大麻素2型受体在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达

目的研究大麻素受体2(CB2受体)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中的表达,探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用和意义。方法采用免疫组织化学方法分别检测正常宫颈组织、各级宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中CB2受体的表达情况。结果 CB2受体在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中均有表达;宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中CB2受体表达水平明显高于正常组;CB2受体表达水平随组织恶性程度的增加而升高(P均<0.01)。结论 CB2受体在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌中表达明显升高,且其升高水平随病变组织恶性程度的增加而增加,提示CB2受体可能在正常宫颈组织向宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的逐级演变过程中起着重要作用。     

大麻素2型受体镇痛机制的研究进展

由于大麻素2型受体(cannabinoid receptor 2,CB2受体)主要分布于外周,其镇痛效应没有中枢的精神作用,是镇痛治疗的重要靶标.CB2受体激动剂在慢性痛,特别是炎性痛、神经病理痛中的治疗作用最近获得重视,高亲和力的CB2受体外源性配体被逐步研发.本文就CB2受体镇痛机制的研究进展进行简单介绍,为CB2受体激动剂的临床应用提供理论依据.     

雷公藤甲素诱导人冠状动脉平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的:研究雷公藤甲素对人冠状动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:采用MTT实验检测雷公藤甲素对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞增殖的影响,运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带检测细胞凋亡,采用Western-blot检测P53蛋白表达变化。结果:雷公藤甲素对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示雷公藤甲素可以显著诱导人冠状动脉平滑肌细胞凋亡,DNA电泳显示雷公藤甲素作用于人冠状动脉平滑肌细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。P53蛋白表达水平呈浓度依赖性表达上调。结论:雷公藤甲素可能通过激活P53基因表达抑制人冠状动脉平滑肌细胞的生长并诱导其凋亡。     

榄香烯诱导人卵巢癌细胞COC1细胞凋亡的研究

目的：探讨榄香烯对人卵巢癌COC1细胞凋亡的诱导作用。方法：采用Hoechst33258和PI荧光染色法、DNA电泳及流式细胞术分析法，检测榄香烯对COC1细胞的作用。结果：经榄香烯处理的COC1细胞出现核固缩，胞浆凋亡小体形成，琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA状带。凋亡细胞发生率与药物浓度和作用时间呈正相关。结论：榄香烯对肿瘤细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡。     

大鼠外周神经损伤后中枢糖皮质激素受体调节脊髓大麻素1受体的表达上调

既往的研究显示,大鼠外周神经受损后脊髓背角神经元的糖皮质受体(GR)和大麻素1受体(CB1R)的表达同时上调。然而,关于神经损伤后脊髓中GR和CB1R二者表达之间的关系目前尚不清楚。近日美国的科研人员运用大鼠CCI模型检验了神经损伤导致的脊髓CB1R表达上调是否会受脊髓GR的调节。该模型是根据Bennett和Xie的方法松散地结扎坐骨神经制成的,给每只CCI大鼠鞘内植入注射导管,GR拮抗剂RU38486、GR同义和反义寡核苷酸经溶解稀释注射入导管。另外还要在CCI和假手术大鼠身上实施肾上腺切除术。Western免疫印迹和免疫组化结果显示,CCI诱…     

激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达

目的构建激活素受体相互作用蛋白 （aetivin receptor interacting protein zip, ARIPzip） 真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取HNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示,瞬时转染重组质粒的HEK293细胞中可有效表达ARIPzip。结论本研究成功构建了激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体,并能够在真核细胞中进行表达,为进一步研究ARIPzip的生物学功能奠定了基础。     

