禽畜粪便对巨噬细胞吞噬功能影响的研究

本文采用巨噬细胞吞噬率(免疫荧光快速测定法)为检测指标,结合人血单核细胞体外实验和小鼠腹腔巨噬细胞整体染毒实验,从免疫毒理学角度探讨了奶牛、猪和鸡粪水溶性提取物的危害。结果表明,三种动物均能抑制人血单核细胞的吞噬功能。并有明显的剂量-反应关系。三种粪便对单核细胞的抑制能力极为相似。经10天猪粪水溶性提取物连续灌胃染毒的小鼠腹腔巨噬细胞实验也获得与体外实验相似的结果。     

流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究

摘要：目的　将流式细胞术应用到小鼠局部淋巴结实验（ｌｏｃａｌｌｙｍｐｈｎｏｄｅａｓｓａｙ,ＬＬＮＡ）中,期望建立既
可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的方法。方法　受试物分为溶剂对照［ＡＯＯ （丙酮∶ 橄榄油＝
４∶１）］、阴性对照（ＮａＣｌ）、致敏阳性物［己基肉桂醛（ＨＣＡ）、２,４ 二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）、２ 氨基酚（２
ＡＰＣ）］、刺激阳性物［ＫＯＨ、十二烷基硫酸钠（ＳＬＳ）］。采用８～１０周龄１６～２２ｇ的雌性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠７６
只,随机分为１９个受试物剂量组,每剂量组４只小鼠。每种受试物分别设低、中、高３个剂量组,检测浓
度分别为ＮａＣｌ （１００ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、３００ｇ／Ｌ）、ＨＣＡ （犞／犞：３．３％、１０．０％、３０．０％）、ＤＮＣＢ（２．５ｇ／Ｌ、
５．０ｇ／Ｌ、１０．０ｇ／Ｌ）、２ ＡＰＣ （１２．５ｇ／Ｌ、２５．０ｇ／Ｌ、５０．０ｇ／Ｌ）、ＫＯＨ （２５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ）、ＳＬＳ
（５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ）。于试验第１、２、３ 天将配制后不同浓度受试物稀释液以每耳２５μｌ／ｄ均匀涂
布于小鼠双侧耳后。检测小鼠耳缘厚度、耳引流淋巴结重量、Ｂ２２０＋ （ＣＤ４５Ｒ） 亚群淋巴细胞百分数等指
标。采用ＳＰＳＳ１１．５分析软件,对数据型指标进行方差分析,并对有差异的个体再行ＬＳＤ 两两比较,并根
据刺激指数对受试物致敏性大小进行分级。结果　与溶剂对照比较中高剂量的ＳＬＳ和ＫＯＨ 均可引起小鼠
耳缘厚度增加（犘＜０．０１）。可判定ＳＬＳ、ＫＯＨ 对皮肤有刺激性。ＤＮＣＢ、ＨＣＡ 各剂量组和２ ＡＰＣ 高剂量
组刺激指数均大于３,可以判断该３种化学物为皮肤致敏物。根据ＳＩ计算ＥＣ３的值,对致敏物进行分类：
ＤＮＣＢ （０．１９６）为强致敏物,ＨＣＡ （１．５５６） 和２ ＡＰＣ （３．１５６） 为中等致敏物。结论　应用流式细胞术
（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ）检测Ｂ２２０＋ （ＣＤ４５Ｒ）亚群淋巴细胞百分数作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴
结实验,结合耳缘厚度检测可实现同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。
关键词：局部淋巴结试验;小鼠;致敏性;刺激性;流式细胞术
中图分类号：Ｒ１１４;Ｒ９９４．６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０５ ０４７７ ０５     

二乙基亚硝胺对巨噬细胞吞噬功能的影响

为研究二乙基亚硝胺(DEN)对巨噬细胞活化和吞噬作用的影响,采用蜜噻蓝(MTT)及邻苯二胺比色法测定了小鼠腹腔巨噬细胞的活性和吞噬功能,结果表明DEN连续灌气染毒一周(5,10mg/kg)可明显降低腹腔巨噬细胞的数量和活性.此外,DEN还可抑制腹腔巨噬细胞对羊红细胞的吞噬作用,且呈剂量反应关系.DEN的这种抑制作用可能与其降低机体对致病微生物感染的抵抗力有关.     

