阿托伐他汀对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响

目的探讨阿托伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞系侵袭的影响及其可能作用机制。方法应用细胞培养技术培养人胆管癌QBC939细胞,经不同浓度的ATV处理后,以Matrigel侵袭实验和半定量RT-PCR检测ATV对QBC939细胞内Rho C mRNA表达的影响情况。结果 Matrigel侵袭实验显示,经10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L干预48 h后的QBC939细胞,随着浓度的增加,其体外侵袭能力明显减弱(P0.01);半定量RT-PCR测定显示,ATV作用48 h后,QBC939细胞中Rho C的表达改变并不明显。结论 ATV可减弱人胆管癌QBC939细胞体外侵袭能力。     

洛伐他汀联合KRN633对胆管癌细胞株QBC939生物学行为的影响

目的研究洛伐他汀（Lovastatin）联合血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（KRN633）对人胆管癌细胞株QBC939生长、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同药物浓度作用24h、48h、72h后细胞增殖情况;倒置显微镜下观察细胞形态学改变;流式细胞技术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验观察细胞迁移能力改变;RT-PCR法检测药物作用前后髓样细胞白血病-1（Mcl-1）、丝氨酸／苏氨酸蛋自激酶B（Akt）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果洛伐他汀、KRN633能明显抑制QBC939细胞的增殖（P〈0．01）并呈浓度-时间依赖性,洛伐他汀联合KRN633具有协同抑制效应（F=8．85,P〈0．05）。药物作用下可观察到QBC939细胞呈现凋亡形态学改变;流式细胞学结果显示细胞凋亡率明显增加[（37．5±1．92）％、（32．14±1．30）％、（11．23±1．26）％,F=250．04,P〈0．01]。联合用药组细胞24h、48h平均迁移速率明显减慢（分别为1．21±0．68和1．52±0．19,P〈0．05）。生长增殖、凋亡、迁移相关基因Mcl-1、Akt、VEGFmRNA的表达明显低于对照组（P〈0．05）。结论洛伐他汀可抑制胆管癌细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,与KRN633联合应用具有协同抑制效应。     

Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌QBC939细胞增殖侵袭的影响

目的观察选择性Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌细胞株QBC939增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胆管癌QBC939细胞,加入不同浓度的NS-398培养后,采用MTT比色法观察不同浓度NS-398作用不同时间对QBC939细胞的增殖抑制情况;采用Transwell小室法检测不同浓度NS-398作用后QBC939细胞的侵袭能力。结果 NS-398对QBC939细胞的增殖有抑制作用,并呈时间及浓度依赖性(P均<0.01),最大抑制浓度为100μmol/L。加入NS-398培养36 h后,随着药物浓度的增加,QBC939细胞体外侵袭能力明显减弱(P<0.01)。结论NS-398可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,并减弱其体外侵袭能力。     

miR-20b-5p靶向调控Cyclin D1对NSCLC细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)靶向调控细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响及其作用机制.方法 体外培养NSCLC细胞系A549、H1975、PC-9和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p相对表达量,选择...     

野生型p53基因对肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究人野生型p53基因对肠癌细胞系SW480增殖及凋亡的影响。方法阳离子脂质体介导转染人野生型p53基因至SW480细胞系,利用MTT检测该基因对SW480细胞增殖的影响;利用Western blot检测CyclinD1及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,转染人野生型p53基因后的SW480细胞的增殖能力受到抑制;Cy-clinD1蛋白水平下调,Bcl-2、Bax表达呈负相关趋势。结论野生型p53基因在一定程度上可诱导肿瘤细胞凋亡。     

转染野生型p53基因对苯并芘诱导的肺癌细胞生物学特性及其原发性耐药的作用

目的　探讨苯并芘的代谢产物反式二羟环氧苯并芘 (BPDE)诱发的p53基因突变,在肺癌发生发展中的作用,及外源性转染野生型p53基因对肺癌细胞原发性耐药的影响。方法　以携带野生型p53基因的缺陷型腺病毒穿梭载体(pshuttle-cmv-p53cDNA),感染由BPDE诱发p53基因突变的成瘤支气管上皮细胞株,用空载体pshuttle cmv为对照组。通过软琼脂集落形成试验、细胞生长曲线实验、细胞凋亡和体外化疗药物敏感性分析等探讨野生型p53基因的生物学效应。结果　外源野生型p53基因转染的肺癌细胞的集落数为(5.4±0.8)个、转染空载体组为 (22.5±2.5)个、未转染组为(24 5±3 5)个;p53基因转染组细胞克隆形成率为 0.5%、未转染组为 2.5%、转染空载体组为2.3%。p53基因转染组的集落形成率与未转染组和转染空载体组比较差异均具有统计学意义 (U值分别为 3.651和 3.642,P均 <0.01 );而未转染组与转染空载体组比较差异无统计学意义 (U=1.414, P>0.05)。外源野生型p53基因转染肺癌细胞可诱导其凋亡;同时逆转细胞对表柔比星的耐药。结论　p53基因突变在肺癌的发生、发展及耐药性方面可能具有重要的作用。野生型p53基因替代结合抗肿瘤药物对于提高肿瘤细胞的药物敏感性,克服耐药方面可能有一定的帮助。     