大麻素受体1和2在肝纤维化模型C57小鼠肝组织中的表达

目的 观察大麻素受体1( CB1)和受体2(CB2)在肝纤维化模型C57小鼠肝组织表达及意义.方法 30只C57小鼠被随机分为3组,即正常对照组、模型对照组和模型秋水仙碱组,每组10只.采用四氯化碳( CCl4)腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测肝组织中CB1和CB2的表达,同时进行肝组织炎症(G)评分和纤维化(S)评分.结果 模型对照组、模型秋水仙碱组及正常对照组肝组织G评分及S评分比较,差异有统计学意义(F=125.41,P=0.00;F=99.18,P=0.00),且模型对照组肝组织G评分及S评分均显著高于模型秋水仙碱组,差异均有统计学意义(P均＜0.01).模型对照组、模型秋水仙碱组肝组织及正常对照组CB1和CB2评分比较,差异有统计学意义(F=29.27,P=0.00;F=36.99,P=0.00),且模型对照组肝组织CB1和CB2评分均显著高于模型秋水仙碱组,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).模型对照组和模型秋水仙碱组中CB1、CB2、G和S评分四者之间均具有相关性(P均＜0.05),且随着G、S评分的不断增加,CB1和CB2评分逐渐增加.结论 CB1和CB2在肝纤维化模型C57小鼠肝组织中表达均明显增强,与肝组织炎症和肝纤维化程度有显著相关性.     

受控凋亡素基因逆转录病毒载体诱导人肝癌细胞凋亡

目的:构建受控重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察受四环素调控的凋亡素基因的表达对人肝癌细胞的影响。方法:构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE—VP3。调节载体pRevTet-Off和表达载体pRevTRE—VP3分别转染PT67包装细胞后,取其病毒上清液依次感染人肝癌细胞系HepG2,以四环素调控凋亡素基因在HepG2/Off-VP3细胞中的表达,以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:重组逆转录病毒载体pRevTRE—VP3构建成功;经PCR和RT—PCR证实凋亡素基因在HepG2细胞中得到了表达;HepG2/Off-VP3—8细胞在无四环素培养环境中凋亡率明显高于在1μg/ml四环素环境中的细胞凋亡率(P＜0．05)。结论:凋亡素基因经RevTet系统导入人肝癌细胞HepG2后,可在四环素调控下表达凋亡素并诱导HepG2细胞凋亡。     

水飞蓟素在去血清条件下诱导G0／G1期人宫颈癌HeLa细胞凋亡

背景：宫颈癌是危害女性身体健康，降低生活质量的疾病之一。利用中药治疗宫颈癌，降低放射治疗、应用抗肿瘤药物治疗副作用对机体伤害已成为医药界的研究热点在欧洲，水飞蓟素曾广泛用于临床的肝炎治疗。它毒性小，在植物中含量高。因此，一些学者正在研究其抗肿瘤的活性。目的：探讨水飞蓟素对人子宫颈癌细胞的药理作用机制。设计：以体外10％血清正常培养的细胞作为阴性对照的实验对照研究。单位：沈阳药科大学中日医药研究所，昭和药科大学病态科学教研室。材料：人的宫预癌HeLa细胞为本实验室保存的美国ATCC细胞系实验于2003—01／07在沈阳药科大学中日医药研究所细胞室完成。方法：噻唑蓝还原法(MTT)分析HeLa细胞的死亡率。采用相差和荧光显微镜观察细胞形态学改变。用流式细胞术分析了细胞周期的变化。主要观察指标：细胞死亡率和细胞周期分化的变化。结果：水飞蓟素诱导的HeLa细胞死亡与培养液中血清含量有关。给予80μmol／L的水飞蓟素作用．去血清组的细胞死亡率达到85.27％．含5％．10％血清组的死亡率为35．53％，7.71％细胞的形态学变化表明水飞蓟素诱导的HeLa细胞发生凋亡流式细胞分析结果显示：水飞蓟素诱导70.04％的细胞发生凋亡，这些凋亡细胞主要来自G0／G1期。结论：水飞蓟素在去血清条件下．诱导处G0／G1期的HeLa细胞发生凋亡。     

免疫组化及原位杂交的方法检测内源性大麻素受体1在肥胖大鼠胰腺的表达

目的研究内源性大麻素受体1（CB1）在大鼠胰腺的表达,了解CB1在肥胖大鼠胰腺表达量的改变。方法高脂饲料喂养雄性SD大鼠20周,制备肥胖大鼠（HF）模型,并设正常对照组（NC）。取两组大鼠胰腺,免疫组化法检测CB1蛋白表达,原位杂交法检测CB1 mRNA表达。结果 CB1在胰腺存在,HF组胰腺CB1蛋白及CB1 mRNA表达均高于NC组。结论 CB1在大鼠胰腺有表达,且在肥胖大鼠胰腺的表达量增加。肥胖时胰岛细胞CB1表达增加可能与胰岛素抵抗的发生相关。     

