DahlS高血压大鼠卵巢细胞凋亡相关因素的实验研究

目的:探讨高血压时卵巢细胞凋亡的调控机制。方法:以日本引进DahlS高血压大鼠为研究对象,应用流式细胞仪、生化等技术,对DahlS高血压大鼠卵巢细胞凋亡与Bcl-2、iNOS及NO等相关因素进行研究。结果:(1)随高血压病情加重,卵巢细胞凋亡率逐渐上升,与之伴随Bcl-2表达率逐渐下降,iNOS表达率逐渐升高,实验组与对照组比较差别显著,P<0.05。(2)11周龄实验组血清NO含量较对照组降低,两者比较差别显著,P<0.01;而随高血压病情加重,实验组NO含量逐渐增高,反而高于对照组,两组比较差异有统计学意义,P<0.05。丙二醛(MDA)随高血压病情加重逐渐增高,实验组与对照组比较差别显著,P<0.05。结论:随血压升高,卵巢细胞凋亡加重与Bcl-2调控及iNOS、NO直接作用有关。     

bFGF单克隆抗体对卵巢癌移植瘤血管生成的抑制作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在卵巢上皮性肿瘤中的表达强度与肿瘤血管生成之间的关系,及其单克隆抗体bFGFMAb对人卵巢癌移植瘤血管生成和肿瘤生长的影响。方法:(1)应用免疫组化法和图像分析系统研究bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达部位和强度;以及bFGF的表达强度与肿瘤新生血管的关系;(2)利用卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,每周2次将不同浓度的bFGFMAb注射于瘤体周围,连续8周,每周测量肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线;对移植瘤组织行Ⅷ因子的免疫组化染色,测定肿瘤内微血管密度(MVD)。结果:(1)bFGF主要在卵巢上皮性肿瘤细胞浆内表达,在交界性和恶性肿瘤中,部分细胞同时存在核表达;bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达强度逐步增强,同时MVD逐步增高,二者呈正相关(P<0.001);(2)30、20、10μgbFGFMAb组移植瘤体积分别是对照组的31.34%、49.20%和71.25%,MVD分别是对照组的27.80%、52.37%和81.86%(P<0.05),其作用呈浓度依赖性。结论:bFGFMAb能明显抑制卵巢癌的血管生成和肿瘤生长,有望成为卵巢癌生物治疗的新方法。     

survivin、FHIT及bFGF在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:研究凋亡抑制基因survivin、抑癌基因FHIT及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织(CIN)及宫颈鳞癌组织中的表达及其与宫颈鳞癌临床分期、病理分级及淋巴结转移的关系,探讨其在宫颈鳞癌发生、发展中的作用。方法:分析郑州大学第二附属医院病理科2008年1月至2009年11月手术切除、病理检查证实为宫颈鳞癌的组织标本45例,另取CIN45例、正常宫颈组织15例(子宫肌瘤行子宫全切除术的宫颈组织)作为对照,应用免疫组化SP法检测survivin、FHIT及bFGF在3组宫颈组织中的表达情况。结果:sur-vivin在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈上升趋势(χ2=11.429,P<0.05),survivin的表达在宫颈鳞癌不同临床分期、病理分级间比较,差异有统计学意义(P<0.05);FHIT在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈下降趋势(χ2=24.640,P<0.05),FHIT的表达与宫颈鳞癌病理特征的关系中,仅在淋巴结有无转移方面比较差异有统计学意义(P<0.05);bFGF在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达依次呈上升趋势(χ2=17.552,P<0.05),bFGF的表达在宫颈鳞癌不同临床分期、病理分级及淋巴结有无转移方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:survivin、FHIT、bFGF的表达与宫颈病变的进展有一定的关系,并且可能与宫颈鳞癌的发生、发展及浸润和转移有关。     

DahIS高血压大鼠卵巢细胞凋亡相关因素的实验研究

目的：探讨高血压时卵巢细胞凋亡的调控机制。方法：以日本引进DahIS高血压大鼠为研究对象，应用流式细胞仪、生化等技术，对DahIS高血压大鼠卵巢细胞凋亡与Bcl-2,iNOS及NO等相关因素进行研究。结果：（1）随高血压病情加重，卵巢细胞凋亡率逐渐上升，与之伴随Bcl-2表达率逐渐下降，iNOS表达率逐渐升高，实验组与对照组比较差别显，P＜0．05。（2）11周龄实验组血清NO含量较对照组降低，两比较差别显，P＜0．01；而随高血压病情加重，实验组NO含量逐渐增高，反而高于对照组，两组比较差异有统计学意义，P＜0．05。丙二醛（MDA）随高血压病情加重逐渐增高，实验组与对照组比较差别显，P＜0．05。结论：随血压升高，卵巢细胞凋亡加重与Bcl-2调控及iNOS、NO直接作用有关。     

