黄褐斑患者组织病理特征分析

目的 探讨黄褐斑组与正常对照组组织病理学及超微结构差异。方法 分别取8例黄褐斑患者的皮损组织,16例面部色素痣皮损周围正常组织,分别取2 mm活检,进行HE染色、Fontana?Masson染色、Verhoeff?van Gieson染色,HMB45、NKI/beteb免疫组化及透射电镜观察。光镜下半定量及计算机图像定量分析。结果 黄褐斑组组织病理表现为以基底层、棘层为主的黑素颗粒增多,部分伴真皮黑素颗粒增加。黄褐斑组黑素细胞仅存在于表皮层,较正常皮肤黑素细胞数量无增加,但表皮层黑素细胞体积增大,染色强度增加,树突增多。8例黄褐斑患者均在真皮浅层及毛细血管周围观察到轻到中度的淋巴细胞浸润,8例黄褐斑患者均在真皮浅层观察到轻到中度的毛细血管扩张。电镜：黄褐斑组黑素细胞,角质形成细胞内都含有更多黑素小体,此外,还观察到黑素细胞树突伸入到真皮层。结论 8例黄褐斑患者中,仅有表皮型和混合型（表皮真皮型）2型,无单纯真皮型黄褐斑。炎症反应、毛细血管扩张可能引发或加重黄褐斑。     

3种冻存液配方对原代培养人黑素细胞冻存复苏后细胞存活率的影响

目的：寻找一种适合黑素细胞的冻存方法,并探讨冻存对其细胞活性的影响。方法：采用3种不同冻存配方冻存黑素细胞,复苏后通过台盼蓝染色检测其细胞存活率、CCK-8检测其细胞活力,并比较不同实验组黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量。结果：实验组B[8%二甲基亚砜（DMSO）+92%胎牛血清（FBS）]冻存复苏的黑素细胞存活率[（58.36±6.60）%]及细胞活力[（97.69±2.49）%]均高于其他2组,且复苏后的黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素含量与正常传代的黑素细胞比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：使用8%DMSO+92%FBS冻存复苏黑素细胞后其细胞活性和功能均较好,适宜进行白癜风相关的研究。     

CRISPR-Cas9诱导KRT5基因突变的HaCaT细胞对共培养人黑素细胞的影响研究

【摘要】 目的 探究敲减角质形成细胞KRT5基因对共培养黑素细胞黑素含量的影响,以解释屈侧网状色素沉着症（DDD）的色素增加性皮损形成的机制。方法 通过成簇的规律间隔的短回文重复序列-相关蛋白9（CRISPR-Cas9）技术获得KRT5基因杂合突变的HaCaT细胞,将转染非靶向单向导RNA：Cas9蛋白复合物的HaCaT细胞设为对照组,分别与人原代黑素细胞HEMn体外共培养。免疫荧光观察共培养细胞中细胞角蛋白及黑素小体表达;差异胰酶消化获得不同共培养组中黑素细胞,检测细胞内黑素含量。免疫组化检测1例KRT5突变DDD患者皮损和正常对照皮肤中黑素细胞特异性前黑素小体蛋白17（Pmel17）的表达改变。结果 Sanger测序显示,实验组HaCaT细胞KRT5基因第1外显子起始密码子发生杂合突变（c.1delA）,对照组HaCaT细胞KRT5基因未发生突变。Western印迹显示,实验组HaCaT细胞KRT5蛋白表达水平（0.60 ± 0.05）显著低于对照组（1.00 ± 0.00,t = 32.38,P = 0.001）。HEMn细胞与实验组HaCaT细胞共培养体系中Pmel17标记的黑素小体较与对照组共培养体系增多,且细胞内黑素含量增加52.5%,差异具有统计学意义（t = -3.48,P = 0.025）。KRT5突变DDD患者皮损组织中Pmel17表达量较正常对照皮肤增加。结论 本研究通过CRISPR-Cas9诱导KRT5基因突变的HaCaT细胞,与黑素细胞在体外建立共培养细胞模型,验证了其对共培养黑素细胞的影响,为进一步研究角质形成细胞与黑素细胞相互作用机制以及皮肤色素异常的发病机制提供了初级研究模型。     

