脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、培养与表型及体外抗肿瘤活性测定

经重组白细胞介素2(rIL-2)和胸腺因子D(TFD)培养前后的人脑胶质瘤侵润琳巴细胞(GIL)的表型及抗自体瘤细胞活性变化。(1)GIL可被分离，培养后可增值；(2)新鲜GIL主要为T淋巴细胞，其中CD8^ 细胞多于CD4^ 细胞，随培养时间延长呈相反变化；(3)新鲜GIL活性很弱，培养后很强；(4)TFD可能具有增强rIL-2的激活作用。提示G1L可望作为理想的效应细胞用于脑腔质瘤的治疗。     

人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的 分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法 采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果 肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２．５±３．２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０＾９数量级，此时杀伤活     

原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性

对原发性肝癌的肿瘤浸润淋巴细胞进行了研究。用中性红摄入法测其对靶细胞的杀伤活性，ＡＰＡＡＰ桥联免疫酶标法测ＴＩＬ的亚型。结果表明：经ＩＬ－２体外诱导的ＰＨＣ－ＴＩＬ具有较哟的抗肿瘤活性，且较ＡＫ细胞明显强，ＰＨＣ－ＴＩＬ对自体肿瘤的杀伤活性明显高于对同种异体肿瘤的杀伤活性。     

人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２５±３２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０９数量级，此时杀伤活性亦达到高峰。结论肿瘤浸润淋巴细胞适当条件体外培养扩增，在数量和杀伤活性等方面能够满足临床要求，培养第３、４周是肿瘤浸润淋巴细胞应用的时机。     

胸腺因子D/重组白细胞介素2高效诱导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的增殖及杀伤活性

探讨建立胸腺因子Ｄ（ＴＦＤ）／重组白细胞介素２高效诱导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的可行性 。方法按ＴＦＤ与ｒＩＬ－２的不同组合,分组在体外对ＧＩＬ进行培养,分别用ＭＴＴ法,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法和间接免疫荧光法检测其增殖,杀伤活性及ｒＩＬ－２受体的表达情况。结果ＴＦＤ与ｒＩＬ－２共同诱导ＧＩＬ,与对照组相比,其增殖活性及对自体瘤细胞的杀伤活性显著增强且持续时间更长。结论应用ＨＦＤ／ｒＩＬ－２体外诱导方法     

白介素─2活化的肾癌肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的实验研究

作者对１２例肾癌组织标本肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性进行了研究。结果显示，自１２例肾癌标本中１０例成功地分离到ＴＩＬ，经４周培养平均扩增８５．９２倍，表型分析以Ｔ淋巴细胞为主，随培养时间延长Ｔ４比率逐渐减少，Ｔ８比率逐渐增加，培养后ＴＩＬ抗瘤活性显著增强但对自体肿瘤细胞特异杀伤问题需进一步研究，初步结果表明ＴＩＬ治疗肾癌具有可行性。     

原发性膀胱癌肿瘤浸润淋巴细胞体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨原发性膀胱癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外抗肿瘤作用。方法采用ＬＤＨ释放法。结果该ＴＩＬ对自体肿瘤靶细胞的最高杀伤活性第３０天时为７２．４％,且呈现一定的靶细胞特异性。结论膀胱癌ＴＩＬ在体外经ＩＬ－２培养后对自体肿瘤细胞具有明显的杀伤活性,并显示一定的靶细胞特异性     

高效分离培养肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖能力和杀伤活性，是其临床应用前需解决的关键问题。为此，作者对ＴＩＬ的分离和培养条件进行了探讨，建立了以机械分散法，０．０５％胶原酶和０．００３％ＤＮＡ酶室温消化６小时加冷消化１８小时的酶消化法和７５％与１００％Ｆｉｃｏｌｌ非连续密度梯度离心法相结合的分离纯化ＴＩＬ方法。分离出的ＴＩＬ在体外条件培养基中多数能扩增到１０９以上的应用标准，ＮＫ、ＬＡＫ活性分别可达５８．３±１１．７％和４８．６±１０．６％，其中发挥主要作用的是ＣＤ８Ｔ细胞。因此，本法不失为一种有效的分离培养ＴＩＬ的方法。它的建立为应用ＴＩＬ治疗恶性肿瘤奠定了良好的实验基础。     

应用肿瘤浸润淋巴细胞和IL—2治疗人脑胶质瘤15例报告

应用过继性免疫疗法治疗人类晚期恶性肿瘤的研究，现已取得了长足的进展。从应用淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）进行过继性免疫治疗，到目前已发展至应用自身肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）进行肿瘤的过继性免疫治疗。我们在人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、制备及体内...     

