红花注射液生物活性测定方法的筛选

目的:从多种活血化瘀类药物的药效学模型中筛选红花注射液生物活性测定的方法。方法:用4个不同厂家的红花注射液,根据功能主治相关的5种药效学实验方法(包括大鼠急性心肌缺血实验、小鼠急性脑缺血缺氧实验、小鼠体内血栓实验、小鼠断头存活实验、家兔体外抗血小板聚集实验),筛选1～2种设计合理、操作简便、指标明确、灵敏度高、重现性好的方法作为其生物活性测定方法。结果:小鼠体内血栓和家兔体外抗血小板聚集实验符合要求。结论:小鼠体内血栓实验和家兔体外血小板聚集实验为红花注射液生物活性测定的方法。     

注射用羟基红花黄色素A对家兔血小板聚集、超微结构及血小板活化因子诱导后富血小板血浆中GMP-140含量的影响

目的:观察注射用羟基红花黄色素A(HSYA)对家兔血小板聚集功能及超微结构的影响。方法:采用体内实验法,观察3种剂量的注射用HSYA(10、5和2.5mg/kg)对由花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)和血小板活化因子(PAF)(3.6nmol/L)诱导的家兔血小板聚集作用的影响,以及血小板超微结构的变化;并单独研究了以PAF为诱导剂的情况下,富血小板血浆(PRP)中α-颗粒膜蛋白-140(GMP-140)的含量。结果:各剂量HSYA注射剂能抑制AA、PAF诱导的家兔血小板聚集(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示:各剂量HSYA注射剂能减少AA和PAF诱导后的聚集型血小板数量并使树突型血小板突起变少变短(P<0.05,P<0.01);另外,各剂量HSYA注射剂还能降低经PAF诱导后GMP-140的含量(P<0.01)。结论:注射用羟基红花黄色素A具有显著的抗PAF诱导的血小板聚集作用,抑制血小板的活化,从而为临床抗血小板聚集药物的使用提供更多选择。     

羟基红花黄色素A对大鼠血栓形成和血小板聚集功能的影响

一类新药羟基红花黄色素A为从传统中草药红花中提取的有效成分,为探讨其抗缺血性脑损伤机制是否与抗血栓形成和抑制血小板聚集有关,我们参照文献[1,2]测定其对大鼠血小板聚集功能和体内动静脉旁路血栓形成的影响.     

迷迭香酸抗血栓和抗血小板聚集作用

迷迭香酸是丹参水溶性成分之一。大鼠体内实验(iv)表明,它能抑制静脉血栓形成。阻抑胶原诱导的血小板聚集,促进纤维蛋白溶解活性。当剂量为50及100 mg/kg时,血栓形成的抑制率分别为41.9和54.8%(P<0.vv05)。当剂量为100及150mg/kg时,血小板聚集的抑制率分别为30.4%(P<0.05)和46.4%(P<0.01),血浆优球蛋白溶解时间缩短(P<0.05)。纤维蛋白原含量无明显变化。以上结果说明,迷迭香酸有温和的抗血栓作用。其机理可能与抗血小板聚集和增强纤维蛋白溶解活性有关。     

灯盏细辛注射液生物活性限度测定方法适用性研究

目的：探讨灯盏细辛注射液生物活性测定方法的适用性。方法：经预试验,采用小鼠体内血栓形成试验和急性脑缺血试验、大鼠体内和体外血小板聚集试验,观察不同批号灯盏细辛注射液的药理作用,作为生物活性测定方法和限值确定依据。结果：3批样品中有2批样品小鼠30mL·kg^-1可明显增加血栓形成试验偏瘫恢复数,明显延长急性脑缺血试验小鼠存活时间;大鼠10mL·kg^-1可降低体内血小板最大聚集率,另一批反应较弱。3批样品对ADP诱导大鼠体外血小板聚集率有明显抑制作用,体内体外结果作用趋势相近。结论：灯盏细辛注射液三批样品对不同药理模型呈现不同的活性作用差别,考虑均可作为生物活性测定方法。建议选用其中之1～2种方法和10～30mL·kg^-1限值剂量对产品进行质量内部控制,积累数据,为制定正式标准提供依据。     

