病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量超标原因的研究

目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活后亚甲蓝残留量结果范围及其原因。方法采用固相萃取法,检测不同规格的病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,并分析亚甲蓝残留量超标的原因。结果统计分析不同规格病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,结果有差异。结论根据亚甲蓝残留量超标存在的原因采取相应措施,加强制备过程中关键控制点的监测,减少亚甲蓝残留量超标现象,保证输血安全。     

苏州地区临床用血浆中亚甲蓝残留量及安全性调查分析

目的通过对血浆病毒灭活后亚甲蓝残留量检测,探讨临床用血浆安全性。方法随机抽取213份病毒灭活血浆,采用高灵敏荧光光度法检测不同规格的病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,并对亚甲蓝残留量检测结果进行分析。结果病毒灭活血浆亚甲蓝残留量均符合国家标准。结论通过对病毒灭活耗材的原料监测,采用高质量的过滤器材,并加强制备过程中关键控制点的监测,可以避免亚甲蓝残留量超标现象,保证输血安全。     

亚甲蓝残留量在病毒灭活血浆中的限量检测方法

目的探讨亚甲蓝残留量在病毒灭活血浆中的限量检测方法。方法留取病毒灭活血浆亚甲蓝滤过前和滤过后的样本各30份,每10份为一组,共分为三组:对照组,使用批号为2013001-A的病毒灭活过滤器;试验一组和试验二组,均使用批号为2013002-B的病毒灭活过滤器。采用固相萃取小柱对血浆样品和标准品中的亚甲蓝进行萃取分离,结合分光光度法进行测定;通过已知浓度的标准品计算得到3组试验中每袋血浆的亚甲蓝释放量、残留量/率。用双缩脲法测定总蛋白,计算总蛋白测定回收率;使用血凝仪测定VIII因子含量,计算VIII因子回收率。结果三组亚甲蓝释放量指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比,试验一组和试验二组亚甲蓝残留量及亚甲蓝残留率增大,但差异无统计意义(P>0.05)。与试验一组比较,试验二组亚甲蓝残留量及亚甲蓝残留率降低,差异显著(P<0.05)。结论采用新型过滤器对血浆中亚甲蓝过滤两次,既能缩短过滤时间,提高工作效率,又能降低血浆中亚甲蓝残留率,保证血液产品质量,效果良好。     

病毒灭活冷沉淀制备过程中滤除亚甲蓝对凝血因子的影响

目的使用两种不同的方法制备病毒灭活冷沉淀凝血因子,通过对Ⅷ因子和纤维蛋白原含量的检测,观察制备过程中滤除亚甲蓝对凝血因子含量的影响。方法将40袋全血（保养液为ACD-B）分为A、B两组,A组制备的病毒灭活冷沉淀凝血因子不滤除亚甲蓝,B组制备的病毒灭活冷沉淀凝血因子滤除亚甲蓝。使用全自动血凝仪分别检测A、B两组的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量。参考国外相应标准,将病毒灭活冷沉淀凝血因子Ⅷ因子含量的合格标准定为≥70IU/袋,纤维蛋白原含量的合格标准定为≥140mg/袋,两项质控指标抽检合格率必须≥75%。结果 A组病毒灭活冷沉淀凝血因子,Ⅷ因子含量为（102.89±19.2）IU/袋,抽检合格率为90%;纤维蛋白原含量为（186.5±49.2）mg/袋,抽检合格率为80%。B组病毒灭活冷沉淀凝血因子,Ⅷ因子含量为（89.9±16.4）IU/袋,抽检合格率为85%;纤维蛋白原含量为（152.8±58.4）mg/袋,抽检合格率为40%。结论为确保病毒灭活冷沉淀凝血因子的质量,不能对其进行亚甲蓝的滤除。     