反射式共聚焦显微镜联合皮肤镜在黄褐斑皮损黑素与血管评估中的应用

目的 用反射式共聚焦显微镜（RCM）及皮肤镜观察黄褐斑皮损中黑素及血管数量和形态,探讨黑素和血管与皮损颜色的关系。方法 用RCM观察135例黄褐斑患者皮损中黑素数量及分布,其中54例患者RCM观察皮损中黑素形态和树突状黑素细胞,皮肤镜观察皮损中血管数量和形态。Spearman相关分析法分析黑素和血管与临床皮损颜色的关系。结果 135例患者表皮层和真表皮交界处黑素均增加,36例（27%）真皮浅层黑素增加,未发现单纯真皮黑素增加而无表皮增加的情况。54例患者中,黑素数量评分与形态评分呈正相关（r = 0.73,P＜0.001）,血管数量评分与形态评分呈正相关（r = 0.87,P＜0.001）;黑素与血管评分总分呈正相关（r = 0.554,P＜0.001）。黑素数量、黑素形态、血管数量、血管形态均与皮损颜色呈正相关（r值分别为0.51、0.39、0.46、0.44,均P＜0.05）。结论 反射式共聚焦显微镜和皮肤镜可用于黄褐斑皮损中黑素和血管情况评估,黄褐斑皮损中黑素数量及形态与血管数量及形态均呈正相关,黑素及血管数量和形态与临床皮损颜色亦均呈正相关。     

一种含氨甲环酸、烟酰胺和曲酸的外用配方治疗黄褐斑的疗效

黄褐斑是一种常见的后天获得性色素性疾病,尽管治疗方法多种多样,但仍有大量病例复发或难治。几种局部疗法已被证实可以影响黄褐斑和黑素细胞的活性：氨甲环酸溶液结合1 927 nm铥点阵激光、外用含脂质体氨甲环酸的制剂可不同程度改善色素沉着;烟酰胺可抑制黑素小体从黑素细胞向角质形成细胞转移;曲酸（5-羟基-2-羟甲基-4-吡喃...     

无色素痣的临床、组织学和超微结构观察

目的 探讨无色素痣的临床和组织学特征。方法 分析85例无色素痣患者的发病年龄、类型和皮损特点,并对部分患者行皮肤色素测定和反射式共聚焦显微镜（RCM）观察。对其中17例患者的皮损区和正常区皮肤组织进行组织病理检查,透射电镜观察皮损区超微结构。免疫组化法检测皮损区和正常皮肤处酪氨酸酶（TYR）、HMB45、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP-1）、TRP-2和CD117表达。结果 85例无色素痣患者中,23例（27.1%）出生时发现皮损,21例（24.7%）出现于3岁以后,最大发病年龄为29岁。皮损分布于躯干部25例（29.4%）,颈部13例（15.3%）;72例（84.7%）皮损边缘不规则,54例（63.5 %）仅有1处皮损。19例无色素痣患者患处的黑素指数（186.56 ± 52.86）和相对黑素指数（80 ± 11）低于正常人皮肤（分别为223.88 ± 63.19和100）,高于12例白癜风患者皮损处（分别为128.57 ± 64.31和60 ± 20）,差异均具有统计学意义（P < 0.01）。反射式共聚焦显微镜示,无色素痣皮损中含黑素细胞数量减少,亮度减低,黑素分布均匀,皮损区与正常皮肤分界区常不清晰。皮损区Fontana-Masson染色示皮损区黑素强度为1810.12 ± 327.96,较正常区（2064.24 ± 260.41）明显减弱。电镜下发现黑素细胞数量减少,黑素小体减少,黑素细胞胞质和树突以及角质形成细胞中可见Ⅱ、Ⅲ期未成熟的黑素小体,角质形成细胞中可见聚集成团的黑素小体。17例患者正常区TYR表达水平为1827.35 ± 307.09,TRP-1为6102.54 ± 1642.64,而皮损区TYR（1477.35 ± 224.05）和TRP-1（5322.33 ± 1565.26）表达下降,正常区与皮损区比较,P均 < 0.01;HMB45、TRP-2、CD117表达两处比较差异均无统计学意义。 结论 无色素痣是一种早期发病、非家族聚集性、稳定的不规则色素减退性疾病,其皮损中黑素细胞和黑素小体数量均减少,可见未成熟黑素小体。相对黑素指数和反射式共聚焦显微镜检查可作为诊断无色素痣的无创性检测方法。     