p21WAF1/CIP1 基因转染对胃癌细胞生物学活性的影响

目的探讨p21^WAF1／CIP1基因(p21基因)对人胃癌细胞系(BGC)生物学活性的影响。方法应用分子克隆技术构建p21^WAF1／CIP1基因真核表达载体，然后用脂质体法将其导入到人胃癌细胞BGC中，经G418筛选获得可稳定表达p21^WAF1／CIP1的人胃癌细胞克隆，用中性红摄入法观察细胞生长速率，流式细胞仪(FcM)检测细胞周期变化。结果p21导入胃癌BGC细胞后，肿瘤细胞增值能力明显受到抑制，并出现细胞周期G1期阻滞。结论p21基因具有抑制胃癌细胞增殖的作用，可作为胃癌基因治疗的靶基因．     

NS398对人肝门部胆管癌QBC939细胞增殖及前列腺素E2的影响

目的观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肝门部胆管癌(hilar cholangiocarcinoma,HCC)QBC939细胞增殖的影响;检测经不同浓度NS398作用后HCC细胞培养液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的含量变化。方法体外培养人HCC QBC939细胞,加入不同浓度的NS398培养后,采用MTT法观察NS398对QBC939细胞增殖的影响;采用ELISA检测NS398作用后QBC939细胞的PGE2含量。结果 NS398对QBC939细胞的增殖有抑制作用,并在0~100μmol/L的浓度范围内呈剂量、时间依赖性(P0.05)。随着NS398浓度及时间的增加,QBC939细胞的PGE2含量明显降低(P0.01)。结论NS398可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,并显著降低癌细胞中PGE2的含量。     

肝癌细胞p53、p16及细胞周期蛋白D1表达的时间生物学对比

目的对比肝癌细胞中p53、p16和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达强度的时段特征.方法按年周期3个时段采集肝癌组织标本,每1个时段20例,均为肝细胞型肝癌及Edmondson-Steinet分级控制在Ⅱ～Ⅲ级内,用免疫组织化学S-P法进行p53、p16和Cyclin D1蛋白表达实验,表达强度按等级数据用秩和检验方法进行时段对比.结果p16表达出现时段差异有显著性(H=10.334,P＜0.05),即4～7月份为表达高峰期.结论肝细胞癌变及其生长的基因调控的时间生物学机制,p16可能起到重要作用.     

Effect of mutant p27kip1 gene on human cholangiocarcinoma cell line, QBC939

AIM:To investigate the effects of exogenously mutated p27kip1 (p27) on proliferation and apoptosis of human cholangiocarcinoma cell line,QBC939 in vivo.METHODS:Adenviral vectors were used to transfect mutated p27 cDNA into human QBC939 cell line.Expression of p27 was detected by RT-PCR.Western blot.Cell growth,morphological change,cell cycle,apoptosis and cloning formation were determined by MTT assay and flow cytometry.RESULTS:The expression of p27 protein and mRNA was increased significantly in QBC939 cell line transfected with Ad-p27mt.The transfer of Adp27mt could significantly inhibit the growth of QBC939cells,decrease the cloning formation rate and induce apoptosis,p27 over expression caused cell cycle arrest at G0/G1 phase 72 h after infection with Adp27mt.CONCLUSION:p27 may cause cell cycle arrest at G0/G1 phase and subsequently lead to apoptosis.Recombinant adenovirus expressing mutant p27 may be potentially useful in gene therapy for cholangiocarcinoma.     

WWOX基因转染对胆管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:探讨WWOX基因转染胆管癌细胞株QBC939后对其增殖、凋亡与侵袭性的影响.方法:用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞,建立稳定表达WWOX基因的细胞株.将其分为以下3组:QBC939组,QBC939/con组和QBC939/WWOX组.荧光定量RT-PCR和Western blot法检测...     

