我国部分地区甘蔗中3-硝基丙酸含量的调查

3-硝基丙酸是变质甘蔗食物中毒的主要毒性物质。利用薄层色谱测定法测定了河南、河北、广西、福建和广东五省的甘蔗中3-NPA的含量。1987年测定88份,阳性率为21.6％,含量范围为2～134ppm;1988年测定了308份,阳性率为12.7％,含量范围为2～400ppm。文中对影响甘蔗污染3-硝基丙酸的因素做了讨论。     

3-硝基丙酸的代谢研究

3-硝基丙酸是引起变质甘蔗中毒的主要毒性物质。本实验采用定位氚标记物,对3-硝基丙酸体内外代谢进行了研究。结果表明,[2,3-~3H]3-硝基丙酸在体外实验条件下不被大鼠肝微粒体酶所代谢。进入动物体内后,肾、肝的放射性最高,各脑区分布未见明显差别,放射性核素与脑组织成分无特异性结合,3天内从尿、粪排出的总放射性为灌胃量的22.3％,其余的以最终代谢产物均匀掺入各组织中。     

甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的薄层色谱测定法

甘蔗及甘蔗汁中的3-硝基丙酸经提取、净化后,在硅胶G薄层色谱板上,与酚试剂反应,在长波紫外灯下形成黄色荧光显色物,本法最低检出量为0.2μg,按本方法测定甘蔗及甘蔗样品中3-硝基丙酸的最低检量为2ppm。在样品中加入3-硝基丙酸水平为1～10ppm时,其回收率范围为80.0～106.0%之间。     

免试剂离子色谱法测定变质甘蔗中3-硝基丙酸

目的:建立变质甘蔗中3-硝基丙酸(3-NPA)的简便快速离子色谱法。方法:利用dionex1500型离子色谱仪,选用AS19阴离子分析柱,20 mmol KOH淋洗液,流速为1.00 ml/min,电导检测器。样品用纯水超声提取后,经高速离心0.2μm滤膜过滤后直接进样。结果:本法相关性好(r=0.9998),精密度高(RSD<3.0),样品平均加标回收率为96%～102%,定性检出限为0.03 mg/kg,定量检出限为0.08 mg/kg。结论:该方法简便快速、灵敏度高、选择性强,适用于变质甘蔗食物中毒分析。     

3-硝基丙酸的高效液相色谱分析

利用反相高效液相色谱法定量分析米曲霉菌种培养基中３ 硝基丙酸的含量。样品经乙酸乙酯提取、净化后,以 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ１８为色谱柱,以 Ｃ Ｈ３ Ｃ Ｎ／ Ｋ Ｈ２ Ｐ Ｏ４ （００２ ｍ ｏｌ／ Ｌ,ｐ Ｈ３０）（１／３,ｖ／ｖ）为流动相,流速为１０ｍ ｌ／ｍ ｉｎ,紫外检测器波长２１０ｎｍ 。该方法最低检出量为１０μｇ／ｋｇ（信噪比为３）,回收率为９０１％ ～９８０％ 。     

3－硝基丙酸在大鼠体内的代谢研究

３－硝基丙酸（３－ＮＰＡ）是引起变质甘蔗中毒的主要毒性物质。本文报告了采用气相色谱－热能检定器的化学痕量分析方法和同位素示踪技术，研究３－ＮＰＡ在大鼠体内的代谢。结果表明，３－ＮＰＡ具有经胃肠道吸收快，组织分布广泛、转化、消失较快的特点。灌胃后５ｍｉｎ不同脑区均可检出３－ＮＰＡ，其中纹状体、海马的含量明显高于大脑皮层，这与变质甘蔗中毒患者的发病特点与病理改变相一致。     

3－硝基丙酸脂质过氧化作用的实验研究

９只雄性大鼠以８０ｍｇ／ｋｇ３－硝基丙酸（３－ＮＰＡ）经口染毒后１５、３０和４５ｍｉｎ时，在肝脏中用电子自旋共振仪可检测到较强的自由基信号。肾上腺素红法测定发现５×１０－３～１０－２ｍｏｌ／Ｌ３－ＮＰＡ可明显促进肝与脑微粒体和线粒体产生自由基。８０ｍｇ／ｋｇ３－ＮＰＡ灌胃染毒大鼠肝和脑中ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ活性上升，ＭＤＡ含量升高。因此３－ＮＰＡ在体内和体外均有诱发脂质过氧化作用的能力。     

