脐血来源NK细胞对肝肿瘤生长抑制作用

目的 培养脐血来源NK细胞,通过细胞和动物水平验证其用于肝癌治疗的安全性和有效性。方法 NK细胞体外诱导培养,观察培养过程细胞形态、细胞总数、增殖倍数,流式检测其中CD3^-CD56⁺细胞的比例,细胞毒性检测验证NK细胞对癌细胞的杀伤活性;建立肝癌裸鼠皮下荷瘤模型,采用瘤内与静脉方式注射NK细胞,密切观察不同时间段实验组和对照组裸鼠移植瘤大小、体积、质量以及裸鼠存活状态。荷瘤40天后取肿瘤组织进行分析。通过流式分析、HE染色和免疫荧光检测NK细胞移植在裸鼠体内第37天含量,分析NK细胞在裸鼠体内残留情况。结果 脐血分离单个核细胞经体外诱导培养的NK细胞能保持典型的NK细胞表型特征,细胞活性好、增殖能力强、纯度高,对多种癌细胞系均具有良好的杀伤作用。与对照组相比,NK细胞注射组均能抑制肝肿瘤生长。NK细胞移植35天后,尾静脉组肿瘤大小显著下降(P<0.05)。同时NK细胞在体内无明显残留,表明NK细胞小鼠体内移植无致瘤性。结论 本研究制备的脐血NK细胞符合临床研究需求,可作为肝癌患者临床治疗的替代方案,为下一步开展临床研究提供前期基础。     

乙型肝炎病毒对NK细胞免疫活性的影响作用分析

目的研究乙型肝炎病毒对NK细胞免疫活性的影响作用并予以分析,目的在于为临床乙型肝炎病毒感染的防治提供参考依据。方法选取2015年1月-2017年12月于我院进行体检的健康人员120例为研究对象,采集所有研究对象的外周血。并分别对外周血来源的NK细胞进行单独培养,或与浆样树突状细胞(pDC)共同培养,或加入来源于HepG2.2.15细胞的乙型肝炎病毒。分析乙型肝炎病毒对NK细胞分泌IFNγ的影响、乙型肝炎病毒对pDC诱导的NK细胞分泌IFNγ的影响、乙型肝炎病毒对pDC诱导的NK细胞杀伤靶细胞K562的影响。结果纯化NK细胞、IL-12与IL-18刺激后的NK细胞分泌IFNγ量分别为(9.92±1.35)ng/ml、(10.15±1.38)ng/ml,组间对比差异无统计学意义(P0.05)。CpG寡脱氧核酸刺激、疱疹病毒刺激后的p DC诱导的NK细胞分泌IFNγ量分别为(1.22±0.42)ng/ml、(1.34±0.41)ng/ml,均明显高于单纯pDC诱导NK细胞分泌IFNγ量(0.43±0.04)ng/ml,而单纯pDC诱导NK细胞分泌IFNγ量又明显高于乙型肝炎病毒刺激后的p DC诱导的NK细胞分泌IFNγ量(0.21±0.01)ng/ml,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。pDC诱导的NK细胞以及乙型肝炎病毒刺激+pDC诱导的NK细胞组的靶细胞K562死亡率分别为(71.52±4.31)%、(70.87±4.28)%,均明显高于纯化NK细胞的(38.54±3.25)%,组间比较差异均有统计学意义(P0.05);而p DC诱导的NK细胞与乙型肝炎病毒刺激+pDC诱导的NK细胞组的靶细胞K562死亡率相比不明显,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论乙型肝炎病毒对pDC所诱导的NK细胞分泌IFNγ具有明显的抑制作用,从而在一定程度上增加了乙型肝炎病毒持续感染的风险。     