纯蛇粉对小鼠细胞及体液免疫功能影响的研究

纯蛇粉含有多种氨基酸、维生素、微量元素及生物活性酶等丰富的营养成分,营养药理学作用广泛,经功能性实验证实,具有免疫调节和调节血脂的功能,经人体试验对痤疮显示了较好的疗效,现已引起广泛关注,但纯蛇粉的作用机理及适应症范围尚待深入研究。本文着重观察了纯蛇粉对小鼠免疫功能及对抗免疫抑制剂作用的影响。     

二乙基亚硝胺对巨噬细胞吞噬功能的影响

为研究二乙基亚硝胺对巨噬细胞化和吞噬作用的影响，采用噻唑蓝及邻苯二胺比色法测定了小鼠腹腔巨噬细胞的活性和吞噬功能，结果表明ＤＥＮ连续灌胃染毒一周可明显降低腹腔巨噬细胞的数量和活性。     

镉对小鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的 研究镉对小鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法 将小鼠分成5组,分别注射0．9％生理盐水,80、160、240或320mg／kg的CdCl2溶液,连续6周,于染毒4周和6周后每组处死一半小鼠,测定肾脏系数,用流式细胞术检测细胞凋亡,用免疫组化法测Bcl—2。结果 染镉组小鼠肾脏系数较对照组显著增高,而且细胞凋亡率较对照组明显增高,Bcl—2蛋白表达明显下降。结论 镉可诱导小鼠肾脏细胞凋亡。     

玛咖粉制品对小鼠免疫功能影响的研究

目的观察玛咖粉制品对小鼠免疫功能的影响。方法 BALB/c小鼠连续灌胃30天后检测碳廓清能力、迟发型变态反应、抗体生成细胞数、血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、NK细胞活性及Con A诱导的脾淋巴细胞转化能力等免疫指标。结果玛咖粉制品对小鼠的脏/体比值、碳廓清能力无明显影响;对迟发型变态反应、抗体生成细胞数、HC50、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、Con A诱导的小鼠淋巴细胞转化及NK细胞活性有显著作用。结论玛咖粉制品能增强小鼠免疫力。     

流式细胞术在保健食品功能评价中的应用

目的 建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法 3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg／kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2％绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标：（1）传统指标：包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤（NK）细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。（2）流式细胞仪检测指标：小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果 给予受试物蛋白粉后,0．83、1．67、5．01g／kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3．75、7．50和15．0ml／kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0．83、1．67g／kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1．50g／kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验：传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示：灵芝虫草菌丝体0．15、0．30和0．90g／kg剂量组总吞噬比例增加,0．30、0．90g／kg剂量组吞噬指数均提高。结论 应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保健食品增强免疫力功能方面具有良好的应用价值,值得进一步研究和推广。     

红景天对小鼠免疫功能的影响

红景天属植物，在我国华北地区有比较丰富的野生资源。理化研究表明，其具有广泛的药理作用。本试验测定其对小鼠免疫学效应的影响，以期为红景天的开发提供理论及实验数据。     

皇浆蜂胶粉对小鼠免疫功能的影响

目的　分析和评价皇浆蜂胶粉作为保健食品对小鼠免疫功能的影响。方法　参照《保健食品功能学评价程序和检验方法》进行。结果　显示该受试物可增强小鼠迟发型变态反应,提高血清溶血素抗体效价及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。结论　提示皇浆蜂胶粉具有增强小鼠免疫功能的作用。     

Application of flow cytometry and PMA-qPCR to distinguish between membrane intact and membrane compromised bacteria cells in an aquatic milieu