3－硝基丙酸脂质过氧化作用的实验研究

９只雄性大鼠以８０ｍｇ／ｋｇ３－硝基丙酸（３－ＮＰＡ）经口染毒后１５、３０和４５ｍｉｎ时，在肝脏中用电子自旋共振仪可检测到较强的自由基信号。肾上腺素红法测定发现５×１０－３～１０－２ｍｏｌ／Ｌ３－ＮＰＡ可明显促进肝与脑微粒体和线粒体产生自由基。８０ｍｇ／ｋｇ３－ＮＰＡ灌胃染毒大鼠肝和脑中ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ活性上升，ＭＤＡ含量升高。因此３－ＮＰＡ在体内和体外均有诱发脂质过氧化作用的能力。     

Olive oil reduces oxidative damage in a 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease-like rat model

Abstract

Free radicals contribute to altered neuronal functions in neurodegenerative diseases and brain aging, by producing lipid- and other molecule-dependent modifications. The Mediterranean diet has been associated with a reduced risk of neurodegenerative disease. This study sought to verify whether extra-virgin olive oil (EVOO) exerted a brain antioxidant effect, protecting the brain against the oxidative stress caused by 3-nitropropionic acid (3NP). 3NP was administered intraperitoneally (i.p.) at a dose of 20 mg/kg body weight over four consecutive days. EVOO (representing 10% of calorie intake in the total standard daily diet of rats) and hydroxytyrosol (HT; 2.5 mg/kg body weight) were administered for 14 days. In all studied samples, 3NP caused a rise in lipid peroxides (LPO) and a reduction in glutathione (GSH) content. While the results showed that EVOO and HT reduces lipid peroxidation product levels and blocks the GSH depletion prompted by 3NP in both striatum and rest of the brain in Wistar rats. In addition, EVOO blocks and reverses the effect of 3NP on succinate dehydrogenase activity. In brief, the data obtained indicate that EVOO and HT act as a powerful brain antioxidant.     

过氧化氢诱导TM3细胞氧化应激模型建立

目的构建过氧化氢(H₂O₂)诱导小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化应激模型, 为肥胖相关雄性生殖功能低下机制研究提供参考。方法分别以不同浓度H₂O₂处理TM3细胞4 h, 采用噻唑蓝法测定细胞活力, 酶联免疫吸附试验检测睾酮水平, 比色法测定细胞内活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果300、600 μmol/L H₂O₂组细胞存活率[(86.7±4.3)%、(46.3±2.0)%]均低于对照组[(100.0±1.7)%](P<0.05);与对照组[(250.09±26.70)pg/mL]比较, 150、300、600 μmol/L H₂O₂组TM3细胞睾酮水平[(188.93±7.06)、(179.23±6.66)、(131.59±11.26)pg/mL]均明显降低(P<0.05);与对照组比较, 150、300、600 μmol/L H₂O₂组TM3细胞SOD和CAT活性[分别为(2.42±0.17)、(2.69±0.30)、(0.44±0.41)和(56.76±12.17)、(23.45±2.17)、(24.55±18.05)U/mg protein]均明显下降(P<0.05)。结论成功构建以H₂O₂为诱导剂的TM3细胞体外氧化应激模型。     