人白细胞干扰素对肝癌细胞的抑制作用

干扰素(IFN)有抑制病毒和肿瘤细胞增殖的作用.本实验在探索干扰素对组织培养下的人肝癌细胞株的抑制作用及其作用机制.……     

交叉反应组配型在肾移植应用的临床研究

目的 研究交叉反应组配型应用于肾移植的临床可行性和安全性。方法 1998年5月－1999年5月，采用血清学方法检测HLA抗原，按照HLA－I类10组的交叉反应组标准，前瞻性地用于首次尸体肾移植260例，观察1a和3a人／肾存活率及肾功能指标，并与传统HLA六抗原标准进行比较。结果 交叉反应组标准I类抗原O错配，联合六抗原标准Ⅱ类O错配组显示较好的人／肾存活率（4／4）和肾功能，应用交叉反应组标准的各组与完全采用HLA六抗原标准对照组相比，人肾存活率与肌酐清除率无显性差异（P＞0．05）。以交叉反应组标准确定的供受关系占移植总数的46．2％（111／260）。结论 交叉反应组配型标准应用于肾移植是安全可行的，根据该标准进行肾移植，其人肾存活率及远期移植肾功能与HLA六抗原标准结果相似。但其可以明显提高供受相配几率，值得临床推广使用。     

异源反应性NK细胞对输血相关免疫抑制作用的初步研究

目的探讨供血者KIR与受血者HLA-Ⅰ类分子不同程度匹配情况下的异源反应性NK细胞对输血相关免疫抑制的作用。方法模拟临床输血状态,采用miniMACS免疫磁珠分选方法,从外周血单个核细胞(PBMC)中得到纯化的NK细胞,体外培养并采用PCR-SSP法进行5种KIR抑制基因的分型。将已经KIR分型的NK细胞(4ml共1×106个细胞)与已知HLA分型的血液病患者骨髓移植供者的全血(20 ml)按比例(相当于60 kg体重个体输入800 ml全血)混合,不同时间点取样检测免疫指标的变化。根据KIR和HLA的不相合程度分为20组,比较不同相合程度对血液免疫功能的影响。结果从0—24 h,IL-2、IL-4、PGE2、TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的浓度分别由(1.97±0.12)、(0.22±0.03)、(0.22±0.06)、(0.19±0.02)、(0.13±0.02)、(0.12±0.02)、(0.19±0.02)μg/L增加到(2.94±0.06)、(0.55±0.09)、(0.53±0.05)、(3.54±0.07)、(3.08±0.14)、(2.65±0.11)、(2.37±0.16)μg/L(P<0.05),IgA、IgM、IgG的浓度都随时间的增加而分别由(1.20±0.20)、(1.28±0.07)、(9.89±0.37)g/L减少到(0.60±0.07)、(0.72±0.06)、(6.66±0.91)g/L(P<0.05);KIR与HLA相合程度的不同与IL-2、IL-4、PGE2、IgA、IgM、IgG浓度无关(P>0.05);随KIR与HLA不相合程度的加大,TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的浓度逐渐增加,分别从(0.42±0.04)、(0.37±0.04)、(0.46±0.08)、(0.43±0.02)μg/L增加到(3.54±0.07)、(3.08±0.14)、(2.65±0.11)和(2.37±0.16)μg/L(P<0.05)。结论 KIR与HLA不相合程度越高越能激发异源反应性NK细胞的免疫功能,可更好地逆转输血相关免疫抑制作用。     

全反式维甲酸与干扰素-γ协同抑制人肝癌细胞的生长并诱导凋亡

目的 探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）和干扰素-γ（Interferon-gamma,IFN-γ）联合作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后,对于细胞的影响,观察两者是否具有协同作用.方法 用ATRA和IFN-γ处理SMMC-7721细胞后,应用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞彤态的变化,电镜及流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测增殖绌胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及核因子（Nuclear Factor-kappaB,NF-κB）的表达变化.结果 ATRA作崩于SMMC-7721 24h后,细胞生长受到抑制,并且诱导细胞凋亡发生,和IFN-γ联合作用后,该作用加强;SMMC-7721细胞中NF-κ B和PCNA的表达在ATRA作用后减少,ATRA与IFN-γ联合作用后进一步减少.结论 ATRA与IFN-γ联合作用于肝癌细胞后,对于肝癌细胞的生长抑制及诱导凋亡具有协同作用,该协同作用可能是通过下调NF-κ B和PCNA的表达实现的.     