SBHL诱导宫颈癌细胞株ME180凋亡的实验研究

目的 SBHL对人宫颈癌细胞的抗肿瘤作用机制。方法观察SBHL对ME180细胞增殖抑制、观察SBHL诱导ME180细胞凋亡。结果 MTT实验发现SBHL作用ME180细胞24小时后,细胞存活率明显下降,而且随着澳洲茄胺盐酸盐浓度的增加,抑制作用增强;流式细胞仪检测SBHL可引起ME180细胞阻滞于G1期,透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征。结论 SBHL可抑制ME180细胞增殖并可诱导细胞发生凋亡。     

双氢青蒿素DHA诱导胆管癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨双氢青蒿素对Mcl-1表达的影响,及其对胆管癌患者癌细胞凋亡的诱导作用。方法随机抽选2010年6月至2014年12月保存的胆管癌细胞系QBC939,将其划分为对照组和观察组进行试验,分别采用常规培养和双氢青蒿素培养,并就两组癌细胞的Mcl-1表达情况及凋亡情况进行统计、比较和分析。结果统计学对比显示,观察组MCL1-001、MCL1-201在培养12、24、48h的表达均明显高于对照组,组间差异均有统计学意义(P0.05)。MCL1-002在12、24h的表达差异无统计学意义(P0.05),但在48h时明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。并且在培养6、12、24、48、72h时的凋亡率均明显高于对照组,差异存在统计学意义(P0.05)。结论双氢青蒿素对Mcl-1的表达具有明显的上调作用,且能够有效诱导胆管癌细胞凋亡。     

外源性子宫珠蛋白基因对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨人子宫珠蛋白（UG）基因对宫颈癌Hela细胞系细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核细胞表达载体pcDNA3．1-UG（＋），以脂质体介导法稳定转染体外培养的人宫颈癌Hela细胞，同时转染空载体pcDNA3．1质粒，以未转染细胞为对照，转染成功后分别命名为pcDNA3．1-UG（＋）／Hela组、pcDNA3．1／Hela组、Hela组。应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、Western blot方法分析目的基因表达，并采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡。结果pcDNA3，1-UG（＋）／Hela组UGmRNA及UG蛋白出现明显的高表达，与对照组细胞相比差异有统计学意义（P〈0．05）；pcDNA3．1UG（＋）／Hela组细胞生长速度明显慢于未转染Hela细胞，其细胞凋亡率与未转染Hela细胞相比差异也有统计学意义；然而pcDNA3．1／Hela组细胞生长速度和凋亡率均无明显变化。结论转染UG基因能诱导Hela细胞凋亡及抑制Hela细胞生长。     

低浓度紫杉醇通过上调Bim表达诱导HepG2细胞凋亡

目的探讨低浓度紫杉醇诱导肝癌细胞HepG2凋亡的机制。方法采用MTT还原法检测细胞增殖;采用流式细胞术分析细胞凋亡与细胞周期;采用免疫印迹技术检测细胞内Bim等凋亡相关信号分子的表达。结果紫杉醇对HepG2细胞90%的抑制浓度为9.50nmol/L;3,6和12nmol/L的PTX分别可诱导6.1±2.3%,17.2±4.1%和6.9±2.9%发生凋亡。3-12nmol/L紫杉醇对Bcl-2和Bax表达无影响,但细胞内促凋亡分子Bim表达增加,同时促进Bim降解的Erk1/2磷酸化(活化相关位点)下降。结论低浓度紫杉醇通过上调Bim表达诱导HepG2细胞凋亡。     

维生素K3诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其survivin基因表达的变化

目的 观察维生素K3（VK3）对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响及其survivin基因表达的变化.方法 CCK 8试剂检测VK3对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33342荧光染色法在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞核的形态,用流式细胞仪检测细胞凋亡率（Annexin V/PI法）,RT-PCR法检测SMMC-7721细胞survivin mRNA的表达水平.结果 （2、5、10、20、25μmol/L）VK3作用SMMC-7721细胞48 h后,生长抑制率分别为33.8%、50.1%、63.9%、78.5%、84.7%;细胞的凋亡率分别是33.28%、63.97%、77.69%、87.30%、92.40%;survivin mRNA在凋亡的SMMC-7721细胞内的表达明显下降.结论 VK3能抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其发生凋亡,survivin表达水平的下降可能与VK3诱导的SMMC-7721细胞凋亡有关.     