骨愈搽剂中总黄酮及其单体成分的体外透皮行为研究

目的:研究骨愈搽剂中总黄酮及其单体成分的体外透皮行为。方法:采用垂直式Franz扩散池法,以离体小鼠皮肤为透皮屏障进行试验。采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,高效液相色谱法测定单体黄酮羟基红花黄色素A(HSYA)含量,考察二者12 h内的体外透皮情况。结果:骨愈搽剂中总黄酮和HSYA的累积渗透量Q均随时间t的增加而增加,并与t1/2有显著相关性,透皮吸收过程均符合Higuchi方程(r=0.995 6、0.999 5),透过速率分别为126.24、47.516μg/(cm2·h)。结论:骨愈搽剂中总黄酮的透皮行为与HSYA的透皮行为具有相似性,均属于骨架扩散型透皮给药系统,具有长效缓释的特点。     

脑心舒的抗血栓作用

脑心舒明显抑制大白鼠血栓形成，ｉｇ２０ｇ／ｋｇ对胶原肾上腺素诱导的小白鼠血栓形成保护率为７３．３％；对ＡＤＰ诱导家兔体外血小板聚集作用的抑制率为（１０ｇ／２００ＬＰＲＰ）４１．５％；对ＡＤＰ诱导的小白鼠体内血小板聚集有明显的抑制作用，ｉｇ４０ｇ／ｋｇ后６０ｍｉｎ的抑制率最高，可达８３．８％。     

红花与羟基红花黄色素A大鼠体内药动学的研究

目的:研究红花和羟基红花黄色素A(hydrosafflor yellow A,HSYA)大鼠体内药动学的特征。方法:采用HPLC-UV法测定大鼠血浆中HSYA的血药浓度,应用DAS2.0求得药动学参数。结果:红花和HSYA大鼠体内药动学过程符合二室模型,其药动学参数:Cmax分别为(4.89±0.61)mg/L,(4.61±0.19)mg/L;tmax分别为(0.75±0.00)h,(0.75±0.00)h;AUC0~6分别为(7.32±0.44)mg·h·L-1,(8.68±0.93)mg·h·L-1;t1/2α分别为(0.25±0.08)h,(0.69±0.28)h;t1/2β分别为(1.21±0.36)h,(0.98±0.15)h。结论:红花在大鼠体内吸收比HSYA快,代谢比HSYA慢,表明红花中有其他成分影响HSYA的吸收和代谢。     

丰城鸡血藤总黄酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究

目的 研究丰城鸡血藤总黄酮对实验性大鼠血小板聚集和血栓形成的影响。方法 以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、胶原和凝血酶作诱导剂诱导大鼠血小板聚集,丰城鸡血藤总黄酮按25,50,100 mg·kg^-1的剂量灌胃给药,测定大鼠血小板聚集率,计算聚集抑制率;用血栓法测定大鼠血栓形成重量。结果 丰城鸡血藤总黄酮各剂量均能抑制ADP、胶原和凝血酶诱导的大鼠血小板聚集,并能减少血栓形成的重量。结论 丰城鸡血藤总黄酮具有明显的抗血小板聚集及抗血栓形成的作用。     

两种RGD模拟肽抗兔血小板聚集活性研究

目的研究两种RGD模拟肽(NB05和NB06)的抗兔血小板聚集活性.方法体外检测RGD肽抑制家兔ADP诱导血小板聚集率,计算RGD肽对血小板聚集的抑制率.体内颈动静脉旁路血栓模型检测两种RGD肽对形成血栓湿重的影响.结果NB05和NB06体外抗家兔血小板聚集的IC50值分别为(33.34±3.58)和(8.69±1.34)μmol·L-1;NB05和NB06均使血栓湿重显著减小(P＜0.01),NB06的抗血栓活性较NB05高(P＜0.05).结论NB05和NB06均具有较强的抗血小板聚集和抗血栓形成活性.     