MAGE-1多肽负载树突状细胞对人肝癌细胞的体外杀伤作用

目的:应用黑色素瘤基因(MAGE-1)多肽负载的树突状细胞(DC)在体外诱导出高度特异性的抗肝癌免疫应答。方法:分离肝细胞肝癌患者外周血单个核细胞;GM-CSF、IL-4、TNF-α联合培养获得DC;MAGE-1多肽负载DC激活自体T淋巴细胞,使之增殖、分化为细胞毒T细胞(CTL);用MTT法检测CTL对BEL-7402HCC细胞的杀伤作用。结果:MAGE-1多肽负载DC激活的T淋巴细胞对BEL-7402HCC细胞有明显的体外杀伤作用,而无关抗原和无抗原负载的DC活化的淋巴细胞无明显杀伤作用(P<0.01)。结论:MAGE-1多肽负载的HCC患者外周血DC在体外可诱导出高度特异性的抗肿瘤免疫应答,提示MAGE-1基因可作为免疫治疗HCC的攻击靶点,MAGE-1多肽负载的DC疫苗在HCC的治疗中起重要作用。     

MHC五聚体方法检测基因疫苗体外诱导的抗原特异性细胞毒T淋巴细胞

目的 探讨MHC五聚体方法检测在体外用抗B细胞淋巴瘤基因疫苗(简称基因疫苗)刺激PBMC生成抗原特异性CTL的效率.方法 用于细胞培养的4份血液标本来自2例B淋巴细胞肿瘤患者(1例为滤泡性淋巴瘤患者,另1例为毛细胞白血病患者)和2名健康对照者.分别检测上述标本中PBMC受基因疫苗刺激后CTL生成情况.PBMC贴壁培养获得DC前体,在重组细胞因子GM-CSF和IL4的支持下诱导培养DC,采用基因枪方法将基因疫苗质粒导入DC,RT-PCB方法检测转染后细胞IgHV1-GM-CSF mRNA的转录,ELISA方法检测细胞因子GM-CSF的表达,并验证转染是否获得有效表达.转染后的DC再与从PBMC中获得的淋巴细胞共培养,诱导抗原特异性的CTL;共进行2次DC刺激,共计培养24 d,分别在培养前、培养第7天、第17天及第24天收获培养细胞,培养分为转染基因疫苗组和转染对照质粒组,流式细胞术分析培养细胞中CD3+ CD8+细胞亚群的水平;用针对基因疫苗抗原肽抗原表位的MHC五聚体荧光抗体检测CTL产生水平.结果 基因枪颗粒轰击方法转染DC后,RT-PCR结果显示转染得到了表达;转染基因疫苗组的DC中GM-CSF含量为(28±6)ng/106个细胞,而转染对照质粒组的DC中GM-CSF含量为(10±3)ng/106个细胞,差异有统计学意义(t=5.191,P<0.01).分析培养后的T淋巴细胞亚群,显示随着培养时间的延长,CD3+CD8+细胞亚群比例明显增加,转染对照质粒组在培养前、培养第7天、第17天和第24天的比例分别为(34.24±2.72)%,(46.06±3.08)%,(65.34±4.26)%,(73.86±4.85)%,而在转染基因疫苗组,其比例分别为(32.28±2.08)%,(45.32±3.81)%,(63.37±4.21)%,(75.01±3.20)%.两因素方差分析显示培养不同时间点的CD3+CD8+细胞亚群比例差异有统计学意义(F培养时间=176.966,P<0.01),但转染因素本身对其产生的影响差异无统计学意义(F转染因素=0.657,P>0.05).MHC五聚体检测结果显示转染基因疫苗组的DC能够诱导针对该表位的抗原特异性CTL产生,CTL水平随着DC的刺激逐渐增高;在培养第24天,健康对照者最高获得2.03%的CTL,滤泡性淋巴瘤患者的CTL达4.36%,而毛细胞白血病患者为3.89%.结论 MHC五聚体方法能够有效检测基因疫苗诱导的抗原特异性CTL;该方法对于抗肿瘤细胞免疫的检测、肿瘤患者的细胞免疫状态及早期预后判定可能是一项有前景的临床检验方法.     

