肿瘤坏死因子-α诱导对膀胱癌细胞株NF-κB信号通路分子表达及细胞增殖水平的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导对膀胱癌细胞株细胞核因子-κB(NF-κB)通路分子表达及细胞增殖水平的影响,为临床提供参考,以提高膀胱癌的治疗水平.方法 选取膀胱癌细胞株T24、5637作为研究对象,根据处理的情况分为对照组和TNF-α处理组,其中对照组未采用TNF-α处理,TNF-α组经TNF-α处理,比较TNF-α处理对不同膀胱癌细胞株RelA、RelB基因的表达情况及膀胱癌细胞增殖活性的影响.结果 TNF-α处理T24细胞株后,TNF-α处理组的RelA、RelB基因表达均高于对照组(P<0.05);TNF-α处理5637细胞株后,RelA基因表达水平在作用3 h后明显上升(P<0.05),但是RelB基因表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).对照组、TNF-α处理组T24和5367细胞株的存活率相比,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 TNF-α可诱导膀胱癌细胞NF-κB信号通路RelA、RelB基因的表达,对于细胞增殖的活性尽管有一定的影响,但是不明显.     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

miR-421靶向PDCD4促进前列腺癌DU145细胞增殖的实验研究

目的研究MicroRNA-421(miR-421)促进前列腺癌DU145细胞增殖的作用及潜在的分子机制。方法培养前列腺癌DU145细胞,分为对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-421组、miR-421+pcDNA组、miR-421+pcDNA-细胞程序性死亡基因4(PDCD4),miR-NC组转染miR-NC、miR-421组转染miR-421、miR-421+pcDNA组转染miR-421及pcDNA质粒、miR-421+pcDNA-PDCD4组转染miR-421及pcDNA-PDCD4质粒,MTS法测定细胞增殖活力,荧光定量PCR测定PDCD4的mRNA表达水平,western blot测定PDCD4的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-421与PDCD4的靶向结合。结果与对照组及miR-NC组比较,miR-421组的增殖活力增加,PDCD4的表达水平及野生型PDCD4双荧光素酶报告基因的荧光活力均降低(P<0.05);与miR-421+pcDNA组比较,miR-421+pcDNAPDCD4组的增殖活力降低,PDCD4的表达水平增加(P<0.05)。结论 miR-421对前列腺癌DU145细胞的增殖具有促进作用,靶向抑制PDCD4是miR-421发挥这一作用的潜在分子机制。     

MiR-451a对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的研究miR-451a在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-451a是否通过下调LMP7来影响雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(DU145)细胞的增殖和侵袭能力。方法收集37例前列腺癌组织标本及40例良性前列腺增生组织标本,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组组织中与前列腺癌相关的miR-451a、miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137、LMP7mRNA的表达情况,Pearson相关分析检验miR-451a表达量与LMP7的相关性;免疫印迹试验(Western blot)分别检测两组LMP7的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-451a mimic和miR-NC至离体培养的DU145细胞中,随后,Western blot检测DU145细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶试验验证LMP7是miR-451a的靶基因;紧接着通过转染过表达LMP7的质粒至DU145细胞,检测DU145细胞中相应蛋白的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于前列腺增生组织,miR-451a在前列腺癌组织中的表达降低(P0.01);而miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137的表达在两组之间无显著差异;前列腺癌组织中LMP7mRNA的表达增加(P0.01);MiR-451a与LMP7 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.4708,P0.01)。在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-451a mimic后,DU145细胞中VEGF、E-cadherin、LMP7的表达减少(P0.05),DU145细胞的迁移侵袭能力下降(P0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-451a能够降低LMP7-3'-UTR质粒的荧光素活性(P0.05);转染过表达LMP7质粒后,相比于miR-451+空质粒组,DU145细胞中VEGF和E-cadherin表达增加(P0.05),细胞的迁移侵袭能力得到部分恢复(P0.01)。结论在前列腺癌组织中,miR-451a低表达;MiR-451a通过下调LMP7抑制DU145细胞的迁移和侵袭。     

miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究

目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0h、3h、6h、9h和12h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA,观察在6hmiR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化。结果新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5p mimics作用后IKBKE3'UTR活性下降,将IKBKE3'UTR进行突变后,IKBKE3'UTR活性较野生型增加;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKE siRNA后,在6h TNF-α和IL-6的表达量实验组均较对照组明显增加。结论 THP-1细胞中miR-155-5p可通过靶向降解IKBKE信使RNA(mRNA)促进TNF-α和IL-6的表达增加,表明其在THP-1细胞抗新生隐球菌中发挥着促炎作用,可作为将来隐球菌性脑膜炎的潜在治疗靶点。     