The paper compares two methods of distinguishing between alive and dead cells by differentiation on the basis of their membrane structure: LIVE/DEAD flow cytometry and PMA-qPCR. LIVE/DEAD flow cytometry was established using the LIVE/DEAD^® BacLight™ Bacterial Viability Kit with different ratios of Legionella pneumophila and Escherichia coli cells with intact and compromised membranes (heat treated). The PMA-qPCR method was tested and modified, and results were compared with those from LIVE/DEAD flow cytometry using L. pneumophila cells.Ratios of membrane intact to membrane compromised cells were well shown by LIVE/DEAD flow cytometry in all combinations. PMA-qPCR seems to work best in even mixed ratios (1:1) of intact and compromised cells. In other respects, we noticed an overestimation of intact cells in the samples which contained a high percentage of membrane compromised cells, and an underestimation of intact cells in samples with a small percentage of membrane compromised cells. However, looking at total counts instead of ratios, the results were within an order of magnitude. This implies that the use of PMA-qPCR is appropriate only for a qualitative analysis to monitor the success of a process such as disinfection. Furthermore, we were able to assess that both methods have advantages and disadvantages: LIVE/DEAD flow cytometry as applied in this study works well on some bacteria monocultures, but does not distinguish between bacteria species. The PMA-qPCR method allows the possibility of distinguishing between membrane intact cells and membrane compromised cells and can be used to screen for specific bacteria.     

流式细胞术检测家具企业混苯接触工人DNA损伤

目的:研究家具企业混苯作业工人外周血DNA损伤。方法:应用流式细胞术对32名混苯接触组和30名餐饮业对照组人员外周血淋巴细胞DNA损伤进行检测。结果:混苯接触组工人外周血淋巴细胞DNA损伤率和几何平均荧光强度均高于对照组(P<0.01),而不同工龄组工人DNA损伤率和几何平均荧光强度差别无统计学意义(P>0.05)。结论:职业性混苯接触可引起人外周血淋巴细胞DNA损伤,流式细胞术γH2AX分析法是一种有应用前景的检测外周血淋巴细胞DNA损伤的方法。     

应用流式细胞术研究甲基对硫磷对大鼠睾丸生精细胞的毒性作用

目的探讨有机磷农药甲基对硫磷对雄性大鼠的睾丸毒性作用。方法20只SD雄性大鼠（220～240g）随机分为对照组和低（1．2mg／kg）、中（6mg／kg）、高（30mg／kg）剂量甲基对硫磷组,灌胃染毒,容量为5ml／kg,每日1次,连续6周。染毒结束次日处死小鼠,用流式细胞仪对大鼠睾丸生精细胞进行分析。结果①高、中剂量甲基对硫磷组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）;②与对照组相比,各剂量甲基对硫磷组1C细胞显著减少,2C细胞显著增加（P〈0．05或P〈0．01）;③与对照组相比,高剂量染毒组G0／G1期细胞比例显著降低,G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论甲基对硫磷能够阻滞大鼠生精细胞的细胞周期进程,诱导生精细胞凋亡。     

流式细胞术检测血小板微粒及其临床应用

〔目的〕探讨血小板微粒 (PMPs)定量检测方法。〔方法〕应用流式细胞仪 ,以 3mm和 0 .8mm的标准微球作内参对照 ,建立血小板微粒的定量检测方法 ,并对其临床应用进行初步研究。〔结果〕80例健康人静血小板释放的PMPs为 1.2× 10 5± 5 .7× 10 4 ml ,活化血小板释放的PMPs为 1.6× 10 6 ± 9.1× 10 5 ml ;2 8例冠心病、2 2例急性脑梗塞和 2 2例慢性肾功衰竭患者血浆中PMPs较对照组明显增高 (P <0 .0 0 1) ,分别为 6.1× 10 5± 2 .5× 10 5 ml、6.8× 10 5± 3 .4× 10 5 ml和5 .9× 10 5± 3 .1× 10 5 ml,而 2 6例急性白血病化疗后伴严重血小板减少者的PMPs增高不明显 ,为 1.3× 10 5± 6.1× 10 4 ml。〔结论〕PMPs是监测血小板活化、预测和诊断血栓性疾病的一个重要指标 ,采用流式细胞术内参定位法可以准确而快速地定量分析PMPs ,有利于实验结果的室间比较和检测方法的标准化。     

镉染毒小鼠网织红细胞微核流式细胞术研究

目的通过流式细胞术(FCM)检测外周血微核方法，研究氯化镉(CdCl2)染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率，评价流式细胞术在微核检测中的应用价值及探讨氯化镉的致突变作用。方法采用转铁蛋白受体CD71荧光抗体和碘化丙啶(PI)染色，并以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核模式生物调校流式细肛仪．检测10～60mg／kg环磷酰胺染毒和50～400μg／kg氯化镉染毒对小鼠的外周血含微核网织红细胞率的变化。结果不同剂量环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率和骨髓含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠，且二者之间相关性良好(r=0．955)；不同剂量氯化镉染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率未见明显升高。结论FCM测定外周血含微核网织红细胞率可替代传统显微镜检查骨髓含微核网织红细胞率用于遗传毒性评价；在本研究条件下未观察到氯化镉有明显的诱导小鼠外周血含微核网织红细胞形成的作用。     