抗坏血酸对染砷小鼠肝脏氧化损伤拮抗作用

目的 研究抗坏血酸(VC)对砷中毒小鼠肝脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的影响。方法 用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;用Nitrite-kit法检测SOD活性;用二硫双硝基苯酸(DTNB)比色法测定GSH含量。结果 对照组MDA含量为14.87 nmol/(mg·prot),SOD活力为167.49NU/(mg·prot),GSH含量为51.27 nmol/(mg·prot);20μmol/L染砷组小鼠肝脏中MDS含量明显增高,为18.48nmol/(mg·prot),SOD活力明显下降,为125.97 NU/(mg·prot),GSH含量也显著降低,为34.87 nmol/(mg·prot);而抗坏血酸拮抗组小鼠肝脏中MDS含量与单纯染砷组相比明显下降,为16.24 nmol/(mg·prot),但未达到对照组水平;SOD活力明显增高,为138.94 NU/(mg·prot),但未达到对照组水平,GSH含量显著增高,为50.39 nmol/(mg·prot),与对照组比较差异无统计学意义。结论 抗坏血酸可拮抗砷对小鼠肝脏的氧化损伤。     

Pomegranate seed oil: Effect on 3-nitropropionic acid-induced neurotoxicity in PC12 cells and elucidation of unsaturated fatty acids composition

Background: Seed oils are used as cosmetics or topical treatment for wounds, allergy, dandruff, and other purposes. Natural antioxidants from plants were recently reported to delay the onset or progress of various neurodegenerative conditions. Over one thousand cultivars of Punica granatum (Punicaceae) are known and some are traditionally used to treat various ailments.

Aim: The effect of pomegranate oil on 3-nitropropionic acid- (3-NP) induced cytotoxicity in rat pheochromocytoma (PC12) neuronal cells was analyzed in this study. Furthermore, the analysis of unsaturated fatty acid composition of the seed oil of pomegranate by gas chromatography-electron impact mass spectrometry (GC-MS) was done.

Results: GC-MS study showed the presence of 6,9-octadecadiynoic acid (C18:2(6,9)) as a major component (60%) as 4,4-dimethyloxazoline derivative. The total extractable oil with light petroleum ether by Soxhlet from the dry seed of P. granatum was 4–6%. The oil analyzed for 48.90 ±?1.50 mg gallic acid equivalents/g of oil, and demonstrated radical-scavenging-linked antioxidant activities in various in vitro assays like the DPPH (2,2-diphenyl-l-picrylhydrazyl, % IP = 35.2 ± 0.9%), ABTS (2,2′-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid), % IP 2.2 ± 0.1%), and β-carotene bleaching assay (% IP = 26 ± 3%), respectively, which could be due the possible role of one methylene interrupted diynoic acid system for its radical-scavenging/antioxidant properties of oil. The oil also reduced lipid peroxidation, suppressed reactive oxygen species, extracellular nitric oxide, lactate/pyruvate ratio, and lactase dehydrogenase generated by 3-NP- (100 mM) induced neurotoxicity in PC12 cells, and enhanced the levels of enzymatic and non-enzymatic antioxidants at 40 μg of gallic acid equivalents.

Conclusion: The protective effect of pomegranate seed oil might be due to the ability of an oil to neutralize ROS or enhance the expression of antioxidant gene and the exact mechanism of action yet to be elucidated.     

壬基酚暴露对大鼠胃粘膜的氧化损伤作用

目的初步探讨壬基酚(Nonylphenol,NP)暴露对SD大鼠胃组织SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影响。方法将24只清洁级SD大鼠随机分为4组,每组6只。阴性对照组给予玉米油,剂量组分为低、中、高剂量组给予NP+玉米油灌胃染毒,NP浓度分别为25、50、100mg/kg,每天灌胃染毒1次,连续灌胃42d后麻醉处死取胃组织,通过HE染色观察胃组织的病理变化,利用化学比色法检测胃组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果胃粘膜肉眼观各组均未出现出血、坏死,NP中剂量组胃粘膜皱襞出现了针眼大小的色素沉着点,NP高剂量组明显增多;HE染色见正常组大鼠胃黏膜上皮细胞及黏膜腺体排列整齐、完整,未见脱落、缺损,黏膜肌层及间质未见异常;低剂量组上皮细胞和黏膜腺体充血水肿,有血管扩张;中、高剂量组胃黏膜上皮细胞破损、脱落,腺管肿胀、充血,可见黏膜及间质部有淋巴细胞浸润;与对照组比较,高剂量组SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05),低、中剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),SOD活性随着染毒剂量的增加呈现逐渐下降的趋势;与对照组比较,各染毒组GSH-Px活性差异无统计学意义;与对照组比较,低剂量组MDA含量增高(P<0.05),中、高剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论25 mg/kg壬基酚短期暴露对胃粘膜有一定氧化损伤作用。     