胃肠道肿瘤浸润淋巴细胞的表型与细胞毒活性

作者旨在分析胃肠道肿瘤ＴＩＬ的表型和细胞毒活性及其相关关系。实验发现，新鲜分离的ＴＩＬ杀伤活性较低，ＣＤ３＋、ＣＤ４＋；及ＣＤ８＋细胞比例较低；经ｒＩＬ—２刺激后，ＴＬＬ的细胞毒活性显著增强，尤其对自体瘤细胞显示特异性杀伤活性，各Ｔ细胞亚群比例明显上升。多因素相关分析表明，ＴＩＬ的细胞毒活性与其ＣＤ３＋细胞比例的相关关系具显著性意义（Ｐ＜０．０５），与ＣＤ８＋亚群比例的相关关系亦有显著性意义（Ｐ＜０．０５），而与ＣＤ４＋亚群比例的相关关系无显著意义。证实，ＴＩＬ细胞毒活性与其ＣＤ３＋和ＣＤ８＋细胞的比例密切相关。     

LAK细胞混悬液局部注射治疗脑胶质瘤初步研究

用LAK细胞与白细胞介素2(γIL-2)及胸腺因子D(TFD)混合,于术中、术后注入瘤周和瘤腔,治疗7例脑胶质瘤患者,未见明显的毒性反应。1例CT显示术中残留的肿瘤消失;1例治疗部位未见肿瘤复发,而对照部位复发。该疗法用于临床是安全和具有一定疗效的。     

Lewis肺癌浸润淋巴细胞的进一步纯化及体外抗癌特点的研究

为探索进一步纯化肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的方法及其体外抗瘤作用特点,为临床应用ＴＩＬ治疗肺癌提供依据,用不连续密度梯度离心法从接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内的Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）瘤体中分离提取ＴＩＬ,过夜贴壁,剔除贴壁细胞后,可明显提高ＴＩＬ的纯度。纯化的ＴＩＬ在含１０００Ｕ／ｍｌＩＬ ２的完全培养基中继续培养。免疫荧光表型分析发现,ＴＩＬ中ＣＤ＋４、ＣＤ＋８初为０９１±０１２,培养后为０８３±００７,体外ＴＩＬ对ＮＫ敏感的Ｌ９２９细胞有一定的杀伤作用,效靶比为２００∶１和１００∶１时的杀伤率高于５０∶１（Ｐ＜００５）,表明ＬＬＣ浸润淋巴细胞体外的杀伤活性具有一定的非特异性。     

Separation and Expansion of Tumor Infiltrating Lymphocytes of Digestive System in Vitro and Their Cytotoxicity

ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＥｘｐａｎｓｉｏｎｏｆＴｕｍｏｒＩｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｏｆＤｉｇｅｓｔｉｖｅＳｙｓｔｅｍｉｎＶｉｔｒｏａｎｄＴｈｅｉｒＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙＣＨＥＮＤａｏ－ｄａ（陈道达）；ＴＡＮＱｉｎｇ－ｆｅｎｇ（...     

大鼠原代脑微血管内皮细胞体外分离与培养的实验研究

目的 探讨获取大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的简单、有效方法,为构建体外血肿瘤屏障(BTB)模型提供材料.方法 采集出生3～5 d的Wistar胎鼠大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察;以Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色法鉴定细胞;将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型,并采用免疫组化法和免疫荧光法检测BMEC间紧密连接相关蛋白occludin的表达.结果 体外培养2h时脑微血管段贴壁,12～48 h见圆形生发中心形成,2～3d单层内皮细胞自生发中心长出,4～5 d见较大单层内皮细胞团,5～7 d可见融合成片的内皮细胞单层,外观呈“铺路石”样;第Ⅷ因子免疫组化结果显示“铺路石”样细胞胞质呈棕黄色染色;紧密连接相关蛋白occludin的免疫组化和荧光结果证明共培养的BMEC间表达BTB的特性.结论 本方法能成功地进行大鼠原代BMEC培养,构建大鼠体外BTB模型,进而应用于BTB的生理、生化及药理学研究.     

新生大鼠神经干细胞的体外分离和培养

目的改进大鼠神经干细胞的分离和培养方法。方法用出生1～3d的新生大鼠，取脑用刀片剁碎和吸管吹打的机械分离法代替酶消化法。用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果用机械分离法从新生大鼠脑组织分离神经干细胞的获得率较高，并培养出较多的神经球，还能分化成神经元和星形胶质细胞。结论该方法简便，能得到较多的神经球，细胞获得率也较高。     

兔骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨兔骨髓基质干细胞（MSC）体外分离培养及鉴定。方法自兔髂骨抽取骨髓,采用密度梯度离心法分离纯化出MSC,并增殖。观察MSC的生长情况及形态学特点,流式细胞仪检测第3代MSC表面抗原的表达情况。结果体外培养的兔MSC贴壁生长,呈长梭形,可增殖形成克隆;MSC阳性表达CD29,CD90,但CD34,CD45呈阴性。结论利用密度梯度离心法获取的MSC具有大量增殖的能力,表达CD29,CD90,不表达CD34,CD45。     

大鼠骨髓间质干细胞体外分离培养及生物学特性研究

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)体外分离培养方法，并对大鼠MSCs的生物学特性进行研究。方法：分离5～8周龄的大鼠股骨骨髓进行体外培养，取5代以后的MSCs观察形态特征，绘制生长曲线，进行细胞化学染色，并用流式细胞仪检测其表面标志和进行细胞周期分析。结果：大鼠MSCs细胞形态呈长梭形或多边形，细胞生长曲线呈S形，群体倍增时间为30h，细胞化学染色显示碱性磷酸酶(ALP)、过氧化物酶(POX)、苏丹黑B(SB)阴性，而*醋酸萘酚醋酶(α-NAE)与糖原(PAS)阳性，流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90表达阳性，而CD34、CD38、CD45表达阴性；细胞周期分析显示，G0／G1期：79．48％，G2／M期：6．10％，S期：14．42％。结论：本方法分离纯化出的是MSCs，其在体外具有生长稳定，增殖较快的特点，是组织工程研究中良好的细胞来源，也是转基因研究优良的载体细胞。