the presence of C-reactive protein (CRP), using a qualitative and quantitative slide test. Bacterial meningitis was confirmed in 34 patients, based on CSF and blood culture results, and/or elevated CSF white blood cell (WBC) count and typical biochemical profile. There were 8 patients with early onset, and 3 who had received prior antimicrobial therapy among the 5 neonates, 23 children, and 6 adults with bacterial meningitis. Organisms recovered from CSF, and/or blood, included Haemohilus influenzae 14, Streptococcus pneumoniae 9, Streptococcus group B 5, Staphylococcus aureus 2, E. coli 2 and Klebsiella penumoniae 1. Slide test was positive for CRP in 33 cases, giving a sensitivity of 97 % which compared favourably with elevated CSF protein 33 %, decreased CFS glucose 64.7 % CSF glucose/blood glucose 相似文献   

不同中枢神经系统感染患儿脑脊液肝细胞生长因子水平变化的意义

目的通过观察病毒性脑炎、细菌性脑膜炎及结核性脑膜炎患儿脑脊液肝细胞生长因子(HGF)水平变化,探讨其是否可以作为一个鉴别诊断的生化指标,为临床疾病的诊断提供依据。方法选择临床确诊病毒性脑炎30例、细菌性脑膜炎21例、结核性脑膜炎19例及对照组24例,采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测各组患儿脑脊液HGF水平。同时将HGF水平分别与脑脊液中白细胞计数和蛋白定量进行直线相关分析,观察脑脊液中HGF水平与脑脊液中白细胞计数和蛋白定量的关系。结果细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组脑脊液HGF水平高于病毒性脑炎组和对照组,结核性脑膜炎组高于细菌性脑膜炎组患儿,细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组及病毒性脑炎组与对照组患儿比较均有显著性差异(Pa<0.05),病毒性脑炎组与对照组患儿比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HGF有可能成为鉴别细菌性脑膜炎、结核性脑膜炎及病毒性脑炎的指标之一。     

神经元特异性烯醇化酶对脑膜炎患儿的诊断价值

目的探讨脑脊液神经元特异性烯醇化酶(CSF-NSE)对脑膜炎患儿的诊断价值。方法采用ELISA对18例化脓性脑膜炎(化脑)、13例结核性脑膜炎(结脑)及25例病毒性脑膜炎(病脑)及18例正常儿童CSF-NSE进行测定。结果与对照组比较,化脑及结脑患儿CSF-NSE水平均显著升高(P均<0.05);病脑患儿无显著性差异(P>0.05);化脑及结脑患儿CSF-NSE水平较病脑患儿显著升高(P<0.05);化脑、结脑、病脑患儿CSF-NSE与其CSF白细胞数及蛋白水平均无相关性(P>0.05)。结论CSF-NSE测定可作为鉴别化脑和病脑的重要参考指标之一,也可作为评价脑膜炎患儿病情严重程度及预后的生化指标。     

细菌性脑膜炎并脑积水的临床特点及危险因素

目的探讨细菌性脑膜炎并脑积水的临床特点,并分析其相关的危险因素,以降低其发生率,改善细菌性脑膜炎的预后。方法对2004年1月-2010年6月本院收治的111例细菌性脑膜炎患儿的临床资料进行回顾性分析。根据影像学结果,将患儿分为细菌性脑膜炎并脑积水组(n=16)及细菌性脑膜炎无脑积水组(n=95),应用SPSS 17.0软件对2组患儿的基本情况、临床表现、实验室结果及抗生素治疗情况等进行比较,对相关因素进行Logistic回归分析,筛选出脑积水发生的高危因素。结果细菌性脑膜炎并脑积水的发生率为14.4%(16/111例),以梗阻性脑积水为主(14/16例,87.5%),75%(12/16例)患儿脑积水出现在起病4周内,确诊时CT/MRI的检查次数为1～3次,2例患儿在起病后2个月行脑室-腹腔分流术,2例脑积水患儿死亡。2组临床资料比较显示年龄、发热>10 d、惊厥、意识障碍、经验性治疗失败、颅内低密度灶、低Hb水平、高脑脊液蛋白水平、低脑脊液葡萄糖水平均与脑积水发生有关(Pa<0.05),Logistic回归分析显示意识障碍、经验性治疗失败、低Hb水平是细菌性脑膜炎并脑积水的独立危险因素。结论脑积水是细菌性脑膜炎的一个严重并发症之一,临床表现及实验室检查结果可作为细菌性脑膜炎并脑积水的预测指标。     

化脓性脑膜炎患儿血清及脑脊液中C反应蛋白变化及临床意义

目的　探讨化脓性脑膜炎患儿血清和脑脊液(CSF)中C反应蛋白(CRP)变化及其与病原菌的关系。方法　将2 0 0 1年3月至2 0 0 4年3月在广西右江民族医学院附属医院住院的6 2例化脓性脑膜炎患儿分为革兰阳性(G+ )组与革兰阴性(G-)组,选取同期非感染患儿2 6例作为对照组,采用快速免疫透射比浊法分别检测血清和CSF中CRP质量浓度;同时分别计算G+ 组与G-组CSF中CRP与血清CRP的比值。结果　G+ 组、G-组血清CRP质量浓度明显高于对照组(均P <0 .0 1) ,G+ 组与G-组血清CRP质量浓度差异无显著性(P >0. 0 5 ) ,G-组CSF中CRP质量浓度明显高于G+ 组和对照组(均P <0 . 0 1) ,G+ 组与对照组CSF中CRP质量浓度差异无显著性(P>0 . 0 5 ) ;CSF中CRP与血清CRP比值G-组高于G+ 组(P <0 .0 1)。结论　G+ 脑膜炎CSF中CRP变化不明显,而G-脑膜炎CSF中CRP明显升高,CSF与血清CRP比值升高,其变化对化脓性脑膜炎病原菌的鉴别有一定的临床意义。     