国产输血过滤器对新鲜冰冻血浆回收率的影响

近年来对输血的安全性越来越重视,血液成分的病毒灭活方法在不断改进和推广,其中亚甲蓝光化学单袋血浆病毒灭活技术已在全国的部分血站投入使用。据文献报道,在血浆中加入终浓度为1μmol／L的亚甲蓝后,经30000～38000 LUX荧光照射30min,可使滴度大于7TcID50的指示病毒灭活,达到去除病毒的目的。但人们已认识到亚甲蓝灭活处理对血浆中主要凝血因子、生化指标、酶活性的影响,但在《病毒灭活装置配套用输血过滤器》使用说明书中,元新鲜冰冻血浆容量回收率的数据。     

南昌血站病毒灭活血浆制品主要质量控制指标的分析

目的：了解本血站经亚甲蓝/光化学法病毒灭活后,新鲜冰冻血浆、冷沉淀、冷上清中总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求。方法随机采集100袋新鲜冰冻血浆,经亚甲蓝/光化学法病毒灭活过滤后留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,解冻后制备冷沉淀前各留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,采用改良快速融化离心法制备冷沉淀后各留取1份标本（冷沉淀实验组）,留取冷上清标本各1份（冷上清实验组）,三个实验组分别检测总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。结果病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋,冷上清的总蛋白含量为46.3g/L。结论本站制备的病毒灭活新鲜冰冻血浆、冷沉淀符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求,冷上清的血浆蛋白含量不足,不能标注为病毒灭活冰冻血浆在临床上使用。     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景:对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的:观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法:随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论:血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为(96.39±1.73)%、(82.55±9.25)%、(81.03±15.27)%、(93.25±6.17)%、(81.61±14.25)%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景：对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的：观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法：随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论：血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为（96.39±1.73）%、（82.55±9.25）%、（81.03±15.27）%、（93.25±6.17）%、（81.61±14.25）%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究

以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术 ,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒 (VSV)和辛德比斯病毒 (SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化。结果 ,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加 1μmol/L亚甲蓝并经荧光 (30 0 0 0Lux)照射 30min ,可将血浆中滴度 >7TCID50 (lg)的VSV和SV灭活。消毒后 ,血浆中的Ⅷ :C、Ⅸ :C、纤维蛋白原的回收率 >75% ,白蛋白、球蛋白的回收率 >85% ,蛋白免疫原性无变化     

光照度对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的影响

目的在亚甲蓝(Methylene Blue,MB)光化学法灭活血浆病毒的过程中,采用不同光照度对血浆进行灭活,探讨血浆主要生化指标的变化情况,以找出对血浆影响最小的灭活光照度。方法将300袋机器单采血浆(200ml/袋),处理为含MB浓度为1μmol/L的MB血浆。分3组(100袋/组),分别置于3种不同光照度下处理35min(其它灭活条件相同),并检测血浆相关质控指标。结果在MB光化学法灭活血浆的过程中,不同光照度对血浆总蛋白浓度和凝血因子Ⅷ含量会造成不同影响,而对血浆其它主要成分和生化指标的影响不明显。结论初步证明,当可见光的光照度为30000—33000Lux时,MB光化学法灭活血浆的主要成分和生化指标变化最小,较适合于输注人体。     

亚甲蓝血浆病毒灭活对其主要质控指标的影响及残留亚甲蓝检测

亚甲蓝光化学法用于血浆病毒灭活在我国血站系统已得到广泛采用,该方法可使病毒模型的滴度下降61g,达到良好的灭活效果[1]。为了考查亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活对其质量的影响,笔者对新鲜冰冻血浆和用亚甲蓝光化学法制备的病毒灭活血浆分别随机抽取60袋,对其主要质量控制指标:血浆蛋白浓度、凝血因子Ⅷ含量、纤维蛋白原含量进行了检测比较,并采用高效液相法检测病毒灭活血浆的亚甲蓝残留量。现将试验结果报告如下。1材料与方法1.1标本新鲜冰冻血浆和用亚甲蓝光化学法制备的病毒灭活血浆各60份,来源于本血液中心街头无偿献血者的血液制得。1…     