谷胱甘肽和α-硫辛酸对锰致大鼠体内过氧化反应的影响

将Wistar大鼠32只随机分为4组,即对照组、单纯染锰组、硫辛酸(LA)干预组、谷胱甘肽(GSH)干预组。对照组腹腔注射生理盐水,其余各组腹腔注射MnCl2150μmol/kg,2 h后,对照组、单纯染锰组皮下注射生理盐水,每周染毒5次;硫辛酸干预组皮下注射LA 35μmol/kg,谷胱甘肽干预组皮下注射GSH 1 mmol/kg,隔日干预,共计4周。测定肝、脑和肾组织中的谷胱甘肽(GSH)、丙二醛含量(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组比较,单纯染锰组肝、脑、肾组织中的MDA含量均升高(P<0.05),GSH含量和GSH-Px、SOD的活性都有不同程度的降低;两干预组肾组织中MDA含量降低(P<0.01,P<0.05)。与单纯染锰组比较,GSH干预组肝组织的MDA、GSH含量降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05),脑和肾组织的MDA含量降低(P<0.05,P<0.01);LA干预组肝组织SOD、GSH-Px的活性升高(P<0.01),脑、肾组织的MDA含量降低(P<0.05,P<0.01)。提示GSH和LA对锰致大鼠氧化损伤有一定的拮抗作用。     

谷胱甘肽与α-硫辛酸对锰致大鼠神经元凋亡影响

目的研究谷胱甘肽(GSH)和α-硫辛酸(LA)对锰致大鼠脑组织氧化损伤及纹状体神经元凋亡的影响。方法取Wistar大鼠32只,随机分为4组。第1组为对照组,第2组为单纯染锰组,第3、4组为干预组。第1组腹腔注射生理盐水,第2~4组腹腔注射150μmol/(kg.bw)MgCl2,2 h后,第1组和第2组皮下注射生理盐水,第3组皮下注射35μmol/(kg.bw)LA,第4组皮下注射1 mmol/(kg.bw)GSH。每周5次,隔日干预,共计4周。检测脑组织谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用原位末端标记DNA片段(TUNEL)法检测纹状体部位神经元凋亡。结果单纯染锰组大鼠脑组织MDA含量较对照组升高,GSH和LA干预组MDA较单纯染锰组降低。单纯染锰组神经元凋亡率高于对照组、GSH和LA干预组。结论GSH和LA对锰致大鼠脑组织氧化损伤及纹状体神经元的凋亡具有一定的拮抗作用。     

建立雄性SD大鼠高脂血症模型研究

目的比较两种不同高脂饲喂法致高脂血症大鼠模型的异同点,并对其使用特点进行初步评价。方法按体重、血清胆固醇水平将24只4周龄健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、普通高脂模型组（B组）和丙硫氧嘧啶模型组（C组）,分别饲以基础饲料、未添加丙硫氧嘧啶的高脂饲料和添加0.2%丙硫氧嘧啶的高脂饲料。6周后处死大鼠,测定血脂指标、计算肝指数,并对肝脏进行组织病理学检查,采用单因素方差分析和LSD法对各指标进行分析比较。结果与A组相比,两模型组大鼠体重增加缓慢（P〈0.05）,C组较B组增重更加缓慢（P〈0.01）。两模型组大鼠在实验期间表征有较大差异;两模型组TC、LDL-C水平均显著升高（P〈0.05）,C组升高更为显著（P〈0.01）。两模型组TG、HDL-C水平变化差异无统计学意义（P〉0.05）;病理组织学检查表明,两种高脂模型组大鼠肝脏均出现脂肪样变,肝细胞体积增大,细胞核被细胞内大脂滴挤向一侧。结论两种方法均能成功建立SD大鼠高脂血症模型,但普通高脂模型可用于食品、保健品等以预防为目的的降脂功效评估,而添加了丙硫氧嘧啶的高脂模型更适用于降脂药的临床前评价。