NK细胞与造血干细胞移植

造血干细胞移植能重建机体造血和免疫功能,治疗白血病和再生障碍性贫血等某些恶性血液病。现认为,在决定移植术预后的诸因素中,除供、受者间组织相容性抗原的吻合度外,NK细胞表面免疫球蛋白样受体(KIR)介导的NK细胞同种反应性在清除白血病细胞(GVLR)、减弱移植物抗宿主反应(GVHR)和延长移植物存活时间中均起着重要的作用,可作为筛选供、受者的有力依据。本文拟对这一领域的研究进展作一综述。     

原发性肝癌与肝硬化患者外周血IL-2及NK细胞活性的研究

目的通过检测外周血IL-2水平和NK细胞活性,探讨原发性肝癌(PHC)和肝硬化(LC)患者的细胞免疫功能变化。方法采用MTT比色法检测41例PHC和57例LC患者外周血白细胞介素2(IL-2)的水平,采用流式细胞术(FCM)检测NK细胞活性。结果PHC患者外周血IL-2水平和NK细胞活性均明显降低(P<0.001),且较LC患者也明显降低(P<0.05);LC患者外周血IL-2水平和NK细胞活性明显降低(P<0.01)。结论PHC和LC患者外周血IL-2水平和NK细胞活性明显降低,检测上述两项指标对临床了解患者细胞免疫功能状态、预测病情变化和疗效具有一定的参考价值。     

Origin and functions of human natural killer cells

Summary Recent data have substantially modified our view of natural killer cells. Although maturation of natural killer cells occurs in the absence of a functional thymus, we have shown that clonogenic precursors capable of differentiating into mature CD3−16+56+ natural killer cells exist in CD3−4−8−16− populations isolated from human thymus. Analysis of peripheral bloodderived natural killer clones showed that they can lyse normal cells (e.g., phytohemagglutinin-induced blasts) isolated from some individuals. Importantly, natural killer clones isolated from single individuals displayed different patterns of cytolytic activity against a panel of normal allogeneic cells. These data suggested the existence of a natural killer cell repertoire. A number of observations have revealed that the expression of given HLA class I alleles protects target cells from lysis by different groups of natural killer clones. Evidence has been gained by genetic analysis of the determinants responsible for susceptibility/resistance to lysis by natural killer clones together with analysis, as target cells, of HLA-defective variants or HLA transfectants. Thus, natural killer cells were found to express a clonally distributed ability to recognize HLA class I alleles. The selection of new monoclonal antibodies directed against members of a novel family of natural killer specific p58 molecules allowed the identification of the putative natural killer receptors for different MHC class I alleles. Firstly, a correlation was established between the expression of given p58 molecules (e.g., EB6 and GL183) and the class I alleles recognized. Secondly, anti-p58 monoclonal antibodies restored the natural killer-mediated lysis of class I-protected cells. A similar effect was obtained by inducing modulation of p58 surface molecules with anti-p58 monoclonal antibodies. The implications of these receptor/ligand interactions in the physiopathological behavior of natural killer cells are discussed.     

Inhibitory receptors alter natural killer cell interactions with target cells yet allow simultaneous killing of susceptible targets.

Inhibitory receptors expressed on natural killer (NK) cells abrogate positive signals upon binding corresponding major histocompatibility complex (MHC) class I molecules on various target cells. By directly micromanipulating the effector-target cell encounter using an optical tweezers system which allowed temporal and spatial control, we demonstrate that Ly49-MHC class I interactions prevent characteristic cellular responses in NK cells upon binding to target cells. Furthermore, using this system, we directly demonstrate that an NK cell already bound to a resistant target cell may simultaneously bind and kill a susceptible target cell. Thus, although Ly49-mediated inhibitory signals can prevent many types of effector responses, they do not globally inhibit cellular function, but rather the inhibitory signal is spatially restricted towards resistant targets.     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养联合化疗对肺腺癌体外杀伤作用