联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活对新鲜血浆成分的影响

目的探讨联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学病毒灭活处理后血浆主要成分的生物活性变化。方法应用去白细胞四联血袋采集全血分离制备成滤除白细胞的新鲜血浆10袋(100 ml/袋),加入1μmol/L亚甲蓝并放置2~6℃,光照度为30 000 Lux的可见光下左右摆动照射30 min。留取白细胞滤过前和亚甲蓝光照处理后新鲜血浆各5 ml,分别计数白细胞并检测血浆中部分凝血因子活性,血浆蛋白含量和补体水平变化。结果 2种方法处理后的新鲜血浆白细胞滤除率>99.91%,APTT,FⅧ∶C、FⅨ∶C水平与处理前比较t值分别为3.041、8.039、3.617,P<0.05。FⅧ∶C,FⅨ∶C回收率均>81%。PT,FⅡ∶C Fib较处理前无统计学意义,P>0.05。血浆白蛋白,IgG、IgM、IgA以及补体C3,C4水平较处理前变化不大。结论联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学灭活病毒法对新鲜血浆处理前后的主要成分和生化指标影响不大。     

亚甲蓝病毒灭活血浆中人细小病毒B19抗原、抗体的检测与分析

目的检测亚甲蓝病毒灭活血浆中人细小病毒(human parvovirus,HPV)B19抗原和抗体,评估临床输注的安全性。方法随机抽取2016年2月5日~4月30日制备的亚甲蓝病毒灭活血浆1 056袋,采用ELISA法检测HPV B19抗原和抗体;将HPV B19抗体阳性血浆按献血者性别、年龄、血型进行分组统计分析。结果 1 056袋亚甲蓝病毒灭活血浆HPV B19抗原均为阴性,Ig G和Ig M抗体总阳性率为20.5%(216/1 056)、Ig G抗体阳性率为19.5%(206/1 056)、Ig M抗体阳性率为4.9%(52/1 056),不同来源献血者制备的血浆HPV B19抗体阳性率有差异,随年龄增加抗体阳性率呈上升趋势,献血者性别差异无统计学意义,A型和AB型抗体阳性率较高,B型和O型抗体阳性率较低。结论亚甲蓝病毒灭活血浆中HPV B19抗原、抗体检测结果显示,临床输注血浆感染HPV B19的风险不高,但对于免疫缺陷等特殊受血者应引起重视,建议进行输血前HPV B19检测。     

病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量的质量控制

目的 探讨如何在提高病毒灭活血浆制备效率的基础上,尽可能减少血浆中的亚甲蓝残留量/率.方法 将30份200 ml新鲜血浆,平均分为3组,对照组使用旧型病毒灭活过滤器,实验1组和2组使用新型过滤器,对照组和实验1组对血浆中的亚甲蓝只进行1次滤除,实验2组对亚甲蓝进行2次滤除,留样测定每组滤过前、后的亚甲蓝含量,以及总蛋白...     

亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及应用评价

目的探讨亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及其临床应用评价。方法随机抽取200份病毒灭活血浆,检测灭活前后的血浆容量、总蛋白、凝血因子及亚甲蓝的残余量;选取15756人份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV酶联免疫吸附法检测阴性者的血浆,在病毒灭活前后分别进行HBV、HCV、HIV的核酸检测;临床随机抽取200例输注病毒灭活血浆的患者,观察病毒灭活血浆输注后是否出现输血不良反应。结果经亚甲蓝／光照法进行灭活处理的血浆,血浆容量达到（227．34±5．21）g,回收率达到（96．67±2．34）％;血浆总蛋白、血浆凝血因子（Ⅷ因子和纤维蛋白原）回收率分别达到（88．69±3．32）％,（86．84±2．16）％和（84．62±1．86）％,与处理前相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;血浆经病毒灭活后亚甲蓝的残余量为（1．17±0．05）μmol／L,而过滤后残余量减少至（0．16±0．03）μmol／L,去除率达到86．32％;对15756人份血浆进行HBV、HCV、HIV核酸检测,发现HBV阳性23例,HIV阳性1例,阳性率为1．52‰,进行病毒灭活后,HBV、HCV、HIV核酸检测均为阴性。病毒灭活血浆输注人体后无不良反应发生。结论采用亚甲蓝／光照法进行病毒灭活的血浆,临床使用较安全;病毒灭活血浆能够有效降低经输血传播疾病的危险性,且不良反应较小。     