反义RelA下调白血病耐药细胞株HL—60／E6bcl—XLmRNA

为了探讨NF-κB对白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x基因转录的影响,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素(6 ng/ml)作用于HL-60细胞的方法,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL-60/E6.然后用RT-PCR方法检测5 μmol/L硫代修饰反义RelA作用于HL-60/E6细胞后bcl-x基因mRNA水平的变化.同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL-60/E6细胞中NF-κB-RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估.结果表明,在HL-60/E6细胞中RelA表达于胞核,NF-κB处于持续活化状态.脂质体介导的寡核苷酸(ODN)的转染效率明显高于裸ODN组,在4,6和12小时时有显著差异(P＜0.01).反义RelA作用于HL-60/E6细胞后,bcl-xL mRNA水平下降呈时间依赖性,8小时抑制达到最高峰,15小时后逐渐恢复,而对照组bcl-xL mRNA水平变化不明显.分析结果认为,NF-κB对bcl-x有转录调节作用,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF-κB对bcl-xL基因的转录激活,进而推测NF-κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子.     

miR-30c对前列腺癌的功能调控作用

目的研究mi R-30c在前列腺癌中的功能调控作用,获得其调控前列腺癌侵袭及转移的可靠证据,进而揭示其在前列腺癌中可能的调控机制。方法从mi RNA芯片检测结果中获得前列腺癌相关的差异表达的mi R-30c分子,进一步通过mi R-30c过表达质粒转染前列腺癌细胞,运用Transwell检测细胞侵袭变化,划痕实验检测细胞转移变化。结果 LNCa P/DU145转染质粒后,mi R-30c的表达水平显著高于阴性对照组(LNCa P:倍数=3.87,P<0.001;Du145:倍数=4.32,P<0.001)。Transwell侵袭实验表明,mi R-30c转染组的LNCa P/DU145细胞侵袭的数量显著低于对照组(LNCa P:67 vs.120个/视野,P<0.001;DU145:130 vs.220个/视野,P<0.001)。划痕实验结果发现mi R-30c转染后,LNCa P/DU145细胞实验组转移的数量显著低于对照组(LNCa P:241 vs.520个/视野,P<0.001;DU145:490 vs.660个/视野,P<0.001)。结论 mi R-30c可抑制前列腺癌细胞的侵袭及转移,这说明mi R-30c在前列腺中确实起着抑癌的作用,其可能通过KRAS-MAPK信号通路抑制前列腺癌的侵袭及转移。     

IL-8/miR-182正反馈调控轴在非小细胞肺癌中的作用机制研究

目的 探讨白细胞介素-8(IL-8)和微小RNA-182(miR-182)在非小细胞肺癌（NSCLC）中的相互作用,及促进NSCLC细胞增殖和侵袭的机制。方法 选取NSCLC患者40例（NSCLC组）,收集其术前血清样本和术中切除的癌组织及癌旁组织样本。以40名体检健康者作为正常对照组。检测血清IL-8水平和癌组织、癌旁组织miR-182表达量。采用细胞学相关实验分析miR-182和IL-8对人NSCLC细胞株A549增殖和侵袭的影响、IL-8对miR-182的调节作用,以及miR-182影响IL-8表达的信号通路。结果 NSCLC组血清IL-8水平显著高于正常对照组（P<0.01）。NSCLC患者癌组织miR-182相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.01）。IL-8通过miR-182促进A549细胞的增殖和侵袭。IL-8通过信号转导及转录激活因子3(STAT3)上调miR-182的表达。miR-182通过调节NF-κB信号通路上调IL-8的表达。结论 NSCLC患者IL-8和miR-182均呈高表达,且通过IL-8/STAT3/miR-182/NF-κB/IL-8正反馈...     

非经典性NF-KB活性与TRAF3在霍奇金淋巴瘤细胞中的作用机制

目的 探讨非经典性NF-κB信号通路及肿瘤坏死因子受体相关分子(TRAF)3在B细胞源性霍奇金淋巴瘤(HL)细胞中的作用,并试图对非经典性NF-κB信号通路在HL中异常活化作出合理解释.方法 采用凝胶迁移电泳实验测定L428和KM-H2 HL细胞的细胞核中NF-κB的活性,并用TransAMTM ELISA方法定量分析L428细胞的细胞核中各κB DNA-蛋白质复合物的活性成分.采用Western blot法检测细胞质中各NF-κB家族成员以及TRAF3蛋白的表达情况;瞬时转染TRAF3表达载体检测其对NF-κB表达的影响.结果 L428和KM-H2细胞中NF-κB活性持续性存在.经典性以及非经典性NF-κB活性在L428细胞的细胞核中均呈持续性高表达.L428和KM-H2细胞中出现p52蛋白积聚和RelB表达增加.另外,L428细胞和KM-H2细胞中TRAF3的表达均非常弱,而过表达TRAF3后抑制了p100蛋白质加工和p52蛋白积聚.结论 B细胞源性HL细胞中经典性和非经典性NF-κB活性呈持续性活化;TRAF3的低表达很可能是非经典性NF-κB活化的原因之一.     