目的 通过恶性胸腔积液获取成熟树突状细胞(DC),探讨恶性胸腔积液来源的DC与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养对CIK细胞的作用及两者共培养后联合奥沙利铂(L-OHP)对肺腺癌的体外杀伤作用.方法 收集20例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的胸腔积液,每例收集800～1 000 ml,双层聚蔗糖(Ficoll)密度梯度离心获得DC前体细胞,体外诱导培养收获成熟DC;分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),体外培养获得CIK细胞;DC与CIK细胞共培养;流式细胞仪鉴定表型;MTT法检测对肺腺癌的体外杀伤作用.结果 ①恶性胸腔积液中存在DC前体细胞,经体外细胞因子诱导培养后可获得成熟的DC,培养9天的DC表面标志物CD80、CD83、CD86及MHC-Ⅱ类分子HLA-DR与第0天比较明显增高,分别为(56.61±7.01) % vs (14.38±5.16)%,(58.85±7.05)% vs (18.49±9.43)%、(60.27±13.94)% vs (20.39±6.67)%、(70.97±8.96)% vs (41.36±8.57)%(均P＜0.01).②培养14天后,DC与CIK细胞共培养较单独CIK培养中CD3+/CD56+、CD3+、CD4+、CD8+细胞明显增多(均P＜0.01);对肺腺癌细胞杀伤作用明显增强(P＜0.01).③DC与CIK细胞共培养联合L-OHP治疗对肺腺癌细胞的杀伤率明显高于单独治疗(P＜0.01).结论 胸腔积液来源的DC前体细胞在体外诱导培养可获得功能正常的成熟DC,与CIK细胞共培养后促进CIK细胞增殖、增强其杀伤作用;两者共培养后联合L-OHP具有协同作用,对肺腺癌在体外有明显的抑制作用,为肺癌综合治疗提供了一定的理论基础.     

同种异体NK细胞对AML细胞体外杀伤活性及初步机制

目的探讨同种异体自然杀伤细胞(NK细胞)对急性髓系白血病(AML)细胞株KG1a的杀伤活性及其分子机制。方法以NK敏感的K562细胞株为对照,免疫磁珠法分离5例健康志愿者NK细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定在不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性,并用流式细胞仪检测KG1a细胞表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子和NKG2D的配体主要组织相容性复合体(MIC)A/B、ULBP1-3的表达情况。结果效靶比1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时NK细胞杀伤K562和KG1a细胞的活性不同,NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性较K562细胞明显减低(P<0.01);K562细胞低表达HLA-I类分子,高表达NKG2D配体MIC可溶性Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)、MICA有亲源性的蛋白(MICB)、ULBP1、ULBP2、ULBP3,而KG1a细胞高表达HLA-I类分子,低表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。结论同种异体NK细胞对AML细胞株KG1a的杀伤率低于K562细胞;其杀伤率不同的分子基础与其分子表面配体表达差异和HLA-I分子表达率不同有关。     

The rise of human stem cell-derived natural killer cells for cancer immunotherapy

Introduction: Natural killer (NK) cell therapy has been proven to be safe and clinically effective for the treatment of multiple cancers, in particular blood cancers. Most of the clinical trials use primary NK cells from peripheral blood or umbilical cord blood, or NK-92 cells. Each cell source is confined by limitations, such as donor dependence, low persistence in vivo, and its difficulty to genetically modify. Thus, there is an urgent need to explore novel NK cell sources for clinical use.

Areas covered: This article highlights the recent progress in utilizing stem cell-derived NK cells as anticancer therapies and strategies to improve their antitumor activities.

Expert commentary: Stem cell-derived NK cells are homogenous, easy to genetically modify on a clonal level, and can be expanded to clinical scale. They may therefore arise as an ideal population for developing off-the-shelf, standardized adoptive NK cell therapeutic products.     

Clinical development of natural killer cells expressing chimeric antigen receptors

Both natural killer (NK) cells and T cells demonstrate potent antitumor responses in many settings. NK cells, unlike T cells, are not the primary mediators of graft-versus-host disease (GVHD). Redirection of T cells with chimeric antigen receptors (CAR) has helped to overcome tumor escape from endogenous T cells. NK cells expressing CARs are a promising new therapy to treat malignancy. Clinical biomanufacturing of CAR NK cells can begin with NK cells derived from many different sources including adult peripheral blood-derived NK cells, cord blood-derived NK cells, cell line-derived NK cells, or stem cell-derived NK cells. Manufacturing protocols may include isolation of NK cells, activation, expansion, and genetic modification to express the chimeric antigen receptors. Clinical trials have tested both unmodified and CAR NK cells with encouraging results. The next stage in clinical development of CAR NK cells represents a highly exciting new frontier in clinical cell therapy as well as understanding basic NK cell biology. The purpose of this review is to provide the reader with a fundamental understanding of the core concepts in CAR NK cell manufacturing, specifically highlighting differences between CAR T cell manufacturing and focusing on future directions in the field.     