卵巢子宫内膜异位囊肿中PTTG、bFGF和c-myc的表达及意义

目的:探讨PTTG、bFGF和c-myc在卵巢子宫内膜异位囊肿的表达及意义。方法:用免疫组化法检测60例卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位内膜、在位内膜及34例正常子宫内膜组织中PTTG、bFGF及c-myc的表达水平。结果:在卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位内膜中,PTTG、bFGF及c-myc的阳性表达率分别是80%、76.7%及66.7%,其阳性率明显高于在位内膜(P<0.05)及正常子宫内膜组织,在位内膜亦高于正常对照组内膜(P<0.05)。等级相关分析PTTG、bFGF及c-myc呈正相关关系。结论:卵巢子宫内膜异位囊肿中PTTG表达明显高于正常子宫内膜组织,可能是通过上调bFGF和c-myc蛋白表达在卵巢子宫内膜异位囊肿的发生发展中发挥了作用。     

Efp、VEGF和bFGF在子宫内膜癌的表达及意义

目的:探讨Efp、VEGF和bFGF在子宫内膜癌组织的表达以及与临床病理参数的关系。方法:采用荧光定量RT-PCR、ELISA和Western blot方法检测Efp、VEGF和bFGF mRNA及蛋白在子宫内膜癌组织的表达。结果:Efp mRNA在子宫内膜癌的表达量为1.12±0.47,低于正常对照组(P(0.05)。VEGF mRNA在子宫内膜癌及不典型增生组的表达量分别为3.20±0.45和2.51±0.37,明显高于正常对照组(P(0.05),bFGFmRNA在子宫内膜癌及不典型增生组的表达量分别为6.43±0.73和3.46±0.62,明显高于正常对照组(P(0.01,P(0.05)。Efp和bFGF mRNA的表达与组织分化程度相关,Efp mRNA在低分化子宫内膜癌的表达低于高分化的表达,而bFGF mRNA的表达则相反。Efp、VEGF和bFGF蛋白的表达与mRNA一致。结论:VEGF和bFGF参与了子宫内膜癌的血管生成,Efp和bFGF在子宫内膜癌的表达变化提示可能与预后有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠脑缺血后神经新生的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对新生大鼠脑缺血后神经新生的影响.方法 通过结扎3日龄新生SD大鼠双侧颈总动脉制备脑缺血模型,随机分为治疗组(36只):给予bFGF 10 ng/g侧脑室注射;对照组(36只)给予相同体积的生理盐水.另取36只新生大鼠,仅分离双侧颈总动脉,不结扎,不给予药物,作为假手术组.三组大鼠分别于术后第4、7、14天处死,获取脑组织标本,采用免疫荧光染色、Western印记和实时PCR方法,观察三组大鼠不同时点脑室下区巢蛋白(nestin)、Ⅲ型β-微管蛋白(Tuj1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和少突胶质细胞NG2蛋白及其mRNA的表达变化.结果 (1)免疫荧光染色:治疗组BrdU+/nestin+细胞数目术后7 d达高峰[(48.7±5.9)个/视野],高于同时点对照组[(32.2±3.1)个/视野]和假手术组[(17.3±1.6)个/视野],差异有统计学意义(P<0.01);治疗组BrdU+/Tuj1+细胞、BrdU+/GFAP+细胞、BrdU+/NG2+细胞数目术后14 d[分别为(92.6±9.7)、(58.2±6.1)、(57.3±5.4)个/视野]达高峰,高于同时点对照组[分别为(65.8±7.1)、(42.1±4.4)、(37.8±3.2)个/视野]和假手术组[分别为(35.3±3.1)、(33.6±3.4)、(22.4±2.1)个/视野],差异有统计学意义(P<0.01).(2)Western印迹和实时PCR:与免疫荧光染色结果一致,即治疗组nestin蛋白和mRNA表达术后7 d达高峰,高于同时点对照组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组Tuj1、GFAP和NG2蛋白和mRNA术后14 d达高峰,高于同时点对照组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 bFGF可促进新生大鼠脑缺血后脑室下区神经干细胞的增殖以及向功能神经细胞(神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞)的分化,可能对新生大鼠脑缺血后神经细胞的再生具有促进作用.     

