与肿瘤转移抑制基因nm23高度同源的nm23—H3b基因的克隆和序…

ｎｍ２３是一种有效的肿瘤转移抑制基因，目前已发现的两种人类ｎｍ２３（Ｈ１和Ｈ２）的氨基酸肽具有８８％的同源性。我们采用ＰＣＲ技术从人肝基因组ＤＮＡ中扩增ｎｍ２３序列，经克隆筛选得到５’端３７５ｂｐ克隆，命名为ｎｍ２３－Ｈ３ｂ。序列分析发现，ｎｍ２３－Ｈ３ｂ在４０ｂｐ￣７０ｂｐ之间与原序列完全不同，其他序列与ｎｍ２３－Ｈ１有８６％的同源性，与ｎｍ２３－Ｈ２有９０％的同源性。ＢｇｌＩＩ消化人肝基因组Ｄ     

NM23基因研究进展

肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３于１９８８年由Ｓｔｅｅｇ等发现［１］，他们运用ｃＤＮＡ文库差示杂交（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）等技术，在对小鼠黑色素瘤Ｋ１７３５不同转移能力细胞株的研究中检测到ｎｍ２３。进一步研究表明，人类基因组中存在两种ｎｍ２３基因，即ｎｍ２３Ｈ１和ｎｍ２３Ｈ２，定位于１７ｑ２１．３～２２，相隔４ｋｂ，均包含５个外显子，其编码的蛋白质均由１５２个氨基酸组成，且氨基酸序列具有８８％的同源性，分子量分别为１７１４３Ｄａ和１７２９４Ｄａ。Ｇｉｌｌｅｓ等研究发现…     

庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区部分序列的一级结构及其变异

测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂     

乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ　ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ　Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。     

抗转移抑制基因nm23—H1在单结节型肝癌中的表达

研究ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与单结型肝癌的预后关系，组织切片应用免疫组化ＡＢＣ法染色。５９．４％为阳性染色，４０．６％为阴性染色。两组肿瘤大小、包膜形成，侵及包膜、浆膜、肝内血管和胆管，肝内转移，细胞分化程度没有显著性差异。术后１年复发率阴性染色组（５３．８％）明显高于阳性染色组（５．３％）；３年以上生存率阳性染色组（６３．２％）明显高于阴性染色组（２３．１％）。结果表明：ｎｍ２３—Ｈ１的基因表达，对单结节型肝癌的恶性程度和预后有指示作用     

甲肝病毒减毒活疫苗（H2株）的cDNA克隆及序列分析

本文通过ｍＲＮＡ提取，逆转灵（ＲＴ）－聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得甲肝病毒减毒活疫苗株（Ｈ２减毒株）的ｃＤＮＡ片段，再经分子克隆，从而得到贯穿甲肝病毒（ＨＡＶ）全基因组的１０个相互重叠基因片段的ｃＤＮＡ克隆。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析，得到了长度为７４７３ｂｐ的甲肝病毒减毒活疫苗株（Ｈ２减毒株）ｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明，该株与野毒株ＨＭ１７５的核苷酸和氨基酸同源性分别为９９．４％和     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病人血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性。对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－３）基因组５＇端非翻译区（５＇ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％、８８．７％、８７．１％。本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染。ＨＧＶ高度保守区５＇ＵＴＲ的分子克隆与核苷酸序列的测定对开展ＨＧＶ感染的基因诊断具有重要意义。     

PCR——两段法扩增喉癌nm23—H1基因

引物是决定ＰＣＲ结果的关键。本实验中引物１、２虽有２６个碱基，但由于其５端有６个碱基为限制性内切酶的部分识别序列，所以实际上只有２０个碱基与原始模板互补配对。采用标准的ＰＣＲ方法不能产生理想的结果。经采用ＰＣＲ－两段法从喉癌组织中扩增到４７７ｂｐ的ＤＮＡ片段－ｎｍ２３－ＨＩ基因，对于应用ＰＣＲ技术扩增人类基因组基因做了有益的尝试，扩增的ｎｍ２３－Ｈ１基因为进一步做变异分析打下基础。     