microRNA 20a通过核因子-κB信号通路影响肺炎模型幼鼠炎症水平的机制研究

目的 探讨microRNA 20a通过核因子-κB信号通路影响肺炎模型幼鼠炎症反应和T细胞亚群分型的机制。方法 30只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为两组:肺炎组和健康组,每组各15只。肺炎模型组采用刺破鼻黏膜后,从鼻腔滴入50μl链球菌液法制备小鼠链球菌性肺炎模型;健康组刺破鼻黏膜后,从鼻腔滴入50μl生理盐水。将肺炎细胞分成4组:对照组、脂多糖(LSP)组、LPS+miR-20a组、LSP+miR-20a+PDTC组,分别用模拟对照物、脂多糖、mir-20a模拟物转染细胞,过表达miR-20A的细胞在37℃时用NF-κB抑制剂PDTC(100μg/L)处理30 min。用逆转录定量聚合酶链反应检测miR-20a的血清表达水平。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测临床血清和组织细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)α和C-反应蛋白(CRP)的浓度。用Western blotting法检测核因子(NF)-κBα(iκbα)和磷酸化p-NF-κB的蛋白表达水平。分析NF-κB抑制剂PDTC对miR-20a诱导的细胞炎症反应的影响。结果 肺炎组miR-20a的表达水平510. 75±50. 21,高于健康组202. 36±39. 58(P <0. 05)。肺炎组血清IL-6、TNF-α、CRP水平均高于健康组,差异有统计学意义(F <0. 05)。与对照组相比,LPS组的炎症因子IL-6、TNF-α和CRP浓度增加(F <0. 05),IκBα和p-NF-κB蛋白表达水平升高(P <0. 05)。与LPS组相比,LPS+miR-20a组细胞IL-6、TNF-α和CRP的表达水平,IκBα和p-NF-κB蛋白的表达水进一步升高(P <0. 05)。与LPS+miR-20a组比较,NF-κB抑制剂PDTC对炎症因子表达有抑制作用(P <0. 05)。结论 miR-20a在肺炎小鼠模型中表达上调,miR-20a的过表达可能通过激活NF-κB信号通路促进炎症反应。     

戊四氮及NF-κB圈套结构对神经元样细胞GAP-43表达的影响

目的:观测戊四氮(PTZ)及NF-κB圈套寡核苷酸结构对神经元样PC12细胞生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法:应用免疫印迹检测PTZ干预前后神经元样PC12细胞GAP-43的表达情况,进而运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转入神经元样PC12细胞中,应用激光共聚焦成像技术(CLSM)检测转染前后NF-κB的活性变化,免疫印迹观察转染前后GAP-43的变化情况。结果:①PTZ干预后神经元样PC12细胞GAP-43的表达显著增高;②CLSM检测显示转染NF-κB圈套寡核苷酸后神经元样PC12细胞中NF-κB活性明显下降,但GAP-43表达水平未降低。结论:PTZ可促进GAP-43的表达,NF-κB对GAP-43的表达不具有调控作用。     

miR-21和NF-κB在前列腺癌中的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中的miR-21、核因子κB(NF-κB)中的表达水平变化及其临床意义。方法回顾性收集120例前列腺癌组织及40例前列腺增生组织,收治时间2016年1月至2017年3月。采用免疫组化技术检测两组标本中的miR-21、NF-κB蛋白表达水平,并探讨二者与前列腺癌患者的临床病理学关系。结果前列腺癌组组织中miR-21、NF-κB蛋白阳性表达率分别为71.67%、62.50%,明显高于前列腺增生组组织中的的miR-21、NF-κB蛋白阳性表达率20.00%、15.00%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05);前列腺癌组织中miR-21蛋白阳性表达于患者的Gleason评分、淋巴结转移、临床分期具有显著的相关性(P0.05);前列腺癌组织中NF-κB蛋白阳性表达于患者的淋巴结转移、临床分期具有显著的相关性(P0.05)。结论前列腺癌组织中miR-21、NF-κB蛋白阳性表达率增高,并且与肿瘤的进展密切相关。     