平滑肌细胞凋亡在自然消退动脉粥样硬化中作用的实验研究

目的 :探讨平滑肌细胞 (SMC)凋亡在动脉粥样硬化自然消退过程中的作用和意义 ,方法 :将 2 1只日本大耳白兔随机分为正常对照组、高胆固醇喂养组和停高胆固醇喂养组 ,采用病理观察 ,分别以缺口末端标记法 (TUNEL )和标记生物素抗生素系技术 (L AB)免疫组织化学法检测 SMC凋亡和增殖的表达变化。结果 :停高胆固醇喂养组抑制主动脉平滑肌细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达作用明显 (P<0 .0 5 ) ,SMC凋亡表达下降不明显 (P>0 .0 5 )。结论 :停高胆固醇喂养可抑制 SMC增殖 ,除具有消退动脉粥样硬化斑块作用外 ,还可能通过诱导 SMC凋亡来逆转动脉粥样硬化的形成。     

苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法：将不同浓度的苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、电子显微镜技术观察检测细胞凋亡，研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：苦参碱浓度为0．5、1．0、1．5g／l时，细胞毒性指数分别为12．1％、21．6％、39．5％；流式细胞术示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为9．8％、16．9％、25．5％；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；电镜显示细胞的凋亡形态。结论：苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

RASSF1A基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSF1A基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组(A组)、空载组(B组)、转染突变型RASSF1A组(C组)与转染野生型RASSF1A组(D组),B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡。Western blot测定Caspase-3蛋白的表达水平。结果成功建立稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义(P<0.05),C组与A,B组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论野生型RASSF1A的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性。     

RASSFlA基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSFIA基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSFlA基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组（A组）、空载组（B组）、转染突变型RASSFlA组（c组）与转染野生型RASSFlA组（D组）,B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡。Westernblot测定Caspase-3蛋白的表达水平。结果成功建立稳定表达野生型和突变型RASSFlA基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,C组与A,B组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论野生型RASSFIA的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性。     

The apoptotic effect of hesperetin on human cervical cancer cells is mediated through cell cycle arrest,death receptor,and mitochondrial pathways

Hesperetin, a flavonoid from citrus fruits, has several bioactivities such as anti‐inflammatory, antihypertensive, antiatherogenic effects. However, studies elucidating the role and the mechanism(s) of action of hesperetin in cervical cancer are sparse. In this study, we investigated the mechanism of the antiproliferative and apoptotic actions exerted by hesperetin on human cervical cancer SiHa cells. The viability of SiHa cells was evaluated using the MTT assay, apoptosis by acridine orange/ethidium bromide, propidium iodide, TUNEL assay, and Annexin V‐Cy3, cell cycle distribution and mitochondrial transmembrane potential using flow cytometry, and apoptotic marker genes using quantitative real‐time PCR. The treatment of SiHa cells with hesperetin (IC_50, 650 μm ) showed a marked concentration‐ and time‐dependent inhibition of proliferation and induced the G2/M phase in a dose‐dependent manner after 24 h. There was an attenuation of mitochondrial membrane potential with increased expression of caspase‐3, caspase‐8, caspase‐9, p53, Bax, and Fas death receptor and its adaptor protein Fas‐associated death domain–containing protein (FADD), indicating the participation of both death receptor– and mitochondria‐related mechanisms. Furthermore, hesperetin‐induced apoptosis was confirmed by TUNEL and Annexin V‐Cy3. This study shows that hesperetin exhibits a potential anticancer activity against human cervical cancer cell lines in vitro through the reduction in cell viability and the induction of apoptosis. Altogether, these data sustain our contention that hesperetin has anticancer properties and merits further investigation as a potential therapeutic agent.