Effect of mutant p27(kipl) gene on human cholangiocarcinoma cell line, QBC(939)

AIM：To investigate the effects of exogenously mutated p27^kip1 （p27） on proliferation and apoptosis of human cholangiocarcinoma cell line, QBC939 in vivo.METHODS： Adenviral vectors were used to transfect mutated p27 cDNA into human QBC939 cell line. Expression of p27 was detected by RT-PCR. Western blot. Cell growth, morphological change, cell cycle, apoptosis and cloning formation were determined by MTT assay and flow cytometry.RESULTS： The expression of p27 protein and mRNA was increased signifi cantly in QBC939 cell line transfected with Ad-p27mt. The transfer of Ad-p27mt could signifi cantly inhibit the growth of QBC939 cells, decrease the cloning formation rate and induce apoptosis. p27 over expression caused cell cycle arrest at G0/G1 phase 72 h after infection with Ad-p27mt.CONCLUSION： p27 may cause cell cycle arrest at G0/G1 phase and subsequently lead to apoptosis. Recombinant adenovirus expressing mutant p27 may be potentially useful in gene therapy for cholangiocarcinoma.     

DNA切除修复基因XPD在肝癌中遗传易感性的荟萃分析

目的 探讨DNA切除修复基因XPD基因多态性在中国人群原发性肝癌中的遗传易感性. 方法 检索中外数据库,获得有关XPD基因多态性与肝癌发病风险的病例对照研究资料进行Meta分析,得到合并的优势比(OR)和95％可信区间(95％CI). 结果 共纳入XPD基因多态位点相关文献6篇,累计病例3424例,对照3636例;在XPD基因多态位点751和312位点等位基因的OR (95％CI)分别为1.25 (0.70～ 2.24)和0.85 (0.58～ 1.25);在XPD基因多态位点751,与野生基因型Lys/Lys相比,(Lys/Gln+Gln/Gln)合并的OR(95％CI)为1.31(0.71 ～ 2.42);在XPD基因多态位点312位点,与野生基因型Asp/Asp相比,(Asp/Asn+Asn/Asn)合并的OR值(95％CI)为1.19 (0.73～ 1.95). 结论 XPD多态性遗传位点751和312不是中国人群原发性肝癌发病的风险因素.     

FHIT基因转染对胆管癌细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨FHIT基因对胆管癌细胞的增殖与侵袭的影响.方法:将含FHIT基因的重组真核表达质粒转染入胆管癌细胞株QBC939, 采用MTT实验检测转染前后细胞增殖活性, Transwell小室侵袭实验检测肿瘤细胞侵袭力.结果:转染后QBC939细胞的MTT吸光度明显下降(P <0.05), 并且转移至小室滤膜下的细胞数明显减少(48±7 vs 109±14, 104±12,均P <0.01).结论:FHIT基因能抑制胆管癌细胞株QBC939的增殖并降低其侵袭力.     

野生型p53对肝癌细胞POLD1基因表达及细胞恶性表型的影响

目的:探讨野生型p53对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和细胞恶性表型影响的一种可能机制,方法:设计并构建p53特异性小干扰shRNA绿色荧光真核表达质粒(p53-siRNA)和表达EGFP-p53融合蛋白的p53绿色荧光真核增强表达质粒(pEGFP-p53),通过脂质体Lipofection-2000介导转染,将...     

人p53/荧光蛋白融合基因在高转移人肝癌细胞中的表达与定位

目的 观察Ｐ５３基因在肝癌细胞中的正常表达及定位情况。方法 根据野生型Ｐ５３基因的编码顺序,ＰＣＲ主增突变的ＷＴ－Ｐ５３基因,使其３＇端的终止密友ＴＧＡ突变为ＴＧＡ突变为ＴＧＧ,用基因重组技术将共与绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｌｎ,ＧＦＰ）融合,通过真核表达质粒－脂质体介导,导入人高转移肝癌细胞系ＭＨＣＣ９７（ＰＣＲ检测有Ｐ５３基因突变）中、用荧光显微镜观察Ｐ５３     

反义细胞周期素D1基因对肝癌细胞株HepG2的作用

目的通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素D1(cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞cyclin D1蛋白表达和细胞增殖的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为研究对象,通过转染可表达cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA)的质粒后,观察cyclin D1反义cDNA对HepG2细胞cyclin D1基因表达及体外增殖活性的影响。结果四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性显示转染表达反义cyclin D1的质粒后, HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右最强;逆转录聚合酶链反应检测显示cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;免疫组织化学检测结果显示cyclin D1蛋白表达明显降低; 流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞。结论cyclin D1反义cDNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖。利用cyclin D1反义cDNA进行细胞周期调控对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。