花生壳提取物对家兔血小板聚集的影响

目的:研究花生壳提取物体内、外给药对血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板聚集的影响。方法:分别采用体内和体外给药,比浊法测定血小板的聚集率,观察花生壳提取物对PAF诱导的家兔血小板聚集的抑制作用。结果:花生壳提取物在20、10mg·mL-1浓度下体外给药对PAF诱导血小板聚集有明显抑制作用(P<0.05),抑制率分别为47.13%、33.48%;在100mg·kg-1剂量下体内给药对PAF诱导血小板聚集有明显抑制作用(P<0.01),抑制率为21.78%。结论:花生壳提取物对PAF诱导的血小板聚集有抑制作用,其作用机制可能与拮抗PAF受体有关。     

大孔吸附树脂动态纯化葛根藤总黄酮的研究

目的研究大孔树脂动态纯化葛根藤总黄酮的最佳工艺参数。方法采用动态吸附、分离的方法,以总黄酮含量为指标进行考察。结果 D-101大孔吸附树脂静态吸附葛根藤总黄酮的最大吸附量为40.25mg·mL-1;树脂的静置时间为12h;D-101树脂最佳上样浓度为38.00mg·mL-1、70%乙醇为最佳洗脱剂;3mL·min-1做为洗脱剂的洗脱流速为最佳洗脱流速。结论经过工艺验证,在这些参数条件下,分离、纯化葛根藤总黄酮具有良好的重现性。     

镰形棘豆黄酮类成分提取工艺与体外抗氧化活性研究

摘要 目的用正交实验法对镰形棘豆提取工艺进行优化,体外实验评价镰形棘豆总黄酮提取物的抗氧化活性。方法以镰形棘豆总黄酮的提取率和出膏率为评价指标,采用L9（34）正交实验设计法,优化镰形棘豆水提取工艺。选择清除羟自由基的Fenton法、清除1,1 二苯基 2 三硝基苯肼（DPPH）自由基法及还原能力,检测镰形棘豆总黄酮的体外抗氧化能力。结果镰形棘豆最佳水提取工艺为用药材10倍量体积的水,80 ℃热回流提取3次,每次1.0 h。该水提物中总黄酮含量达到（72.92±5.04） mg·g－1。镰形棘豆总黄酮提取物对羟自由基、DPPH自由基具有良好的清除能力,达到50%清除率所需药物的浓度（EC50）分别为1.10 mg·mL－1和262.57 μg·mL－1。结论该工艺可以显著提高提取物中黄酮类成分的含量,方法可靠,简便易行。富集后的镰形棘豆总黄酮具有良好的抗氧化活性,且活性与剂量呈正相关。     

羟基红花黄色素A抗心肌缺血作用研究

目的：研究羟基红花黄色素A抗心肌缺血的作用及机制。方法：采用大鼠心肌缺血及血瘀模型,观察羟基红花黄色素A的抗心肌缺血作用及对血液流变学和凝血功能的影响。结果：心肌缺血实验显示羟基红花黄色素A能明显减少心肌缺血大鼠的心肌梗死面积,显著减少血清肌酸激酶MB型（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）的产生,并可降低心肌缺血大鼠的血液黏度及血小板聚集现象,同时可以一定程度地延长凝血酶原时间（PT）及活化部分凝血活酶时间（APTT）值;血瘀实验显示羟基红花黄色素A可以降低血瘀大鼠的血液黏度,并可抑制ADP诱导的血小板聚集,同时对PT及APTT值有一定的延长作用。结论：羟基红花黄色素A可能是通过改善血液流变学及凝血功能发挥其抗心肌缺血作用。     

羟基红花黄色素A生物合成途径短链还原酶基因的特征及功能研究

目的 探究参与红花黄酮类生物合成途径特别是羟基红花黄色素A（HSYA）关键短链脱氢还原酶基因（SDRs）的功能。方法 基于红花转录组数据库以及代谢组数据库,筛选参与HSYA生物合成途径的SDRs,用qRT-PCR法分析表达模式。采用无缝克隆技术构建过表达载体,以农杆菌GV3101介导遗传转化云南巍山红花品系,对转基因T₂代植株进行阳性验证,并对花冠SDRs的基因表达量进行分析,UPLC-Q-TOF/MS法测定次生代谢物的含量。结果 筛选出3个参与HSYA生物合成途径的关键短链脱氢还原酶基因CtSDR1、CtSDR2、CtSDR3,表达量从高到低依次为花冠>叶>茎>根。花冠中表达量随花冠发育逐渐升高。对转基因T₂代植株进行阳性验证后的花冠进行qRT-PCR分析发现：与空白对照组相比,转CtSDR3过表达T₂代阳性植株花冠中CtSDR3基因的转录水平增加了2~3倍,次生代谢物HSYA的含量提高了7.1%～16.6%（P＜0.05）。结论 CtSDR3可能参与了红花中黄酮类化合物特别是HSYA的生物合成,为阐释CtSDR3在HSYA生物合成途径中的功能提供了数据支撑。     