miR-145调控靶基因SENP1对前列腺癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 分析微小RNA-145调控靶基因小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1对前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法 选取对数生长期的前列腺癌细胞株PC-3细胞,分为对照组(仅细胞培养)、miR-145组(转染微小RNA-145)、SENP1组(转染小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1)、miR-145+SENP1组(转染微小RNA-145及小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1),转染48 h后,双荧光素酶报告基因检测微小RNA-145与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1的相互作用,采用水溶性四氮唑8法测定4组细胞增殖抑制率,经细胞黏附实验测定其黏附能力,Transwell检测细胞侵袭与迁移能力,逆转录-聚合酶链式反应与Western-blot法检测小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1表达。结果 双荧光素酶报告基因检测显示,微小RNA-145可明显抑制小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1-野生型的荧光素酶活性(P<0.05),而对小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1-突变型的荧光素酶活性无明显抑制作用(P>0.05)。miR-145组细胞增殖抑制率显著高于SENP1组、miR-145+SENP1组(P<0.0...     

RNF187在前列腺癌细胞中的表达及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨环指蛋白187(RNF187)在前列腺癌细胞中的表达及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析前列腺癌组织和正常组织间RNF187的表达差异，体外培养正常前列腺上皮细胞系RWPE-1和人前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2、DU145、PC-3，用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定RWPE-1、LNCaP、C4-2、DU145、PC-3中RNF187 mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法测定RNF187蛋白表达水平。转染RNF187-siRNA1、RNF187-siRNA2至DU145、PC-3,RT-qPCR测定RNF187 mRNA相对表达量、CCK-8法测定细胞活性，5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法测定细胞增殖能力，Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力，蛋白免疫印迹法检测RNF187和上皮-间充质转化（EMT）标志蛋白及基质金属蛋白酶（MMP-9）的蛋白表达水平。结果 TCGA和GEO数据集中，前列腺癌组织中RNF187表达量均高于正常前列腺组织，Gleason评分及分期较高者的表达量...     

雷公藤内酯醇对前列腺癌PC-3细胞中的白细胞介素8的表达调节作用

目的探讨雷公藤内酯醇对前列腺癌PC-3细胞中白细胞介素8(IL-8)信号分子的表达影响。方法采用ELISA方法检测雷公藤内酯醇(10、30、50 nmol/L)处理后PC-3细胞分泌至培养基中的IL-8蛋白水平变化;采用qRTPCR方法检测雷公藤内酯醇(10、30、50 nmol/L)作用下IL-8的mRNA水平变化;构建IL-8的启动子荧光素酶报告基因,并转染至前列腺癌细胞中,使用双荧光素酶报告基因检测系统检测IL-8启动子活性在雷公藤内酯醇作用下的变化情况。采用Wester Blotting方法检测雷公藤内酯醇作用后细胞内的IL-8的两个受体(CXCR1和CXCR2)的表达变化情况。结果雷公藤内酯醇处理后,PC-3细胞分泌至培养基中的IL-8的蛋白量有显著下调,但IL-8的mRNA水平及其启动子活性均未发生改变。对IL-8的受体的蛋白水平检测结果表明,CXCR1和CXCR2受影响不显著。结论雷公藤内酯醇通过下调IL-8的分泌来下调IL-8信号的活性,该作用是对IL-8的转录后的蛋白水平的调控机制。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

慢性盆腔炎模型大鼠中miR-29 及炎症信号通路分子的表达水平及其作用机制研究

目的 探究微小核糖核酸(micro RNA,miR)-29 对大鼠慢性盆腔炎模型的作用并探究其作用机制。方法 将80 只SPF 级SD 大鼠随机分为四组,分别为对照组(n=20)、模型组(n=20)、阴性对照组(n=20)和试验组(n=20)。模型组、阴性对照组和试验组通过机械损伤及接种混合菌构建大鼠慢性盆腔炎模型,阴性对照组和试验组造模后通过尾静脉注射5nmol 阴性对照(negative control, NC)antagomiR 和miR-29 antagomiR。HE 染色检测大鼠子宫组织病理特性;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠外周血炎症相关指标:白细胞介素(interleukin,IL)-1β,白细胞介素(IL)-6,白细胞介素(IL)-8 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α 水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测子宫组织miR-29,Toll 样受体4(Toll-like receptors,TLR)4,核因子κB(nuclear factor,NF-κB)及NK-κB 抑制蛋白α(IκB α)表达水平;WesternBlot 检测子宫组织TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达水平。结果 HE 染色结果表明,与对照组相比,模型组、阴性对照组和试验组大鼠出现明显慢性盆腔炎症状,试验组子宫组织损伤显著缓解;ELISA 结果表明:模型组大鼠外周血IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平显著高于对照组,与模型组和阴性对照组相比,试验组炎症因子IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 释放显著降低,差异有统计学意义(t=3.021 ～ 6.878,均P ＜ 0.05);qPCR 结果表明,与对照组相比,模型组miR-29,TLR4,NF-κB 和IκB α 的mRNA 表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组miR-29 ,TLR4,NF-κB 和IκB α的 mRNA 表达显著降低,差异有统计学意义(t=3.917 ～ 8.095,均P ＜ 0.05)。Western Blot 结果表明:与对照组相比,模型组TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组TLR4,NF-κB 和IκBα 蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(t=2.987 ～ 8.045,均P ＜ 0.05)。结论 慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织中miR-29 显著高表达,下调miR-29 具有对大鼠子宫的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子释放及TLR4/NF-κB 信号通路的调控相关。     