七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增ＨＥＶ开放读码框架２（ＯＲＦ２）ｃＤＮＡ，并用ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０ＤＮＡ序列分析试剂盒，经双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止直接测序法测定ＲＴ－ｎＰＣＲ扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京５个城市４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶＯＲＦ２ｃＤＮＡ，对其中７株进行了核苷酸序列分析，表明它们与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）的同源性为７８．９％～８０．２％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）流行株（Ｅｐ）的同源性为９３．１％～９５．１％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）散发株（Ｓｐ）的同源性为９２．３％～９４．２％；与ＨＥＶ中国新疆流行株ＣＨ１．１同源性为９６．５％～９８．９％；７株散发性ＨＥＶ间核苷酸序列的同源性为９５．７％～１００％。结论该７株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＨＥＶＣＨ１．１核苷酸序列的同源性较高，均属同一亚型。     

黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定

以自己合成的黄曲霉毒素Ｂ＿１一人血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ＿１单克隆抗体（ＡＦＴＢ＿１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为ＩＢ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱发产生含特异性抗体的腹水。用间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ鉴定ＭｃＡｂ的反应特异性，使ＭｃＡｂ与固相黄曲霉毒素Ｂ＿１一牛血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＢＳＡ）结合产生５０％抑制所需的ＡＦＴＢ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２浓度依次为：１Ｂ５４．０、３６．９、２３．３、４０３．３ｎｇ／ｍｌ，２Ｆ１２．４、２．６、２．８、４。７ｎｇ／ｍｌ。     

nm23—H1和CD44V6在肺鳞癌组织中的表达及预后意义的探讨

目的 探讨ｎｍ２３－Ｈ１和ＣＤ４４Ｖ６在肺鳞癌组织中表达及预后意义。方法 应用免疫组化Ｓ－Ｐ法,对９６例肺鳞癌组织进行ｎｍ２３－Ｈ１和ＣＤ４４Ｖ６检测并对其中６６位患者进行了５年随访。结果 ９６例肺鳞癌的ｎｍ２３－Ｈ１、ＣＤ４４Ｖ６阳性表达率分别为４６．９％和４２．７％。ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达同病理分期和淋巴结转移呈负相关,其预后佳。ＣＤ４４Ｖ６表达与肺鳞癌大小、病理分期和淋巴结转移呈相关,其预后     

COX-2和nm23在子宫内膜癌组织中的表达及其相关性

目的观察子宫内膜癌组织中环氧化酶-2（COX-2）和nm23的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学染色方法，检测46例子宫内膜癌组织中COX-2与nm23的表达情况，分析其相互关系。结果46例子宫内膜癌组织中COX-2表达阳性率45．7％（21／46）,nm23表达阳性率71．7％（33／46）。在33例nm23阳性的病例中，COX-2表达阳性11例（32，3％），阴性22例（67．7％）。在13例nm23表达阴性的病例中，COX-2表达阳性10例（76．9％），阴性3例（23．1％），统计学处理两者具有相关性（P〈0.05）。结论COX-2在子宫内膜癌组织中表达，且与nm23呈负相关，提示COX-2表达与子宫内膜癌的转移有关，COX-2表达增高和nm23表达的降低可作为临床预测子宫内膜癌淋巴结转移的重要参考指标。     

nm23蛋白在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的：观察ｎｍ２３基因在膀胱癌中的表达并探讨其临床意义。方法：对４７例膀胱癌标本进行Ｓ－Ｐ免疫组化染色,分析ｎｍ２３蛋白表达与膀胱癌多种指标和预后的关系。结果：ｎｍ２３蛋白在膀胱癌组织及非癌粘膜中均有表达,定位于细胞浆。７２．３４％的膀胱癌组织ｎｍ２３蛋白染色阳性,阳性率显著高于非癌粘膜（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３蛋白高度表达与膀胱癌细胞的低度分化及局部浸润有关,与肿瘤复发及肿瘤大小无关。结论：在膀胱癌中ｎｍ２３基因可能不是转移抑制基因,相反却促进膀胱癌的发生和发展,ｎｍ２３蛋白对于判断膀胱癌细胞的恶性程度、肿瘤进展以及预后有价值。     