进行性斑状色素减少症的临床及实验研究

目的 探讨进行性斑状色素减少症（PMH）的临床特点和诊断要点。方法 用Wood灯及活体共聚焦激光扫描显微镜（皮肤CT）观察皮损特点、致病菌培养、黑素细胞培养,并应用S-100和TRP-1免疫组化分析皮损区黑素细胞数量、电镜观察其超微结构特征。结果 Wood灯检查示皮损区可见点状红色荧光,皮肤CT观察示皮损区色素环完整,但与周围正常皮肤相比其内所含的黑素颗粒含量减少。致病菌培养可见产红色荧光的革兰阳性棒状杆菌,经鉴定为痤疮丙酸杆菌。S-100染色示皮损区阳性细胞数（8.25 ± 0.96）与周围正常皮肤（8.75 ± 1.71）相比无统计学意义（P > 0.05）。TRP-1染色示皮损区阳性细胞数（4.25 ± 0.96）与周围正常皮肤（4.50 ± 1.29）相比也无统计学意义（P > 0.05）。电镜观察发现,皮损区Ⅳ期黑素小体的数量明显下降,并观察到较多的膜结合体,内含成簇状分布的多个体积较小的Ⅱ ～ Ⅳ期黑素小体。成功培养出黑素细胞,其形态与正常细胞相比未见明显异常。结论 初步提出进行性斑状色素减少症的诊断要点。     

窄谱中波紫外线辐射对白癜风黑素细胞生物学特性的影响

目的：探讨窄谱中波紫外线（NB—UVS）辐射对白癜风不同部位培养的黑素细胞生物学特性的影响，以指导设定NB—UVB最佳治疗间隔时间。方法：体外培养白癜风患者外观正常皮肤、皮损边缘处黑素细胞，倒置显微镜观察NB一[NB辐射对细胞形态的影响，MTT法和NaOH法检测NB—UVB辐射剂量（0-100mJ/cm^2，cm^2）和作用时间（辐射后48h、72h、96h）对细胞增殖和黑素合成的作用。结果：①NBUVB（50-mJ/cm^2）辐射黑素细胞后，细胞肿胀，树突缩短增粗，黏附性下降；②NB—UVB辐射后48h，在实验剂量下可提高细胞的黑素合成能力，辐射剂量≥60mJ／cm^2可抑制白癜风外观正常皮肤黑素细胞增殖，而≥40mJ／cm^2即可对皮损边缘处黑素细胞产生抑制作用；NB—UVB辐射后72h、96h，可促进黑素细胞增殖和黑素合成，对白癜风外观正常皮肤黑素细胞作用更明显，辐射后72h黑素细胞增殖率和黑素含量达到最高点。结论：NB—UVB辐射后72h对白癜风黑素细胞功能的影响最大，可用以指导临床设定NB-UVB照射最佳的治疗间隔时间。     

粒细胞集落刺激因子及其受体对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对人黑素细胞生物学作用的影响。方法 分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养健康人的黑素细胞,并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞仪检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞（HEL 92.1.7）中G-CSFR的表达率。Western印迹、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL 92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况;噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度rhG-CSF（200、400、600、800 μg/L）对黑素细胞增殖作用。多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。 结果 黑素细胞G-CSFR的表达率（76.81% ± 10.70%）较HEL92.1.7（2.53% ± 1.54%） 明显升高（P < 0.01）,略低于中性粒细胞（85.76% ± 15.71%,P < 0.05）;黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和mRNA,不同浓度rhG-CSF处理组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。黑素细胞G-CSFR蛋白和mRNA的表达水平明显高于HEL 92.1.7 （P < 0.01）,低于中性粒细胞（P < 0.05或P < 0.01）。rhG-CSF在200 ～ 800 μg/L时均有促黑素细胞增殖的能力,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05）;在200 ～ 600 μg/L范围内呈浓度依赖性（P < 0.01）,600 μg/L时的效应（164.04% ± 13.0%）与20 μg/L的TPA作用（165.62% ± 10.6%）相当（P > 0.05）;200 ～ 800 μg/L的rhG-CSF对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响与空白对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 人黑素细胞可表达G-CSFR;rhG-CSF具有促进黑素细胞增殖的作用,但对酪氨酸酶活性无影响。     