miR-135a靶向调控STAT6对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的分析微小RNA-135a(miR-135a)靶向调控信号传导和转录激活因子6(STAT6)对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法选取DU145前列腺癌细胞株,细胞培养后分为空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组,构建miR-135a慢病毒载体,空白组加入常规细胞培养液、生理盐水做空白处理,miR-135a阴性对照组加入miR-135aNC、Lipofectamine 2000试剂行无义序列转染,miR-135a转染组加Hsa-miR-135a、Lipofectamine 2000试剂行细胞转染。鉴定miR-135a转染效率及STAT6mRNA表达量,分析对细胞生物学行为、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax蛋白的影响。结果与空白组相比,miR-135a阴性对照组miR-135a表达量降低,miR-135a转染组miR-135a表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05),说明miR-135a转染成功。空白组、miR-135a阴性对照组、miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、增殖、凋亡率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、Bcl-2、Bax蛋白表达比较,差异具有统计学意义(P0.05);与miR-135a阴性对照组相比,miR-135a转染组STAT6mRNA表达量、细胞增殖率、侵袭、迁移个数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,细胞凋亡率、TIMP-2、Bax蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miR-135a对STAT6表达有一定的调控作用,通过调控MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达抑制前列腺癌细胞迁移和侵袭,通过调控Bcl-2、Bax相关蛋白表达抑制前列腺癌细胞增殖,促进其凋亡,为临床前列腺癌靶向治疗提供理论依据。     

lncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究长的非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二〇一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近的健康组织,并分别作为病理观察组和对照组。将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12分为对照组(PC12细胞系)、过表达组(lncRNA HOTAIR过表达转染)和敲低组(shRNA lncRNA HOTAIR转染)。RT-PCR检测lncRNA HOTAIR的mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]水平;蛋白印迹分析JAK2/STAT3、核因子κB(NF-κB)相关通路蛋白的表达。结果病理观察组较健康对照组lncRNA HOTAIR mRNA表达升高(P<0.05)。转染24 h和48 h后,3组细胞增殖率均显著高于转染12 h(P<0.05);对照组和过表达组细胞增殖能力均随转染时间显著增强(P<0.05);转染24 h和48 h后,过表达组细胞增殖数目较对照组显著升高(P<0.05),敲低组细胞增殖数目较HOTAIR过表达组显著降低(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),与过表达组相比,敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过上调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平,激活了JAK2/STAT3通路,调节肾上腺肿瘤细胞的增殖和凋亡。     

微小RNA-340对肝细胞癌细胞转移和侵袭力的影响

目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定MMP-2和MMP-9蛋白水平,用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测核转录因子κB1(NF-κB1)蛋白水平。结果与HepG2相比miR-340在HCC细胞系中表达水平降低,高表达miR-340的HepG2细胞、MHCC-97L细胞侵袭能力下降。高表达miR-340的HepG2细胞和MHCC-97L细胞E-钙黏蛋白mRNA表达上调,N-钙黏蛋白mRNA水平下调,波形蛋白mRNA水平下调。miR-340使HepG2细胞和MHCC-97L细胞中MMP-2和MMP-9的表达下降;与HCC细胞系比较,高表达miR-340的HepG2细胞NF-κB1表达量下降40%、MHCC-97L细胞下降66%,差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学分析预示NF-κB1是miR-340的潜在靶基因且萤光素酶报告分析又进一步证实了miR-340可以直接作用于NF-κB1的3′端非编码区。结论 miR-340在抑制细胞迁移、侵袭和上皮细胞间质转化中起着重要的作用,提示miR-340表达水平降低是HCC发生的重要环节,基于miR-340的治疗方法可用于HCC诊治。