利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠.方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定.结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠.结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠.     

天麻简单重复序列反应体系的初步研究

目的: 探讨兰科药用植物天麻(Gastrodia elata Bl.)简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)PCR循环中退火温度及反应体系中各主要成分对反应的影响.方法: 根据Genebank登录的天麻微卫星序列设计引物, 并对反应体系中各影响因素进行优化.结果: 所设计引物可扩增出预期的条带,并构建了清晰稳定的SSR指纹图谱,最终建立的25 μl反应体系为:Taq DNA酶1U、Mg2 1.2～1.6 mmol/L、引物各0.4～0.6 μmol/L、模板DNA 40～60 mg/L和dNTPs 0.20 mmol/L.结论: 首次初步确立了适合天麻SSR的最佳退火温度及反应体系中各主要成分的最佳浓度,为天麻的SSR分子标记及遗传多态性分析奠定了一定基础.     

ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用

目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。     

明党参栽培过程中遗传变异的RAPD分析

目的：从DNA水平上分析野生型明党参和栽培得到的明党参植株之间的遗传变异。方法：通过RAPD分子标记方法,筛选了80个随机引物,其中有52条随机引物能够扩增出条带,从中选取7个多态性强、重复性好的引物进行扩增。结果：实验共检测到31个位点,13个多态性位点,多态位点比率为41.9%,平均每个引物扩增4~5个条带,多态性条带2个。聚类分析显示野生明党参和栽培明党参之间遗传间距达0.277。结论：研究结果表明RAPD分子标记方法可以鉴定野生和栽培明党参,结果也表明明党参在栽培过程中出现了较强的遗传变异。     

热休克因子1基因剔除小鼠的遗传特征及基因型分析

为观察热休克因子 1基金剔除小鼠的遗传特征和基因型 ,摸索获得较多纯合子的繁殖技术 ,建立 3组繁殖组合方式 :1野生型♂×野生型♀组 ;2杂合子♂×杂合子♀组 ;3纯合子♂×杂合子♀组 ,并比较各组子代的基因型。结果表明 ,杂合子♂×杂合子♀组和纯合子♂×杂合子♀组 ,获得纯合子子代分别为 1 0 .8%和 2 2 .0 %。纯合子♂×杂合子♀组每胎产仔数 ( 4 .3只 /胎 )较野生型♂×野生型♀组 ( 6.5只 /胎 )及杂合子♂×杂合子♀组 ( 6.4只 /胎 )少。通过 HSF1剔除鼠的不同繁殖方法的比较及遗传特性观察 ,揭示了获得较多纯合子 HSF1剔除小鼠的繁殖技术。     

贵州省同一产地野生和栽培天麻的RAPD分析

目的: 对贵州省同一产地野生和栽培天麻的遗传多态性进行分析.方法: 采用随机扩增多态性DNA标记技术.结果: 从30个随机引物中筛选到6个多态性强、重复性好的引物.该6个引物的扩增结果表明,贵州省同一产地野生和栽培天麻的指纹图谱有明显差异,差异系数为40%～60%,而栽培天麻之间的差异并不显著.结论: 本实验为天麻的分子生物学鉴定及天麻种质资源合理利用及科学的栽培育种提供了一定的科学依据.     

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

天麻微卫星DNA分子标记与天麻素含量的关系

目的：探讨天麻遗传变异与其品质的关系,为优良种质的选育提供科学途径。方法：采用CTAB法提取天麻DNA,进行PCR扩增,用微卫星DNA分子技术（SSR）标记DNA;用高效液相色谱法检测不同种质天麻的天麻素含量,分析两者之间的关系。结果：出现A条带类型的样品天麻素含量较高,7EKYC、9EDF;24GBJ、22GZJ;1FDJ、2FLL;4VDF、6EKYW;18GWAC、8EWD,分别聚到一起,遗传距离较小。结论：特异引物扩增位点与天麻素含量有关,高天麻素含量与SSR高分子量条带有关,其关系有待进一步研究。     

高效液相色谱法测定天麻中L-焦谷氨酸的含量

应用ＨＰＬＣ法对没来源和加工方法不同的天麻Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａ Ｂｌ,中Ｌ－焦谷氨酸成分进行了定量分析。结果显示Ｌ－焦谷氨酸在天麻中的含量因产地、栽培方法和加工方法的不同而有差异。野生比家种、鲜品比干品的Ｌ－焦谷氨酸含量高。     

八产地天麻药材质量评价研究

目的:对不同产地天麻药材的质量进行客观评价。方法:按照《中华人民共和国药典》方法对天麻药材进行了水分、灰分、浸出物等测定。结果:不同产地的天麻药材在水分、灰分、浸出物等含量有一定差异。结论:通过对其质量评价研究初步弄清了不同产地天麻药材质量的差异。     

强力镇痫益智宁冲剂中天麻和钩藤的薄层色谱鉴别

目的：建立强力癫痫益智宁冲剂的质量控制方法。方法：用薄层色谱法对天麻、钩藤进行鉴别。结果：用薄层色谱法可检出天麻、钩藤。结论：建立的质量控制方法简便可行,重现性好,可以作为强力癫痫益智宁冲剂的质量控制标准。     

川芎天麻伍用镇痛、镇静作用的实验研究

[目的]探索川芎天麻镇痛、镇静作用的最佳配伍比例。[方法]按析因设计的方法设置16个不同的配伍比例。采用热板法与醋酸扭体法来观察各配伍比例对小鼠的镇痛作用;采用旷场实验与悬尾实验来观察各配伍比例对大鼠的镇静作用。[结果]川芎∶天麻为1∶3(3 g/kg)可以显著提高小鼠在热板实验中的痛阈值(P0.01);川芎∶天麻为1∶4(3 g/kg)可以显著减少小鼠腹腔注射醋酸溶液后的扭体次数(P0.01);川芎∶天麻为1∶4(2 g/kg)可以显著降低大鼠在旷场实验仪中的自主运动活性(P0.01);川芎∶天麻为0∶4(2 g/kg)可以显著缩短大鼠在悬尾实验中的不动时间(P0.01)。[结论]川芎、天麻配伍可以对小鼠和大鼠产生镇痛、镇静作用,其中川芎、天麻最佳配伍比例为1∶4。     

利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究

目的研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分天麻素。方法采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,通过紫外扫描法、PCR扩增筛选转化植株,对转化植株进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)蛋白分析,通过TLC法检测天麻素。结果(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异,并且在转基因马铃薯中有一条与GAFP相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层色谱法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成分天麻素。结论采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

NLRP3基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖及鉴定NLRP3基因敲除（NLRP3^-/-）小鼠。方法 将引进的NLRP3基因敲除杂合子小鼠,单独进行饲养及配种繁殖,繁殖后其子代出现3种基因型：野生型、杂合子型及纯合子型,提取每只小鼠的基因组DNA,用PCR和T7E1酶切方法进行鉴定,将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。结果 NLRP3杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得了NLRP3基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养、繁殖及鉴定方法是从NLRP3基因敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

含天麻中成药的应用与分析

天麻应用前景广泛，市场开发产品众多，其化学成分主要有酚类、有机酸类、甾醇类等，具有镇静镇痛、 降压抗血栓、抗癫痫的作用。天麻单药的活性成分的研究较多，但含天麻中成药应用的研究相对较少。该文通过 对 2015 版《中国药典》中所有含天麻的中成药的组成情况、应用形式、功能主治注意事项等进行归纳整理，对其 高频中药进行关联规则分析，挖掘天麻与其他中药的配伍方式，为开发含天麻新药提供指导，为临床使用含天麻 中成药提供参考。