黄褐斑的治疗进展

黄褐斑是最常见的色素紊乱性皮肤病之一,在亚洲女性和深肤色人种中(FitzpatrickⅢ-Ⅵ型)更常见。组织表现为表皮基底层和棘层黑素增加,黑素细胞功能活跃,黑素小体转移至角质形成细胞的数量增多,但无黑素细胞增多。目前关于黄褐斑的治疗方案较多,综合治疗是趋势,以外用药物治疗为基础,联合内用抗氧化剂、氨甲环酸、中药等,中重度可选择化学剥脱或激光、强脉冲光等。但目前皮肤美容激光治疗黄褐斑的有效机制、适应证、风险以及防范对策等仍缺乏大样本临床研究,临床选择时需慎重。     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

宽谱中波紫外线对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路的作用研究

目的 探讨宽谱中波紫外线（BB-UVB）照射对黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响。 方法 分别用0、10、20、30、40、50、100、200、300 mJ/cm2 BB-UVB照射原代培养的黑素细胞,采用CCK8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。分别用0、30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,实时荧光定量PCR检测非经典Wnt通路相关基因mRNA的表达。100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,用Western 印迹检测作用前后非经典Wnt通路相关基因蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组相比,10 ~ 300 mJ/cm2 BB-UVB照射后,细胞增殖率均逐渐降低,BB-UVB剂量 > 100 mJ/cm2时细胞存活率 < 50%,同时,10 ~ 100 mJ/cm2 BB-UVB照射后酪氨酸酶活性逐渐增加,100 mJ/cm2 BB-UVB组黑素含量明显增加,差异有统计学意义（均P < 0.05）。30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1 mRNA的表达均较对照组逐渐减少,JNK、MITF、RAC1、TYR的表达均较对照组逐渐升高,而30、50 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量均较对照组降低,100 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量则明显升高（P < 0.05）。100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1蛋白的表达量较对照组降低,WNT5A、JNK、MITF、RAC1、TYR蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）。 结论 紫外线照射降低黑素细胞增殖率,提高黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量。WIF-1基因可能抑制黑素生成。WIF-1基因表达降低可能通过非经典通路Wnt蛋白的综合作用激活JNK/MITF/TYR通路,最终促进黑素合成。     

谷氨酸信号通路对黑素细胞黑素转运的作用

目的 探讨谷氨酸信号通路在黑素转运中的作用。 方法 原代培养并纯化黑素细胞及角质形成细胞,免疫荧光显微镜观察离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）和N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（NMDAR2A）在黑素细胞内的分布,共聚焦显微镜观察100 μmol/L NMDAR激动剂NMDA和100 μmol/L拮抗剂地卓西平马来酸盐（dizocilpine maleate,MK801）作用5 min和1 h后黑素细胞内钙离子浓度的变化以及100 μmol/L MK801对黑素细胞内微管蛋白的影响。结果 100 μmol/L NMDA可使黑素细胞内瞬时钙离子浓度升高,但100 μmol/L MK801可使其降低;MK801先作用于黑素细胞5 min或1 h阻断NMDA受体后,NMDA均不能再次诱导瞬时钙离子浓度升高。共聚焦显微镜观察发现MK801作用24 h后,胞内微管蛋白重新分布聚集于核周。扫描电镜观察发现100 μmol/L MK801作用于黑素细胞-角质形成细胞共培养体系48 h后,黑素细胞和角质形成细胞之间以及两种细胞表面的丝状伪足数量明显减少。共培养体系下,100 μmol/L MK801作用后,角质形成细胞中的黑素含量明显降低,即从黑素细胞向角质形成细胞转移的黑素数量明显减少。 结论 谷氨酸信号通路对黑素细胞胞内钙离子浓度、微管蛋白分布、黑素细胞伪足形成以及黑素细胞及角质形成细胞间的黑素转运具有一定调节作用。     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

Effectiveness of combination therapy of broadband light and intradermal injection of tranexamic acid in the treatment of chloasma

Objective

To investigate the efficacy and safety of broadband light (BBL) combined with intradermal injection of tranexamic acid for treating melasma.

Methods

120 women with melasma admitted to our hospital from January 2021 to April 2022 were randomly categorized into the following groups: control group, treated with 250 mg tranexamic acid given orally twice daily, except during menstruation; group I, treated with BBL (Sciton, Inc., USA) monthly; group II, received intradermal injections of tranexamic acid monthly; and group III, treated with BBL with intradermal injection of tranexamic acid monthly. Treatment in each group lasted three months. The MASI (Melasma Area Severity Index) and VISIA (Canfield VISIA Complexion Analysis) were used for evaluation.