胎膜早破绒毛膜羊膜bFGF与Bax、Bcl-2的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与凋亡调控基因Bax、Bcl-2在胎膜上的表达及与胎膜早破(premature rupture of membranes,PROM)发生的关系。方法采用免疫组化染色方法检测30例PROM及30例正常妊娠者的绒毛膜羊膜上bFGF与Bax、Bcl-2的表达。结果bFGF和Bax在滋养细胞、上皮细胞、间充质细胞和成纤维细胞胞浆内有表达,Bcl-2在绒毛膜合体滋养细胞上有表达;PROM组bFGF阳性平均积分光密度值(0.051±0.012)与正常组(0.098±0.027)比较明显降低(P<0.01),PROM组Bax阳性平均积分光密度值(0.086±0.021)与正常组(0.046±0.018)比较明显增高(P<0.01),PROM组Bcl-2阳性平均积分光密度值(0.058±0.020)与正常组(0.050±0.014)比较差异无统计学意义(P>0.05);PROM组bFGF与Bax呈负相关(r=-0.616,P<0.01),正常组bFGF与Bax间无相关性(r=-0.302,P>0.05)。结论绒毛膜羊膜上bFGF的低水平表达及过度细胞凋亡对PROM的发生有重要促进作用。     

子宫内膜癌组织碱性成纤维细胞生长因子表达和微血管密度的临床研究

探讨子宫内膜癌组织碱性成纤维细胞生长因子表达和微血管密度（ＭＶＤ）与临床病理参数和预后的关系。方法采用免疫组织化学技术检测６６例子宫内膜癌组织中ｂＦＧＦ的表达,利用Ⅷ因子相关抗原标记血管内皮细胞,选择能代表肌层浸润深度的切片进行染色。结果子宫内膜癌组织中ｂＦＧＦ有达与病理分级呈明显正相关;子宫内膜癌组织中ＭＶＤ与年龄、病宫内膜癌组织中ｂＦＧＦ表达与病理分级呈明显正相关;子宫内膜癌组织中ＭＶＤ与年龄     

联合检测COX-2及bFGF在卵巢上皮性癌中的表达和意义

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在卵巢上皮性癌中的表达及意义.方法:采用免疫组化方法检测19例正常卵巢组织及50例卵巢上皮性癌中COX-2与bFGF的表达情况.结果:COX-2及bFGF在卵巢上皮性癌中的表达率分别为76%和78%,明显高于正常卵巢组织,两者在不同病理类型的卵巢上皮性癌中表达均无统计学差异,但在肿瘤的不同FIGO分期及分级中表达有统计学差异.COX-2与bFGF在卵巢上皮性癌中的表达有一致性.结论:COX-2及bFGF与卵巢上皮性癌的分化程度密切相关,检测COX-2及bFGF可作为判断卵巢上皮性癌恶性程度的生物学指标.     

GDF-9的结构功能及其与卵巢疾病相关性研究

作为转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,生长分化因子9(GDF-9)被认为是卵泡生长发育和卵巢功能重要的调节因子,其通过多种途径调控优势卵泡的形成与卵母细胞的成熟。多囊卵巢综合征(PCOS)和卵巢功能早衰(POF)是育龄期妇女常见的生殖内分泌疾病,目前尚无有效的治疗方法。综述GDF-9的基因结构、功能、作用机制,及其与PCOS、POF相关性研究的最新进展。     

氯化镉(CdCl_2)对大鼠卵泡颗粒细胞中分拣蛋白1(Sort1)表达的影响

目的:探讨镉(Cd)引起卵泡细胞凋亡与分拣蛋白(Sort1)表达的关系。方法:利用流式细胞仪检测大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;利用免疫组织化学技术检测大鼠卵巢中Sort1的表达部位,在此基础上利用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测CdCl2处理后大鼠卵泡中Sort1表达量的变化。结果:5μmol/L、20μmol/L和50μmol/L 3个浓度的CdCl2染毒处理均可引起大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;Sort1主要表达于大鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞中;3个浓度的CdCl2均可使大鼠卵巢中Sort1的表达量显著增加(P<0.05)。结论:Sort1可能参与Cd诱导的卵泡颗粒细胞的凋亡过程。     

米非司酮抗早孕蜕膜碱性成纤维细胞生长因子变化的研究

目的 :了解米非司酮对人早孕蜕膜碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growthfactor,b FGF )的影响 ,探讨药物流产后子宫出血时间长的可能机理。方法 :取正常、服米非司酮、服米非司酮配伍米索前列醇 (米索 )后的早孕蜕膜各 1 5、1 5和 1 6例 ,应用酶联免疫吸附分析法定量测定蜕膜匀浆中 b FGF的水平 ;同时观察子宫出血的持续时间。结果 :正常早孕蜕膜匀浆中 b FGF水平为 2 6 8.81± 75.34pg/ mg蛋白 ;服米非司酮及服米非司酮配伍米索后蜕膜匀浆中 b FGF水平分别为 373.99± 45.94pg/ mg蛋白和 375.6 8±1 0 9.34pg/ mg蛋白。后两者间差异无显著性 (P>0 .0 5) ,但均较正常早孕蜕膜组升高 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 1 )。子宫出血持续时间与正常早孕蜕膜组 (7.47± 1 .92 d)比 ,服米非司酮 (1 1 .38± 2 .2 5d)及米非司酮配伍米索组 (1 2 .73± 2 .2 2 d)均延长 ,差异有极显著性 (P均 <0 .0 0 1 ) ,后两者间差异无显著性 (P>0 .0 5)。结论 :米非司酮可使早孕蜕膜b FGF水平升高 ,停用米非司酮可引起子宫出血时间延长 ,药物流产后继续服用米非司酮可望缩短子宫出血时间     

