胎儿和出生后机体皮肤内p38MAPK及其MAPKKs基因表达变化的比较性研究

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)及其上游信号分子MAPKKs(mkk3和mkk6)基因在不同胎龄的胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中表达的变化及其可能的生物学意义.方法用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织的总RNA,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这3种基因在不同组织中的表达变化规律.结果p38MAPK,mkk3和mkk6基因在不同发育阶段的皮肤组织中都有表达.在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,这3种基因表达较强,随着胎儿的生长和发育,皮肤组织内这3种基因表达逐渐减弱.在出生后机体的皮肤细胞中,p38MAPK,mkk3和mkk6基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的39.6%,63.5%和54.5%,基因表达明显减弱(P＜0.01).结论p38MAPK,mkk3和mkk6基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达,显示细胞外信号引起的p38MAPK信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要.在早期妊娠胎儿皮肤中p38MAPK及其上游信号分子MAPKKs基因的高表达可能是胎儿皮肤组织细胞快速增殖,皮肤创面无瘢痕愈合的机制之一,但深层次机制还需进一步研究.     

胎儿和出生后机体皮肤内TGF-β1,TGF-β3及其受体基因表达变化的比较性研究

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1),转化生长因子-β3(TGF-β3)及其Ⅰ-型受体(TBRⅠ)和Ⅱ-型受体(TBRⅡ)在不同胎龄胎儿的皮肤和出生后机体皮肤组织中表达变化特征及其可能的生物学意义.方法:用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织的总RNA后,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律.结果:TGF-β1,TBRⅠ和TBRⅡ基因在不同妊娠时期的胎儿皮肤和出生后机体皮肤组织中都有表达.在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,这3种基因表达较弱,随着胎龄的增加,皮肤组织内这3种基因表达逐渐增强.在出生后机体的皮肤组织中,这些基因的表达量分别为早期妊娠胎儿皮肤的1.3倍、1.3倍和1.2倍,基因表达显著升高(P＜0.05).TGF-β3基因表达变化规律恰恰相反,在早期妊娠胎儿的皮肤组织中,该基因表达较强,而在出生后机体的皮肤组织中,该基因表达产物的密度值为0.158±0.095,与早期妊娠胎儿皮肤相比显著下降(P＜0.01).结论:TGF-β1,TGF-β3及其受体基因在不同发育阶段人皮肤组织内都有表达,显示这些细胞因子与其受体结合后引起的信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要.在早期妊娠胎儿皮肤中TGF-β1,TBRⅠ和TBRⅡ基因低表达,TGF-β3基因的高表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕修复密切相关.     

胎儿和出生后机体皮肤内表皮生长因子和两种原癌基因表达变化及其与胎儿无瘢愈合的关系

胎儿皮肤创面愈合后一般不形成瘢痕,而成人创面愈合常有瘢修复,这一变化的机制目前尚不清楚.在研究中人们发现胎儿无瘢痕愈合不受胎儿所处的无菌、湿润和低氧环境的影响,而可能与伤口处的细胞因子浓度变化密切相关.表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)作为主要的修复生长因子,对创面愈合的多个环节都产生作用.EGFR是一种跨膜酪氨酸激酶受体,与EGF特异性结合后,通过MAPK信号通路,上调c-fos和c-myc等转录因子的基因表达后,诱导细胞核内特异性基因转录,刺激组织修复细胞增殖,趋化炎性细胞,表皮细胞和成纤维细胞向伤口聚集,加速创面愈合.目前,关于EGF,EGFR及其下游信号分子在人不同发育阶段的皮肤组织中的基因表达变化特征还缺乏研究,对这一规律的揭示,将有利于深入了解EGF调节创面愈合的机制和早期妊娠胎儿皮肤创面无瘢痕愈合的部分奥秘.用病理学技术检测不同发育阶段皮肤的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤和6例出生后机体皮肤组织的总RNA,分离mRNA,用R-PCR方法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律.结果显示,在早期妊娠胎儿的皮肤中,EGF,EGFR,c-fos和c-myc基因表达较弱,随着胎儿的生长和发育,皮肤组织内这三种基因表达逐渐增强,在出生后机体的皮肤组织中,EGF,EGFR,c-fos和c-myc基因表达进一步升高,基因表达量分别为晚期妊娠胎儿皮肤的1.24倍,1.11倍,1.28倍和1.63倍.EGF、EGFR及其下游信号分子c-fos和c-myc基因在不同发育阶段的人皮肤组织内都有表达,显示EGF与其受体结合后引起的信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要.这4种基因在早期妊娠胎儿皮肤中低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕修复密切相关.     