Results

After treatment course, MASI scores and VISIA brown spot and red zone ranking improved in all four groups (p < 0.05). The decrease in MASI scores and improvement rates of VISIA brown spot and red zone rankings were not significantly different among the control group, group I, and group II; however, the decreased MASI scores and improvement rates of VISIA brown spot and red zone rankings were significantly higher in group III than in the other three groups (p < 0.05).

Conclusion

The effect of BBL combined with the intradermal injection of TA in the treatment of melasma is remarkable. This combination therapy can be an alternative and effective treatment for managing melasma.     

胶带粘贴法观察窄谱中波紫外线治疗后白癜风皮损的复色

目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）治疗前后照射区浅表角质层细胞中黑素颗粒的变化。 方法 使用胶带粘贴法对接受NB-UVB治疗的白癜风皮损进行浅表角质层细胞取样,银氨染色后观察细胞中黑素颗粒形态、分布、颜色的变化,使用Image-Pro Plus6.0显微图像分析软件计算细胞内黑素颗粒面积百分比,使用SPSS11.5对数据进行统计分析。 结果 治疗前白斑区仍残存少量含黑素颗粒的浅表角质层细胞。治疗前黑素颗粒面积百分比为（5.31 ± 4.12）%,治疗10次后为（6.24 ± 2.65）%,治疗20次后为（10.14 ± 5.73）%,治疗30次后为（13.05 ± 6.17）%,方差分析显示,治疗前、治疗10次、治疗20次、治疗30次后黑素颗粒面积百分比差异有统计学意义（F = 4.334,P < 0.05）,经两两比较分析,治疗30次后细胞内黑素颗粒面积百分比相对治疗前及治疗10次后均增高（P值均 < 0.01）。皮损复色区新生黑素颗粒染色后形态、颜色与治疗前周边正常肤色区有所不同。结论 用浅表角质层细胞胶带粘贴法可以客观评估NB-UVB治疗白癜风的复色过程。     

不同肤色个体表皮角质形成细胞Caspase14表达的研究

目的 探讨不同肤色人群角质形成细胞中Caspase14表达变化,明确黑素细胞和（或）黑素对其表达的影响。 方法 以Western印迹检测不同肤色个体原代角质形成细胞Caspase14的表达。取体外培养不同肤色的2代角质形成细胞,分别加入不同肤色的黑素细胞在分化培养基下共同培养24 h,以不加黑素细胞组为对照,Western 印迹检测Caspase14的表达。结果 浅、深肤色个体包皮原代角质形成细胞Caspase14的表达存在显著差异,深肤色者（Fitzpatrick Ⅳ/Ⅴ）原代角质形成细胞中Caspase14的表达显著高于浅肤色者（FitzpatrickⅠ/Ⅱ）（P ＜ 0.01）;深、浅肤色个体的角质形成细胞在与不同肤色个体的黑素细胞在分化培养基中共培养后24 h后,检测发现,与对照组相比,浅肤色个体角质形成细胞Caspase14表达的增加,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,而深肤色个体角质形成细胞Caspase14的表达则显著上调（P ＜ 0.05）。结论 深肤色个体角质形成细胞Caspase14表达显著高于浅肤色个体者。黑素细胞显著增加深肤色者角质形成细胞中Caspase14水平的表达。     

What Should Be Considered in Treatment of Melasma

Melasma is a common acquired hyperpigmentary skin disorder characterized by light to dark brown macules and patches occurring in the sun-exposed areas of the face. Melasma lesional skin is characterized by epidermal hyperpigmentation through increased melanogenesis in epidermal melanocytes. Some patients have dermal melanin but its amount is not significant and its distribution is very heterogeneous in the whole melasma lesional skin. Melasma is not homogeneous disease and there are personal characteristics of patients with melasma. The pathogenesis of melasma is not fully understood, but several hypotheses have been suggested. Increased vascularity in melasma lesions has suggested the role of increased number of enlarged vessels in the development of melasma. Endogeneous and exogeneous stimuli such as sex hormones and ultraviolet irradiation respectively may stimulate the microenvironment leading to the release of various mediators that cause activation of melanocytes and/or these stimuli may directly activate the melanocytes. Melasma patients may have specialized melanocytes with an intrinsic sensitivity to these stimuli.