Extraction and separation of total flavonoids from Flos Puerariae and its antioxidant activity

Objective To study the optimum extraction and separation process of total flavonoids in the flowers of Flos Puerariae and its antioxidative activity.Methods The total flavonoids were extracted with assistance of ultrasonic wave and the content was determined at 265 nm wavelength by Spectrophotometric method.Orthogonal experiment L9(34)was carried out to investigate the effects of concentration of solvent,the ratio of material to liquid,time length of extraction,and frequency of extraction on extraction results of total flavonoids from Flos Puerariae.The extracted solution was purified by petroleum ether and ethanol sequently.Under these conditions,the total flavonoids was eluted gradiently with mixed mobile phase of methanol-chloroform solution in the silica gel column system,and then determined by UV scanning and HPLC.Fenton reaction was used to produce and detect hydroxyl radicals(·OH),and pyrogallol system was used to produce and detect the superoxide radical anion(O2-·).Results The optimum conditions were as follows;using 40%(V/V)methanol as extractor with the ratio of material to liquid at 1∶30,and extracting for 2.5 h a time for 3 times.The extraction yield of total flavonoids was 13.6%.Six isoflavone compounds were isolated from the flowers of Flos Puerariae by the method of silica gel column chromatography.Antioxidative test results showed good performance of flavonoid scavenging capacity in both hydroxyl radical system and superoxide radical system and its IC50 was 7.65 μg·mL-1 and 0.18 mg·mL-1,respectively.Conclusions This study provided scientific basis for further development and utilization of Flos Puerariae and make preparation for later pharmacological research.     

羟基红花黄色素A对血小板活化因子的拮抗作用

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对血小板活化因子(PAF)的拮抗作用.方法以放射受体结合试验观察HSYA抑制[3H]PAF与家兔洗涤血小板(WRP)特异性结合的作用,以比浊法观察HSYA抑制PAF介导的WRP及兔多型核白细胞(PMNs)聚集的作用.结果 HSYA可浓度依赖地抑制1,2及4 nmol·^L-1 [³H]PAF与WRP受体的结合;HSYA抑制PAF介导的WRP及兔PMNs聚集,均具明显的量效关系,其IC₅₀分别为0.99及0.70 mmol·L^-1.结论 HSYA有PAF受体拮抗作用.     

市售鲜竹沥口服液的有效成分含量比较分析

目的分析比较市售鲜竹沥口服液有效成分的含量,为其质量控制提供科学依据。方法采购市场上11种不同品牌的鲜竹沥口服液产品,采用高效液相色谱(HPLC)、紫外分光光度(UV)、氨基酸分析、气相色谱质谱联用(GC-MS)等方法对鲜竹沥口服液中的愈创木酚、总黄酮、氨基酸、挥发性成分等成分进行分析,比较不同品牌鲜竹沥口服液中的有效成分的含量差别。结果鲜竹沥产品中愈创木酚含量为(1.26±0.29)μg·mL-1;总黄酮含量为(0.007±0.008)mg·mL-1;氨基酸种类>7种,天冬氨酸的含量>0.044 mg·mL-1,而苯丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸和异亮氨酸4种氨基酸的含量之和>0.026 mg·mL-1;鲜竹沥口服液中挥发性成分主要为酚类、酮类等。结论市场上不同品牌鲜竹沥口服液中的有效成分含量差别较大,有必要结合多种有效成分的含量综合评价和控制鲜竹沥口服液的质量。     

紫外-可见分光光度法测定细毡毛忍冬中总黄酮的含量

目的:建立一种简单、快速的方法,测定细毡毛忍冬中总黄酮含量,为细毡毛忍冬的质量控制和开发利用提供科学依据.方法:以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法,在波长510nm处测定细毡毛忍冬总黄酮含量.结果:芦丁对照品溶液在8.0179～48.1074μg.mL-1浓度范围内,吸光度与浓度呈良好线性关系,细毡毛忍冬中总黄酮含量为3.38％.结论:该测定方法稳定、快速、简便,为细毡毛忍冬的质量控制和开发利用提供了科学依据.