人胰腺癌组织nm23基因表达

探讨ｎｍ２３基因表达与人胰腺癌临床生物不行之间的关系。方法；免疫组织化学与斑点杂 交法检测人胰腺癌组织ｎｍ２３蛋白与ｎｍ２３ｍＲＮＡ表达。结果；胰腺癌组织ｎｍ２３蛋白及ｎｍ２３ｍＲＮＡ表达较正常胰腺组织明显升高，而与慢性胰腺炎组织无明显差别；胰腺癌组织ｎｍ２３ｍＲＮＡ表达与ｎｍ２３蛋白表达呈正相关。     

nm23/NDPK在胃癌的表达及临床意义

目的：探讨肿瘤转移抑制相关基因表达水平与胃癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法分析nm23／NDPK在胃癌的表达及其与多种指标的关系。结果：nm3／NDPK表达强度随肿瘤临床分期和病理分级的增高而增高。高分化肿瘤nm3／NDPK的表达明显低于中、低分化肿瘤，有淋巴结转移者nm63／NDPK的表达显著低于未转移者。结论：nm3／NDPK可能在胃癌的发生及转移中起不同的调节作用，可作为评价胃癌恶性程度、肿瘤进展及预后的指标。     

nm23基因产物/NDPK在膀胱癌的表达及临床意义

目的 :探讨肿瘤转移抑制相关基因表达水平与膀胱癌生物学行为的关系。方法 :用免疫组化LSAB法分析nm2 3/NDPK在膀胱癌的表达及其与多种指标的关系。结果 :nm2 3/NDPK表达强度随肿瘤临床分期和病理分级的增高而增高。高分化肿瘤nm2 3/NDPK表达明显低于中低分化肿瘤 ,有淋巴结转移者nm2 3/NDPK表达显著低于未转移者。结论 :nm2 3/NDPK可能在膀胱癌发生及转移中起不同调节作用 ,可作为评价膀胱癌恶性程度、肿瘤进展及预后的指标。     

nm23—H1表达产物在恶性黑素瘤中的表达

目的　研究 nm2 3- H1蛋白产物在恶性黑色素瘤的表达特点及其与转移的关系。方法　应用免疫组化 S- P法检测 5 1例恶性黑色素瘤和 32例黑色素细胞痣中 nm2 3- H1蛋白产物。结果　 nm2 3- H1蛋白的阳性表达率在恶性黑素瘤和黑色素细胞痣分别为 39.2 %和 2 1 .1 % ,差别无显著性 ( P >0 .0 5 ) ,恶性黑素瘤转移组明显低于无转移组 ( P <0 .0 5 )。结论　nm2 3- H1基因表达在抑制恶性黑色素瘤转移过程中起一定作用 ,检测 nm2 3- H1蛋白的表达可作为临床预测转移的有用指标     

nm23-H1表达产物在恶性黑素瘤中的表达

目的研究nm23-H1蛋白产物在恶性黑色素瘤的表达特点及其与转移的关系.方法应用免疫组化S-P法检测51例恶性黑色素瘤和32例黑色素细胞痣中nm23-H1蛋白产物.结果 nm23-H1蛋白的阳性表达率在恶性黑素瘤和黑色素细胞痣分别为39.2%和21.1%,差别无显著性(P>0.05),恶性黑素瘤转移组明显低于无转移组(P<0.05).结论 nm23-H1基因表达在抑制恶性黑色素瘤转移过程中起一定作用,检测nm23-H1蛋白的表达可作为临床预测转移的有用指标.     

nm23在乳腺癌中的表达及其预后意义

应用免疫组织化学ＳＰ方法，研究６４例乳腺癌手术标本中ｎｍ２３的表达及其预后意义。结果显示：原发灶癌组织中ｎｍ２３高表达的乳腺癌，区域淋巴结转移发生率明显低于低表达者（Ｐ＜０．０１）；组织学高分化的乳腺癌或肿瘤最大径≤２ｃｍ者，原发灶ｎｍ２３表达水平较高（均Ｐ＜０．０５）；随着临床病理分期的进展，乳腺癌原发灶中ｎｍ２３表达水平逐渐下降（Ｐ＜０．０１）；高表达的患者术后３年、５年生存率分别６９．４％和５８．７％，明显高于低表达者（４２．９％和２５．０％），Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１。以上结果表明，ｎｍ２３在乳腺癌淋巴结转移过程中发挥负性调控作用，并与乳腺癌的组织学分化有关。     

nm23／NDPK在细支气管肺泡癌中的表达及其与淋巴道转移的关系

应用免疫组化ＩＳＡＢ法检测细支气管肺泡癌（ＢＡＣ）中ｎｍ２３／ＮＤＰＫ表达与肺癌发生及淋巴道转移的关系。结果表明：ｎｍ２３／ＮＤＰＫ在５０例ＢＡＣ中的表达（３４／５０,７８％）显著高于癌旁产质（０／２４,０）（Ｐ〈０．０１）。