外周血自然杀伤T淋巴细胞和CD4＋自然杀伤T淋巴细胞对哮喘患儿发病的影响

目的：探讨外周血自然杀伤T淋巴细胞（NKT细胞）和CD4＋NKT细胞对哮喘患儿发病的影响。方法选取2008年1月至2012年12月住院治疗的哮喘病患儿150例（哮喘组）,另选160例体检健康的儿童作为健康对照组。收集研究对象外周静脉血标本,采用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞,应用免疫荧光标记和流式细胞术检测哮喘组和健康对照组儿童外周血NKT细胞和CD4＋NKT细胞的比例,并观察两类细胞与过敏指标总免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性细胞阳离子蛋白（ECP）的相关性。酶联免疫吸附试验检测外周血细胞因子白细胞介素（IL）‐4、IL‐10、干扰素‐γ（IFN‐γ）水平。比较两组间的差异。结果哮喘组患儿的NKT细胞和CD4＋NKT细胞比例均较健康对照组明显下降（P＜0．05）。NKT细胞、CD4＋NKT细胞的比例与总IgE、ECP均无明显相关性（P＞0．05）。外周血IL‐4水平较健康对照组明显升高（P＜0．05）,IL‐10水平明显下降（P＜0．05）,而IFN‐γ水平与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论NKT细胞和CD4＋NKT细胞数量降低下及所分泌细胞因子功能变化是导致哮喘发病的重要原因。     

自然杀伤T淋巴细胞对黑色素瘤细胞的免疫调节及杀伤功能实验研究

目的探讨自然杀伤T淋巴细胞(NKT细胞)在细胞免疫调节及杀伤功能中的作用。方法建立混合淋巴细胞培养(MLC)体系,B16F10-luc-G5细胞作为靶细胞,以总淋巴细胞为效应细胞。(1)调节效应实验以NKT细胞或CD4~+CD25~+T淋巴细胞为调节细胞,分为3组:NKT组、CD4~+CD25~+T组、靶细胞空白对照组;另设有1640空白对照组(RPMI1640溶液)。(2)杀伤效应实验以NKT或自然杀伤(NK)细胞为效应细胞,分为3组:NKT组、NK组、靶细胞空白对照组。混合培养24、48、72h后,通过活体成像系统检测该培养系统的靶细胞生物发光,以监测NKT细胞的调节及杀伤效应。结果 (1)调节效应实验:NKT组及CD4~+CD25~+T组测定光子数分别与两空白对照组比较,以及NKT组内培养24h与72h时测得光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)杀伤效应实验:NKT组及NK组与靶细胞空白对照组所测光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05);且培养24、72h时NKT组与NK组光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NKT细胞具有抑制总淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应,且抑制效应具有时间性,其调节作用较CD4~+CD25~+T淋巴细胞强。NKT细胞具有对靶细胞的杀伤效应,但较NK细胞弱。     

Rapid method for purification of CD56+ natural killer cells with preferential enrichment of the CD56bright+ subset

A rapid method for the purification of CD56⁺ natural killer (NK) cells with the preferential enrichment of the CD56^bright+ subset is described. The method is based on the adsorption of CD56⁺ cells indirectly stained with a biotinylated antibody on an avidin-coated column. The adsorbed CD56⁺ cells can then be squeezed out mechanically without damaging the viability or the function of the cells. Starting from peripheral mononuclear cells from adult donors, the recovery of the CD56⁺ cells was 11.9 ± 9.0% (n = 8), the purity 93.0 ± 4.9% (n = 10), and the enrichment factor 7.5 ± 1.7 (n = 8). Further phenotypic classification of the CD56⁺ cells into CD56^dim+ and CD56^bright+ cells showed a preferential enrichment of the CD56^bright+ phenotype with a recovery of 40.5 ± 19.6% (n = 8), a purity of 30.3 ± 13.2% (n = 8), and an enrichment factor of 29.8 ± 7.2 (n = 8). In conclusion, the described method allows the rapid purification of CD56⁺ NK cells with the preferential enrichment of the CD56^bright+ subset. © 1994 Wiley-Liss, Inc.