不同胎龄胎儿皮肤和增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶5及其mapkk基因表达的变化

目的探讨细胞外信号调节激酶5(extracellular-signal regulated protein kinase 5,erk5)及其上游信号分子mapkk(mek5)在不同胎龄的胎儿皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达变化规律及其可能的生物学意义.方法用病理学技术检测不同发育时期的皮肤和增生性瘢痕的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤、6例少儿皮肤、16例不同发生时期的增生性瘢痕(4个月-11年)和8例正常皮肤组织的总RNA后,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这2种基因在不同组织中的表达变化特征.结果erk5和mek5基因在不同发育阶段的皮肤和增生性瘢痕中都有表达.在早期妊娠胎儿的皮肤中,这2种基因表达较强,随着胎龄的增加,基因表达水平逐渐降低,在少儿皮肤组织中,这两种基因的转录本含量明显减少(P<0.05).在正常皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中,mek5基因表达水平相近,相互间差异不显著,而erk5基因在正常皮肤中的表达水平较低,在增殖期和成熟期增生性瘢痕中表达水平明显增强(P<0.01).结论erk5与mek5基因在不同发育时期的皮肤组织内都有表达,显示erk5介导的信号通路可能对皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复十分重要.在早期妊娠胎儿皮肤中erk5和mek5基因的高表达可能是胎儿皮肤组织细胞快速增殖,创面无瘢痕愈合的机制之一,而增生性瘢痕发生和形成也可能与erks基因表达增强有关.     

不同胎龄胎儿皮肤和增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶5及MAPKK基因表达的变化

目的　探讨细胞外信号调节激酶 5 (extracellular signalregulatedproteinkinase 5 ,ERK5 )及其上游信号分子MAPKK(MEK5 )在不同胎龄的胎儿皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达变化规律。方法　用病理学技术检测不同发育时期的皮肤和增生性瘢痕的结构特征后 ,提取 18例不同胎龄 (13～ 32周 )的胎儿皮肤、6例少儿皮肤、16例不同发生时期的增生性瘢痕 (4个月～ 11年 )和 8例正常皮肤组织的总RNA后 ,用RT PCR方法检测ERK5和MEK5在不同组织中的表达变化特征。结果　随着胎龄的增加 ,胎儿皮肤中ERK5和MEK5基因表达水平逐渐降低 ;而在少儿皮肤中 ,基因的转录本含量明显减少 (P <0 0 5 )。在正常皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中 ,MEK5基因表达水平相近 ,而ERK5基因在正常皮肤中的表达水平较低 ,在增殖期和成熟期瘢痕中表达水平明显增强 (P <0 0 1)。结论　在早期妊娠胎儿皮肤中ERK5和MEK5基因的高表达可能是胎儿皮肤创面无瘢痕愈合的机制之一 ,而增生性瘢痕发生和形成也可能与这两种基因表达增强有关。     

p38MAPK信号通路及其在心肌缺血再灌注损伤中的作用

心肌缺血再灌注时氧自由基和细胞因子的大量释放激活p38MAPK，然后p38MAPK把信息传到核内，引起一些早期基因的表达，如c-fos、c-jun、NF-kB，但它们的激活是保护作用还是恶化作用尚无定论。p38MAPK是否参与缺血预处理(IPC)的保护作用也无一致意见。造成这些分歧的原因主要在于实验模型和动物种类差别。     

复方桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合及通过p38 MAPK信号通路调节糖尿病足大鼠皮肤组织AQP3表达

探讨复方桐叶烧伤油通过p38信号通路调节激酶（MAPK）信号通路对糖尿病足大鼠 皮肤组织水通道蛋白3表达的影响。方法 选取60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病足 溃疡组（B组）、复方桐叶烧伤油组（C组）、复方桐叶烧伤油+S B 2 0 3 5 8 0组（D组），各15只。 B组、C组、D组45只大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病后构建糖尿病足溃疡模型；比较各组研究指 标。结果 C组创面愈合率显著高于B组，D组创面愈合率显著低于C组（P ＜0.001）；B组、C组、D组 组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显著高于A组，C组组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显 著低于B组，D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于C组（P ＜0.001）；B组、D组组织中 APQ3、p38蛋白表达量均低于A组（P ＜0.001）；C组组织中APQ3表达量低于A组（P ＜0.001），而 p38蛋白表达量显著高于B组，D组APQ3、p38蛋白表达量均极显著低于C组（P ＜0.001）。结论 复方 桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合，通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化上调糖尿病足大鼠皮肤组 织中APQ3表达。     

胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达

目的　探讨不同胎龄的胎儿和少儿皮肤中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及其两种受体 (bek和flg)基因表达的变化。 方法　提取 18例不同胎龄 ( 13～ 3 2周 )的胎儿皮肤和 6例少儿皮肤的总RNA后 ,分离mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测这 3种基因在不同组织中的表达。结果　在早期妊娠胎儿的皮肤中 ,bFGF ,flg和bek基因表达较强 ,随着胎儿的生长和发育 ,皮肤组织内这 3种基因表达逐渐降低 ,在少儿皮肤中 3种基因的表达量分别为晚期妊娠胎儿皮肤的 62 .5 % ,5 9.5 %和 5 2 .9% ,基因表达显著降低 ( P <0 .0 5 )。结论　bFGF及其受体基因可能在皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复中起重要作用。这 3种基因在胎儿皮肤中表达水平较高可能与胎儿皮肤细胞增殖较快 ,皮肤创面愈合迅速有关。     

p38 MAPK在LPS诱导内皮细胞表达ICAM-1中的作用

目的 研究p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间粘附分子-1(ICAM—1)中的作用。方法 脐静脉内皮细胞培养后分为两组：(1)刺激组,设不同时相点分别用LPS刺激内皮细胞;(2)预处理组,在LPS刺激前2h,用SB203580预处理内皮细胞。观察ICAM—1蛋白和mRNA表达的变化,检测内皮细胞p38MAPK活性变化。结果 LPS刺激后,内皮细胞表面ICAM—1分子在8～36h显增加,胞浆中mRNA在2h即有显增加;LPS刺激HUVEC后15min,p38MAPK活性即有升高,30～60min达高峰。p38抑制剂SB203580可显抑制LPS的诱导作用。结论 LPS可能通过激活p38MAPK信号转导通路,调节HUVEC的ICAM—1基因和蛋白表达。     

胎儿皮肤附件形成与成纤维细胞生长因子-10和Bek基因表达的关系

目的探讨在不同发育阶段胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子-10(FGF-10)及其受体Bek基因表达特征及其与皮肤附件形成的关系。方法用病理学技术检测不同发育阶段胎儿皮肤的结构特征，并提取不同胎龄(12～32周)胎儿皮肤的总RNA，用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FGF-10、Bek基因在不同胎龄标本中的表达变化。结果在早期发育的胎儿皮肤中。FGF-10和Bek基因表达较弱，随着胎龄的增长和发育的进展，特别在皮肤附件诱导形成阶段。两种基因表达逐渐增强，在胎儿发育后期，两种基因表达开始减弱。结论FGF-10与其受体Bek基因的特异表达方式及两者结合后引起的信号激活对皮肤附件的诱导形成和形态发生及皮肤生理功能的维持具有重要意义。     

用基因芯片研究不同皮肤组织创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达

目的 探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达.方法 采用包含有14000个靶基因cDNA克隆的基因芯片技术,对正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族的表达进行对比观察.结果 正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族呈现差异表达,其中以PRX-2、HOXB13、HOXB6和HOXB7的差异表达为显著.结论 同源异形框基因的差异表达表明正常成人和胎儿皮肤的发育生物学状态存在差异,可能是胎儿和成人皮肤不同创面愈合方式的根本原因.     

The expression characteristics and biological significance of bFGF, EGF,TGF-β isoforms and their receptors in skins from fetus and adult

To observe the localization and expression characteristics of alpha-smooth muscle actin (AS-MA), basic fibroblast growth factor (bFGF), epidermal growth factor (EGF), transforming growth factor-β(TGF-β) isoforms, and their receptors in fetal and adult skins in order to explore their potential biological significance.Methods: The expression and the distribution of ASMA, bFGF, EGF, TGF-βisoforms, and their receptors were detected with immunohistochemistry and histopathology methods in 36 skin specimens. Among them, 30 specimens belonged to fetuses at different developmental stages and 6 were from adults. Results:Positive immunohistochemical signals of ASMA, bFGF, EGF, and TGF-βisoforms and their receptors could be found in fetal and postnatal skins.These factors were mainly distributed in the cytoplasm and extracellular matrix of epidermal cells, endothelial cells,hair follicle epithelial cells and some fibroblasts. Receptors of these factors were mostly located in the cellular membrane of the above mentioned cells, while protein particles of ASMA could be observed in myofibroblasts and sweat gland cells. Along with ascent in gestational age, the positive cellular rates of bFGF, EGF, TGF-βisoforms, their receptors, and ASMA in skin were elevated progressively. In skins specimens obtained from fetuses of late-trimester (29-31 week gestation) and adult, the positive rates of these proteins were significantly raised in comparison with skin of fetuses of early-trimester. Conclusion: The endogenous bFGF, EGF, three TGF-βisoforms and their receptors might be involved in the development of the skin in embryonic stage and in the cutaneous structure and function,and also wound healing in adult stage. The relative lack of these factors and their receptors might be one reason why the wound of fetus heal by regeneration rather than by scarring.     