可溶性DLL1在儿童颅内感染性疾病诊断中的意义

目的：探讨脑脊液（CSF）及血清中可溶性DLL1的水平在儿童颅内感染诊断中的意义。方法：选择颅内感染患儿50例（结脑20例,病脑20例,化脑10例）以及非颅内感染患儿（对照组）20例,采用酶联免疫吸附试验定量测定患儿CSF及血清中可溶性DLL1的水平。结果：结脑组患儿CSF中可溶性DLL1的水平明显高于病脑组、化脑组及对照组（2.89±1.72 ng/mL vs 0.14±0.14 ng/mL, 0.27±0.21 ng/mL, 0.13±0.12 ng/mL; P＜0.01）;结脑组患儿血清中可溶性DLL1的水平也明显高于病脑组、化脑组及对照组（12.61±6.45 ng/mL vs 2.28±2.27 ng/mL, 2.38±1.79 ng/mL, 2.26±2.10 ng/mL; P＜0.01）;病脑组、化脑组与对照组相比,CSF及血清中可溶性DLL1的水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：可溶性DLL1的检测作为一种新的指标,在结脑诊断中可能有潜在重要价值。     

Enhanced expression of cytokines/chemokines in cerebrospinal fluids in mumps meningitis in children

Background: The mumps virus is frequently the causative agent in aseptic meningitis and mumps has still prevailed in Japan. We compared data obtained from patients with mumps meningitis and patients with aseptic meningitis caused by other viruses in order to identify mumps meningitis‐specific cytokine/chemokine alterations in cerebrospinal fluide (CSF). Methods: We elucidated the cytokine/chemokine network based on the cytokine/chemokine profiles in CSF from children with mumps meningitis and meningitis due to other viral infections using multiplex cytokine measurement. Seventeen cytokines/chemokines, namely interleukin (IL)‐1β, IL‐2, IL‐4, IL‐5, IL‐6, IL‐7, IL‐8, IL‐10, IL‐12 (p70), IL‐13, IL‐17, interferon (IFN)‐γ, tumor necrosis factor (TNF)‐α, granulocyte colony‐stimulating factor (G‐CSF), granulocyte monocyte colony‐stimulating factor (GM‐CSF), monocyte chemoattractant protein‐1 (MCP‐1) and macrophage inflammatory protein‐1β (MIP‐1β), were measured simultaneously in CSF supernatants from eight children with mumps meningitis, 11 children with other types of viral meningitis and eight children with fever without neurological complications such as convulsion. Results: We found that IL‐8, IL‐10, IL‐12, IL‐13 and IFN‐γ showed a statistically significant increase in CSF from mumps meningitis when compared to other types of viral meningitis and fever without neurological complications. Conclusion: Mumps meningitis may induce a distinct immunological response when compared with other types of viral meningitis.     

The Diagnostic and Predictive Value of Cerebrospinal Fluid Lactate in Children with Meningitis

ABSTRACT. One hundred and thirty-three children with suspected meningitis aged from 11 days to 16 years were investigated with routine cerebrospinal fluid (CSF) laboratory methods: microscopy of a Gram-stained smear, bacterial culture, determination of leukocytes, lactate, and the CSF/blood glucose ratio. On the basis of bacterial cultures and clinical course, the children were classified into three groups: bacterial meningitis (n=18), aseptic meningitis (n=28), and a control group (n=87). The main intention was to study the relation between current diagnostic methods and lactate. CSF lactate levels and cell counts, related significantly (p<0.01) better to the presence of bacterial meningitis than CSF/blood glucose ratios. Lactate levels exceed 2.4 mmol/l in all children with bacterial meningitis, but in none of the control group. Of 28 children with aseptic meningitis 3 had lactate in the range 2.5-2.7 mmol/l, while the others had values of 2.4 mmol/l or less. We consider CSF lactate to be the best predictor in the clinical decision to institute antibiotic treatment of children with suspected bacterial meningitis.     

基质金属蛋白酶检测对鉴别化脓性脑膜炎与病毒性脑炎的价值

目的通过对血清和脑脊液(CSF)基质金属蛋白酶(MMPs)水平检测,探讨其对小儿化脓性脑膜炎(化脑)与病毒性脑炎(病脑)的鉴别诊断价值。方法采用ELISA法检测18例化脑及22例病脑患儿急性期血清和CSF中MMP-2、MMP-9水平,并与正常对照组比较。结果化脑、病脑患儿血清和CSF中MMP-2、MMP-9水平显著高于正常对照组(P<0.001),且化脑组显著高于病脑组(P<0.001)。结论血清和CSF中MMP-2、MMP-9检测,对小儿化脑与病脑有早期诊断和鉴别诊断价值,为临床尽早用药提供实验室依据。