热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒效果的研究

目的研究热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果。方法采用细胞培养法和基因检测技术,对热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果进行了评价。结果经56℃水浴中热力预灭活处理1.5 h,辛德毕斯病毒滴度≤0.5 TCID50/ml,灭活对数值达到6.33 TCID50/ml;未经预灭活的辛德毕斯病毒在1μmol/L亚甲蓝+光照(MB+L)处理中随光照时间的延长,病毒残余滴度逐渐下降至检测限(TCID50/ml=0.5)。经热力灭活预处理的辛德毕斯病毒与未经预处理的病毒核酸载量之间具有相关性(R20.98,显著性F0.01)。结论热力灭活预处理的辛德毕斯病毒能够反映活病毒的亚甲蓝病毒灭活效果,有望成为安全而有效的病毒灭活效果评价制品。     

白细胞过滤对亚甲蓝光敏化血浆质量的影响

亚甲蓝光敏法灭活血浆中病毒是近年来才发展起来的新技术 ,但是一些亲白细胞病毒和非脂包膜病毒能抵抗此灭活过程[1] ,而且 ,残留血浆中的亚甲蓝还有毒副作用[2 ] 。我们对光敏法灭活病毒后的血浆 ,再用白细胞滤器过滤 ,不仅可减少血浆中残留白细胞引起的输血副反应 ,减少亚甲蓝残留量 ,而且对血浆质量也无大的影响。1　材料与方法1 1　标本来源　血浆均为全血采集后 6ｈ内分离的新鲜血浆。共 10份 ,每份留取 30ｍｌ备用。1 2　亚甲蓝处理　在每份血浆中加入亚甲蓝 (2 0ｍｇ/ｍｌ,北京永康制药厂 ) ,使其终浓度为 1μｍｏｌ/Ｌ ,置于血浆病…     

血浆中亚甲蓝含量的检测

目的建立固相萃取法提取血浆中微量亚甲蓝及分光光度法进行测定的方法。方法采用固相萃取小柱对血浆样品中残留的亚甲蓝进行萃取分离,在400～800nm处选择分析波长,分光光度法进行含量测定。结果选择653nm为检测波长,在亚甲蓝浓度0．1～2μmol／L的范围内,所得标准曲线方程为Y=66．171X＋0．0567,r=0．998,平均CV为6．5％,回收率在90％～110％之间,病毒灭活血浆亚甲蓝的滤除率大于80％。结论本法简便、准确、精密度高,能够用于血浆中微量亚甲蓝的分析。     

亚甲蓝/光化学病毒灭活法对血浆蛋白浓度及凝血因子活性的影响

对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,其病毒滴度减少程度与所用的紫外光照强度和亚甲蓝浓度直接相关[1,2]。我们观察亚甲蓝/光化学法灭活病毒前后血浆蛋白浓度和凝血因子活性的变化,以及照射后过滤吸咐亚甲蓝的血浆经速冻并最终制备成冷沉淀制品中凝血因子的变化。1材料与方法1.1试剂与仪器Dade Behring Marbury GmbH凝血因子检测试剂(德国Marburg,批号436515),总蛋白液体检测试剂(北京中生北控生物科技,批号040261);四联采血袋(长春泰尔茂,批号20040612),一次性使用病毒灭活输…     

亚甲蓝/光化学灭活病毒方法对血浆成分的影响

亚甲蓝／光化学法可有效地灭活血浆中的病毒。为进一步观察该法对灭活血浆中诸成分的免疫活性及生化指标的影响，本研究用灭活病毒的条件处理单采血浆。将合有1μmol/L亚甲蓝的血浆置于照度为40000lux的可见光下，在室温条件下处理1小时。结果表明，除凝血因子调，PT和APTT有一定程度降低外，其它血浆蛋白活性未见明显变化，血浆中的白蛋白、葡萄搪、多种无机盐含量及血浆pH值未受影响。处理后的血浆经不同电泳及免疫化学技术分析，未见新的抗原产生，电泳迁移率与未处理组相同。结论：亚甲蓝／光化学法对大多数血浆成分的影响不明显。