双酚A对大鼠雌性子代卵巢发育和血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的:探讨大鼠妊娠期接触双酚A(BPA)对雌性子代卵巢发育和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:实验组于SD母鼠妊娠第7~20日分别灌胃给予0.005 mg/kg、0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg BPA,阴性对照组给予0.5 mg/kg溶剂,阳性对照组给予0.05 mg/kg己烯雌酚,每组8~10只。观察雌性仔鼠的阴道开口时间,分别于出生后30 d、60 d(分别相当于人青春期前和成年期)处死仔鼠,称重卵巢,光学显微镜观察卵巢组织学变化,ELISA检测血清雌、孕激素水平,Western blotting检测卵巢VEGF蛋白的表达。结果:BPA 0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组仔鼠阴道开口时间明显缩短,2.5 mg/kg组青春期前仔鼠卵巢脏器系数明显升高,BPA 0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组卵巢出现多囊样病变,BPA 0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组青春期前仔鼠血清雌、孕激素水平明显升高,BPA 2.5 mg/kg可导致青春期前仔鼠卵巢VEGF蛋白表达明显升高。结论:母体妊娠期接触BPA可导致青春期前雌性仔鼠卵巢出现多囊样病变,但对成年雌性仔鼠卵巢无明显影响。     

新生大鼠卵巢体外培养体系的研究

目的:探讨最适宜于大鼠原始卵泡体外生长发育的培养体系。方法:取出生2d的SD大鼠卵巢,分别在Waymouth和DMEM中培养8d,石蜡制片,HE染色,统计分析各级正常卵泡数;于培养d4、d8观察各级卵泡形态;并用免疫组化方法检测在这两种培养体系的卵巢中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达定位情况。结果:①在Waymouth中,由原始卵泡启动生长成为初级卵泡和次级卵泡的百分率分别是25.51%和6.93%,高于DMEM中的17.06%和3.56%(P<0.01)。②在Waymouth中培养的卵泡形态都较正常,而在DMEM中培养的异常卵泡较多。③PCNA作为原始卵泡生长的指标,也说明卵巢在Waymouth中能良好生长。结论:Waymouth培养体系是研究原始卵泡生长的一个理想的培养体系。     

小鼠子宫内膜着床期碱性成纤维细胞生长因子及其受体免疫组织化学观察

为进一步阐明碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)在胚泡着床中的生物学作用 ,本文采用免疫组织化学的方法检测了 b FGF及其受体在小鼠早期妊娠子宫中的分布状况。结果显示 :b FGF及其受体广泛分布于子宫内膜各种细胞中 ,其分布呈现出明显的阶段性变化。受精后 4～ 5 d,b FGF及其受体在子宫内膜上皮和腺上皮中呈阳性反应。随胚泡植入的进行 ,b FGF及其受体在蜕膜细胞中的表达逐渐增加 ,至受精后 d8达到高峰。结果提示 ,b FGF可能是小鼠胚泡着床过程中的一个重要调节因子     

bFGF和Ets-1在原发性卵巢癌中的表达及意义

目的 :检测碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和E2 6转录因子 (E2 6transformation specific 1,Ets 1)在原发性卵巢癌中的表达 ,为评估卵巢癌的生物学行为提供新的依据。方法 :应用免疫组织化学链霉素抗生物素—过氧化物酶复合法 (streptomycinavidin biotin peroxidasecomplex,SP)检测 32例卵巢癌组织中bFGF和Ets 1的表达 ,观察其与肿瘤组织学分级、临床分期、有无淋巴结转移及相互之间的关系。结果 :卵巢癌组织中bFGF和Ets 1的阳性表达率明显高于癌旁组织 (P <0 .0 0 1) ;bFGF和Ets 1的表达与原发性卵巢癌的FIGO分期和组织学分级密切相关 ;有淋巴结转移患者的bFGF和Ets 1阳性表达率高于无淋巴结转移患者 (P <0 .0 0 5和P <0 .0 1) ;癌组织中bFGF和Ets 1的表达密切相关 ,相关系数rs0 .396 (P <0 .0 5 )。结论 :bFGF和Ets 1的表达与原发性卵巢癌的转移有密切关系 ,检测bFGF和Ets 1的表达可作为了解卵巢癌生物学行为的参考指标