Use of flow cytometry for characterization of human cytomegalovirus vaccine particles

Despite a 40-year effort, an effective vaccine against human cytomegalovirus (HCMV) remains an unmet medical need. The discovery of potent neutralizing epitopes on the pentameric gH complex (gH/gL/UL128/130/131) has reenergized HCMV vaccine development. Our whole-virus vaccine candidate, currently in a Phase I clinical trial, is based on the attenuated AD169 strain with restored expression of the pentameric gH complex. Given the complexity of a whole-virus vaccine, improved analytical methods have been developed to better characterize heterogeneous viral particles released from infected cells during vaccine production. Here we show the utility of a commercial flow cytometer for the detection of individual HCMV particles, either via light scattering or using fluorescence after labeling of specific antigens. Rapid measurements requiring minimal material provide near real-time information on particle concentration, distributions of different particle types, and product purity. Additionally, utilizing immunoreagents has allowed us to characterize the distribution of key antigens across individual particles and particle types.     

流式细胞术检测重症肌无力患者调节性T细胞变化

目的：探讨并发胸腺疾病的重症肌无力患者的外周血和胸腺中调节性T细胞变化。方法：采用流式细胞仪多参数（三标CD4、CD25和Foxp3）逐层分析法分析并发胸腺疾病的重症肌无力患者的外周血和胸腺中调节性T细胞比例。结果：正常人、MG并胸腺增生者和MG并胸腺瘤者外周血中CD4＋阳性细胞中调节性T细胞比例差别无统计学意义（F=0.095,P=0.910）,胸腺中CD4＋阳性细胞中调节性T细胞比例差别有统计学意义（F=16.162,P〈0.001）。结论：调节性T细胞数量减少或功能异常在MG中起重要作用。用流式细胞仪多参数逐层分析法是淋巴细胞亚型分析的重要方法。     

人外周血淋巴细胞热应激蛋白70的流式细胞术检测

目的 建立一种操作简单、快速而又可靠性强的检测细胞热应激蛋白（HSPs）表达水平的方法。方法 采用流式细胞术和免疫印迹方法检测人外周血淋巴细胞热应激蛋白70（HSP70）。结果 外周血淋巴细胞在43℃受热应激30min后,HSP70水平迅速升高,6h达到峰值,之后逐渐降低至正常水平。两种方法所得结果具有高度一致性,但流式细胞术操作简单、省时,可测样本量大,结果可靠,因此更适合于大样本快速研究。结论 运用流式细胞术大规模检测人外周血淋巴细胞HSP70是可行的。     

利用3种抗体流式分选母血中胎儿细胞的比较

目的比较单克隆抗转铁蛋白受体抗体(CD71McAb)、单克隆抗血型糖蛋白A抗体(GPAMcAb)和抗血红蛋白-ξ抗体(ξ-Hb)3种胎儿有核红细胞(FRBCs)特异性抗体在流式细胞仪上分选母血中胎儿细胞的检出率,评价分选胎儿细胞的最适方法。方法收集55例孕妇外周血,利用淋巴细胞分离液从中分离出单个核细胞层后,每例标本分为5组,分别加入不同抗体第1组CD71Mchb单用;第2组GPAMcAb单用;第3组ξ-Hb单用;第4组CD71+GPA联用;第5组CD71+GPA+ξ-Hb联用,孵育后流式细胞仪进行分选,应用PEP-PCR检测分选后的胎儿细胞的SRY基因。结果5组FNRBC的阳性细胞检出率及鉴定符合率分别为2.74%,77.14%;5.25%,65.4%;0.22%,95.7%;0.72%,98.6%;0.02%,60%。结论利用CD71McAb和GPAMcAb双重标记胎儿细胞进行分选或者利用抗ξ-Hb特异性McAb分选FRBCs是更有效的分选方法。