Chemerin/ChemR23 promotes high glucose-induced IL-6 and TNF-α expressions in glomerular endothelial cells via p38 MAPK

Objective To observe the role and related mechanism of chemerin and its receptor ChemR23 in glomerular endothelial cells (GEnCs) stimulated by high glucose. Methods Mouse GEnCs were cultured and divided into control group, 20.0 mmol/L high glucose group, 40.0 mmol/L high glucose group and mannitol control group. Then the expressions of interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in cell culture supernatant as well as the expressions of intracellular protein and mRNA of chemerin, ChemR23, IL-6 and TNF-α were detected. Lentiviral transfection targeting ChemR23 was applied before high glucose- or Chemerin-stimulated, and expressions of supernatant and intracellular mRNA of IL-6 and TNF-α were measured. Meanwhile whether p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) pathway was activated by high glucose was detected. The specific inhibitor of p38 MAPK was added prior to high glucose-stimulated, then supernatant and intracellular mRNA expressions of IL-6 and TNF-α was detected. The supernatant expressions of IL-6 and TNF-α were measured by ELISA. The intracellular protein expression and p38 MAPK phosphorylation activity were detected by Western blotting. The mRNA expression was detected by real time PCR. Results Compared with those in the control group, in high glucose groups the expressions of IL-6, TNF-α and chemerin were significantly increased (all P＜0.05), however, the expressions of ChemR23 did not change (all P＞0.05); the supernatant and mRNA expressions of IL-6 and TNF-α were also elevated in the chemerin group (all P＜0.05). Lentivirus baring shRNA could efficiently suppress ChemR23 expression, and the Chemerin- or high glucose-induced expressions of IL-6 and TNF-α were reduced (all P＜0.05). Also it could significantly reduce the expression of phosphorylated-p38 MAPK (p-p38 MAPK) induced by high glucose (P＜0.05), as high glucose group had higher p-p38 MAPK than control group (P＜0.05). While the high glucose-elevated expressions of IL-6 and TNF-α were significantly attenuated by p38 MAPK inhibitor (all P＜0.05). Conclusions High glucose stimulation can induce the expression of chemerin in GEnCs. By binding to ChemR23, chemerin activates p38 MAPK signaling pathway, and then promotes the expressions of IL-6 and TNF-α. These inflammatory cytokines aggravate inflammation of GEnCs.     

外胚叶发育不全基因信号途径与汗腺发育及修复的关系

目的 探讨外胚叶发育不全（ectodysplasin，EDA）基因信号途径与汗腺发育及修复的关系。方法通过对近期国内外相关文献的回顾，了解EDA基因的生物学特性、信号传导途径和促进汗腺发育的分子机制。结果大量实验证实EDA基因在胎儿发育早期参与了胚胎皮肤汗腺的形态和功能发生。结论EDA基因对皮肤汗腺的发生和结构的形成以及皮肤生理功能的维持具有重要意义，可为实现基因调控皮肤受损汗腺的完美修复找到一条新路。     

增生性瘢痕内应激活化蛋白激酶及其游信号分子基因表达的变化

目的　探讨增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤中应激活化蛋白激酶 (SAPK)及其上游信号分子MAPKs(MKK4和 MKK7)基因表达的变化。　方法　提取 8例增生性瘢痕和自身对照正常处皮肤组织的总 RNA后 ,分离纯化 m RNA,用 RT- PCR方法检测 SAPK,MKK4和 MKK7基因在不同组织中的表达变化规律。　结果　增生性瘢痕中 ,MKK7和 SAPK基因表达较弱 ,自身对照皮肤组织中 ,这两种基因 PCR结果的灰度比分别为增生性瘢痕的 1.5倍和 2 .6倍 ,基因表达量明显升高 (P<0 .0 1) ,而 MKK4在这两种不同类型组织中的表达量无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　增生性瘢痕中 MKK7和 SAPK基因表达降低引起细胞凋亡减少 ,可能是瘢痕内成纤维细胞大量增殖 ,增生性瘢痕形成的机制之一。